曲古抑菌素A对慢性髓细胞白血病细胞增殖与凋亡的作用及机制研究

该文研究了去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562及K562/G01增殖和凋亡的影响及机制。采用不同浓度TSA处理K562及K562/G01细胞,CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术、蛋白印迹法和DAPI染色检测细胞凋亡;蛋白印迹法检测细胞自噬相关蛋白及BCR-ABL/STAT5/c-Myc信号轴蛋白水平。结果显示,TSA显著抑制K562及K562/G01细胞的增殖;明显促进K562及K562/G01细胞的凋亡;TSA与伊马替尼(imatinib,IM)联用可更有效地杀伤CML细胞。TSA可抑制BCR-ABL/STAT5/c-Myc信号轴,降低c-Myc蛋白水平;增强CML细胞自噬,自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)可部分回复TSA引起的凋亡。综上,TSA通过抑制STAT5信号通路,降低c-Myc蛋白水平,抑制CML细胞增殖;增强CML细胞自噬,促进其凋亡。     

LY294002对CML急变期细胞中Wnt／β-catenin信号通路的影响及其效应

β-catening在慢性粒细胞白血病急变过程中发挥着重要作用,而其受BCR／ABLTL其下游信号通路调控的具体分子机制尚未完全阐明。该研究旨在探讨PI3K-AK聪号通路对慢粒急变期细胞的影响及其对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。采用P13K-AKT信号通路的靶向抑制剂LY294002作用于慢粒急变期K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blot检测pAKT（Thr308）的表达变化,RT-PCR和Western blot分别检测β-catenin及其下游靶基因c—myc、cyclinD1的mRNA和蛋白表达情况。结果显示,10,20,40μmol/L的LY294002作用细胞24h后,抑制了K562细胞的增殖以及克隆形成能力。该效应呈浓度依赖的方式。3种浓度的LY294002处理细胞后,PI3K—AKT信号通路明显被抑制,pAKT（Thr308）的蛋白表达明显减少;β-catenin的mRNA表达无明显改变,但其蛋白水平依次减少;β-catenin的下游靶基因c-myc、cyclin D1的mRNA和蛋白水平均明显降低。综上所述,抑制PI3K-AKT信号通路可抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力,其机制可能与抑制Wnt／β-catenin信号通路相关。     

胆固醇对K562及耐药株K562G细胞增殖及伊马替尼敏感性的影响

目的:探讨胆固醇对K562及耐药株K562G细胞增殖及伊马替尼(Imatinib,IM)敏感性的影响。方法:通过qRT-PCR方法检测K562和K562G细胞的胆固醇代谢途径相关蛋白的表达;以不同药物组合处理K562细胞、K562G细胞,采用CCK-8方法检测细胞增殖情况。结果:耐药K562G细胞胆固醇合成酶(人角鲨烯单加氧酶SQLE,细胞色素P450酶家族51亚家族A1 CYP51A1,固醇C5去饱和酶SC5D)表达下降、而低密度脂蛋白受体LDLR、固醇酰基转移酶SOAT1、ATP结合盒转运体A1 ABCA1表达量增加;0.5μg/m L、0.75μg/m L胆固醇处理K562细胞,其增殖率比对照组K562细胞分别增加(9.51±2.84)%和(19.88±3.00)%;使用阿托伐他汀(20μM)、GW3965 (20μM)、MβCD (10 m M)降低K562G细胞胆固醇使其增殖抑制率分别为(50.73±2.34)%,(49.42±1.13)%,(76.54±1.48)%;两种浓度胆固醇使IM处理的K562细胞增殖抑制率分别减少51.59%及53.80%;MβCD联合IM使K562及K562G细胞存活率分别降低至6.89%及23.34%。结论:IM抵抗的K562G细胞与IM敏感的K562细胞相比胆固醇代谢增强;增加胆固醇能够促进K562细胞增殖,降低细胞对IM的敏感性;MβCD可能通过降低胆固醇增强K562、K562G细胞对IM敏感性。     

JNK信号通路对蜂胶抑制白血病K562细胞增殖的调控作用

目的探讨JNK信号通路对蜂胶抑制K562细胞增殖过程的调控作用。方法体外培养K562细胞,用不同浓度蜂胶、c—Jun氨基末端激酶（c—JanN—terminalkinase,JNK）特异性抑制剂SP600125对白血病K562细胞进行处理,用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率,Western印迹检测JNK下游分子c—Jun以及磷酸化c—Jan（p-c-Jun）的变化。结果蜂胶作用K562细胞后,增殖抑制率、凋亡率显著升高,具有时间和剂量依赖性,并伴随p-c-Jun蛋白水平上调;加入SP600125能下调p-c-Jun的水平,显著提高蜂胶对K562细胞的增殖抑制率和凋亡率。结论JNK信号通路参与了蜂胶抑制K562细胞增殖过程的调控。抑制JNK活性可增强蜂胶对K562细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用。     

伊马替尼在斑马鱼血管和神经发育过程中的作用研究

目的利用斑马鱼胚胎透明便于活体成像的优势,研究伊马替尼在斑马鱼血管和神经发育过程中的作用。方法首先利用野生型斑马鱼胚胎检测伊马替尼对血管和神经早期发育阶段斑马鱼胚胎的安全浓度范围。在此浓度范围内对标记血管系统的转基因斑马鱼胚胎进行伊马替尼处理,并对血管和神经细胞共标的斑马鱼进行伊马替尼处理研究其对血管新生抑制的同时对神经元的影响。初步探讨伊马替尼抑制血管新生的分子机制。结果伊马替尼浓度低于100μg/m L对斑马鱼胚胎发育无致死作用。在此浓度范围,伊马替尼显著抑制斑马鱼节间血管(intersegmental vessel,ISV)的发育,包括ISV的腔化过程及内皮细胞的增殖。此外,伊马替尼对斑马鱼运动神经元及神经元前体细胞的发育过程无显著影响。并且,基因表达分析显示伊马替尼能够显著抑制vegfr2和pdgfrαmRNA表达。结论伊马替尼通过调控VEGF和PDGFR信号途径抑制斑马鱼血管新生。     

Prosaposin对细胞增殖和凋亡的调控及其分子机制

为研究鞘脂激活蛋白原(Prosaposin)对细胞增殖、细胞凋亡的调控及其可能的分子机制, 以pcDNA3.1 in NIH3T3阴性对照细胞株和过表达prosaposin的Psap-Myc in NIH3T3细胞株为模型, 噻唑蓝(MTT)比色法检测prosaposin对细胞增殖的影响; Annexin V联合碘化丙啶(Propidium iodide, PI)法检测血清饥饿状态下prosaposin对细胞凋亡的影响; Western blotting检测PI3K/Akt信号通路中蛋白磷酸化水平的变化; Real-time PCR检测PI3K/Akt信号通路下游靶分子表达水平的改变。结果表明prosaposin可活化PI3K/Akt信号通路, 提高Akt^Ser473的磷酸化水平, 抑制细胞周期抑制基因P27^KIP1的表达, 上调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达, 促进细胞周期从G1→S期进展; 诱导survival基因cIAP1、cIAP2的表达, 促进细胞存活。这些结果提示, prosaposin对细胞增殖和凋亡的调控可能是通过PI3K/Akt信号通路及其下游靶分子进行的。     

抑制c-Met信号通路可增加白血病细胞株对硼替佐米的化疗敏感性

本研究通过下调c-Met来观察白血病细胞株K562对抗肿瘤药物硼替佐米的敏感性,以此探索c-Met信号对白血病细胞株的增殖、凋亡等的影响,为临床上寻求治疗白血病新方案提供理论依据。本研究首先采用MTT实验初步判断硼替佐米对K562细胞的增殖能力的影响;再构建c-Met干扰载体转染K562细胞,并采用Real-time PCR检测干扰效果,筛选最适干扰质粒。然后采用筛选的c-Met干扰质粒转染细胞,分别使用MTT法检测细胞增殖能力、软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆能力、流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示硼替佐米对K562细胞的增殖具有显著抑制作用(p0.05),且这种抑制作用具有浓度依赖性。c-Met干扰质粒构建及干扰效果检测实验中发现,随着转染时间的延长,绿色荧光信号越来越强,表明转染效率越来越高。但Real-time检测结果发现,3个干扰质粒中仅c-Met-Homo-1和c-Met-Homo-3干扰质粒对c-Met的表达具有明显抑制效果(p0.05),且c-Met-Homo-3干扰质粒干扰效果较好。使用c-Met-Homo-3干扰质粒转染细胞后发现,c-Met下调能够显著增强硼替佐米对K562细胞增殖的抑制作用(p0.05),且增强硼替佐米对K562细胞克隆形成的抑制能力,同时增强了硼替佐米诱导的K562细胞的凋亡。本研究结论为,下调c-Met能够增加白血病细胞株K562对硼替佐米的化疗敏感性。     

低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制研究

目的初步探讨低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制。方法甲基纤维素集落形成实验检测低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成能力的影响;CCK-8法检测低浓度丰加霉素对K562细胞的生长抑制率;AnnexinV／PI双染流式细胞仪检测低浓度丰加霉素作用下的K562细胞凋亡率;PI单染流式细胞仪检测药物作用后细胞的周期分布改变;Western免疫印迹和实时定量PCR检测周期相关分子表达水平变化。结果低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞具有较强的集落形成抑制作用;可明显抑制K562细胞的生长,呈时间一剂量依赖性;尽管短时间（48h）的药物处理仅出现轻度的细胞凋亡和周期阻滞,但10nmol/L和30nmol/L的丰加霉素长时间（7d）作用后,K562细胞G0／G1期比例分别是（62．3±1．7）％和（76．9±0．7）％,与对照组（38．9±1．1）％相比差异具有高度统计学意义（P〈0．01）;低浓度丰加霉素长时间作用后诱导K562细胞周期相关分子P16蛋白水平和转录水平的高表达。结论丰加霉素在低浓度,长时间作用于人白血病K562细胞后,具有较强的集落形成抑制和生长抑制作用,此作用可能与诱导细胞周期相关分子p16高表达,导致细胞G0／G1期阻滞有关。     

羽扇豆醇通过抑制RhoA-ROCK1信号通路抑制结肠癌细胞增殖

该文探讨了羽扇豆醇(Lupeol)对人结肠癌HCT116和SW620细胞增殖的影响及相关作用机制。使用不同浓度的Lupeol处理HCT116和SW620细胞后,用MTT法检测细胞活性,CCK8法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blot检测相应mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光检测β-Catenin蛋白细胞内分布情况。通过构建shRNA敲低两种结肠癌细胞中RhoA,进一步研究Lupeol影响细胞增殖的分子机制。结果显示,Lupeol处理后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显下降,克隆形成能力受到抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞内RhoA、ROCK1、β-Catenin、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平均显著下降,β-Catenin蛋白胞质和胞膜上分布减少。敲低RhoA后抑制了细胞增殖,同时使得RhoA-ROCK1-β-Catenin信号通路蛋白受到抑制,β-Catenin蛋白胞质和胞膜上分布减少。综上所述,Lupeol可通过抑制RhoA-ROCK1信号通路,抑制β-Catenin蛋白表达,进而抑制HCT116和SW620细胞增殖,Lupeol有望成为临床结肠癌治疗的新药物。     

蛇床子素对人胶质瘤U251细胞抗增殖作用的研究

目的:研究蛇床子素对人胶质瘤U251细胞的抗增殖作用和可能的机制.方法:不同浓度蛇床子素处理U251细胞后,MTT法检测细胞活力,流式细胞法检测细胞周期和凋亡情况.结果:①蛇床子素显著抑制U251细胞的增殖.②蛇床子素诱导U251细胞发生G2/M期阻滞和凋亡.③蛇床子素处理后的U251细胞PI3K/Akt信号通路活性受到明显抑制.结论:蛇床子素通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制人胶质瘤U251细胞的增殖.     

胡桃楸提取液对肿瘤细胞细胞周期的影响

目的考察胡桃楸提取液对Hela和K562细胞周期的影响。方法用流式细胞仪分析胡桃楸提取液对Hela、K562细胞细胞周期的影响。结果胡桃楸提取物体外作用于Hela细胞可引起细胞周期在S期的停滞,这种效果随药物浓度和作用时间的增加而增加,胡桃楸提取物体外作用于K562细胞,可引起细胞周期在G1期的停滞,随药物浓度的增加而增加。结论胡桃楸提取液对Hela细胞的生长抑制作用可能通过S期阻滞实现,对K562细胞抑制作用可能通过G1期阻滞实现。     

奥美拉唑诱导非小细胞肺癌细胞对新型分子靶向药物仑伐替尼的耐受

目的:检测奥美拉唑对新型分子靶向药物仑伐替尼杀伤非小细胞肺癌(NSCLC)的影响并阐明其分子机制。方法:体外培养人NSCLC细胞系A549和H460,用奥美拉唑处理细胞,检测奥美拉唑对芳香烃受体(AhR)转录因子活性及下游基因表达的影响;在此基础上用奥美拉唑及仑伐替尼处理A549、H460细胞,检测奥美拉唑对仑伐替尼杀伤A549、H460细胞的影响;培养A549、H460细胞接种免疫缺陷裸鼠后,灌胃给予动物奥美拉唑和仑伐替尼,确定奥美拉唑对仑伐替尼抑制A549、H460细胞皮下肿瘤形成的影响。结果:奥美拉唑能够在A549、H460细胞中上调AhR的转录因子活性及下游基因表达;仑伐替尼能够剂量依赖地杀伤A549、H460细胞,用奥美拉唑处理A549、H460细胞能够显著下调仑伐替尼对细胞的杀伤作用;裸鼠成瘤实验显示,口服给予裸鼠奥美拉唑能够下调仑伐替尼对A549、H460细胞在裸鼠皮下的成瘤的杀伤作用;分子机制实验显示,奥美拉唑以AhR依赖的方式诱导A549、H460细胞对仑伐替尼的耐受作用。结论:奥美拉唑诱导非小细胞肺癌细胞A549、H460对分子靶向药物仑伐替尼的耐受。     

人参总皂苷对K562细胞STAT3表达的影响

目的:研究人参总皂苷(TSPG)体外作用k562细胞后STAT3蛋白在细胞中的表达、分布情况和STAT3通路在K562细胞分化中的作用和相关机制.方法:TSPG(200μg/ml)体外作用K562细胞不同时间,采用免疫细胞化学法、ELISA法、Western blotting法、激光共聚焦法检测K562细胞中STAT3表达、分布情况.结果:6h胞浆内STAT3蛋白吸光度0.306±0.038,12h降为0.170±0.037,之后逐渐回升,胞核内变化趋势则相反;免疫细胞化学法显示TSPG作用细胞12h,胞浆内呈浅棕色,胞核内呈深棕色;Westernblotting法检测列STAT3与β-actin吸光度比值胞浆内12h最低,胞核内最高;共聚焦观察TSPG作用细胞12h,胞浆内绿色荧光标记减少,核内绿色荧光标记增多,与红色细胞核颜色叠加呈现橙色.结论:TSPG作用K562过程中,能诱导STAT3由浆向核内转移,提示TSPG可能在JAK-STAT信号转导通路中,对促进K562细胞向成熟方向分化发挥重要作用.     

Spautin-1通过抑制自噬可增强舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡

目的:研究spautin-1(一种自噬抑制剂)是否能抑制舒尼替尼诱导的肾癌细胞的自噬以及对舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡的影响。方法:以肾癌细胞系786-O细胞为模型,Western Blot检测spautin-1对舒尼替尼诱导786-O细胞自噬的影响;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测spautin-1和舒尼替尼对786-O细胞增殖的影响;应用流式细胞术,检测spautin-1对舒尼替尼诱导的786-O细胞凋亡的影响;Western Blot检测spautin-1的促凋亡作用与PI3K/AKT/GSK3β信号通路及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的关系。结果:与舒尼替尼单独处理组相比,spautin-1能通过降低Beclin-1的表达显著抑制舒尼替尼在786-O细胞中诱导的自噬;Spautin-1和舒尼替尼联合作用明显增强舒尼替尼对786-O细胞增殖的抑制作用;Spautin-1能进一步增强舒尼替尼诱导的786-O细胞的凋亡;Spautin-1和舒尼替尼联合处理786-O细胞时,可以显著降低p-AKTSer473和p-GSK3βSer9的蛋白表达水平,增强GSK3β的活性,进而下调Bcl-2、Mcl-1的表达。结论:Spautin-1能通过抑制AKT活性并活化GSK3β,进一步降低抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达,增强舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡。     

DADS 上调K562 细胞p21WAF1 表达对细胞生长阻抑和凋亡 的实验研究

目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)对体外培养的人白血病细胞系K562细胞生长阻抑和凋亡作用及机制。方法:采用MTT分析法检测细胞活性、流式细胞术分析细胞周期及凋亡率、免疫组化检测p21WAF1基因表达。结果:1).DADS在10mg/L～80 mg/L范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖效应;2).不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,细胞周期发生了变化:DADS可以将K562细胞阻滞于G2/M期;3).DADS浓度在10mg/L～80mg/L时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,有显著的统计学意义(P<0.05或P<0.01);4).用浓度分别为0mg/L,20mg/L,40mg/L,80mg/L处理K562细胞24h后,p21WAF1蛋白表达上调,有统计学意义(P<0.05或P<0.01),溶媒组和阴性对照组无差别(P>0.05)。结论:DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用。其作用的可能机制与上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21WAF1表达,从而诱使k562细胞阻滞于G2/M期有关。     

长链非编码RNA Linc00673过表达对胃癌MGC-803细胞增殖与凋亡的影响*

目的: 探讨长链非编码RNA Linc00673过表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法: 将重组慢病毒表达质粒pLVX-Linc00673和对照空载体质粒pLVX-NC在293T细胞中进行慢病毒包装与扩增,将重组慢病毒转染胃癌细胞MGC-803建立稳定过表达 Linc00673的细胞系,实时荧光定量PCR方法检测Linc00673基因的表达; MTT实验和克隆形成实验观察细胞的生长增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;qPCR检测细胞周期相关调控基因表达;免疫印迹法检测PI3K/Akt信号通路关键分子及肿瘤增殖相关蛋白的表达。结果: Linc00673在胃癌细胞系MGC-803、BGC-823和AGS中的表达量显著高于正常胃粘膜细胞GES-1(P＜0.05)。建立了稳定过表达Linc00673的MGC-803细胞系,Linc00673的表达量比对照空载体组高200倍。Linc00673过表达促进MGC-803细胞增殖和克隆形成(P＜0.05),抑制细胞凋亡并影响细胞周期G1→S期进程(P＜0.01);Linc00673过表达可影响MGC-803细胞周期调节基因CCNG2、p19和CDK1的表达;免疫印迹结果显示,Linc00673过表达不仅促进PI3K/Akt信号通路关键分子pAKT及其下游靶点NF-κB和Bcl-2蛋白的表达,而且上调肿瘤相关因子β-catenin和EZH2蛋白的表达。结论: Linc00673过表达可能通过PI3K/Akt信号通路促进MGC-803细胞增殖、抑制凋亡。     

三氧化二砷对K562/A02 细胞的凋亡及细胞周期的影响

目的:研究三氧化二砷对多药耐药急性白血病细胞株K562/A02凋亡与细胞周期的影响及可能机制。方法:取阿霉素(Adr)的耐药白血病细胞株分为未加药的对照组及加入不同浓度的三氧化二砷(其终浓度为4.0μmol/L、5.0μmol/L)组,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,Western blot方法检测不同浓度三氧化二砷对K562/A02细胞核NF-κBp65蛋白水平。结果:与对照组比较,三氧化二砷可显著增加Adr对K562/A02细胞凋亡率,阻滞细胞于G0/G1期,降低K562/A02细胞胞核中NF-kB p65的表达(P均<0.05)。结论:三氧化二砷可能是通过抑制NF-kB的胞内活化转位,从而促进K562/A02细胞凋亡及抑制细胞增殖。     

人参总皂苷对人红白血病细胞株（K562）中STAT5表达的影响

旨在探讨人参总皂苷对K562细胞STAT5表达的影响.MTT法显示TSPG对K562细胞增殖抑制程度呈剂量与时间依赖性增加,且呈正相关关系.流式细胞术表明TSPG能阻止K562细胞从G0/G1期向S、G2/M期移行.激光共聚焦显微镜观察可见,TSPG 200 mg/L作用K562细胞24 h,胞浆中的STAT5荧光强度增加,而胞核内STAT5荧光强度减弱.Western blotting结果显示,TSPG作用K562细胞6 、24 、48 h,胞核中STAT5表达较对照组减少,TSPG作用72 h胞核蛋白中STAT5表达增加;TSPG作用K562细胞6 、12、24、48、72 h,胞浆内STAT5表达增加.TSPG能减少K562胞核中STAT5的表达,这可能是TSPG抑制K562细胞增殖的作用机制之一.     

阿帕替尼对人肝癌细胞增殖及凋亡的作用机制研究

目的:探讨阿帕替尼抑制肝癌细胞增殖促进凋亡的作用机制。方法:选取肝癌细胞系SNU739、HepG2,以CCK-8细胞增殖实验、平板克隆实验测定阿帕替尼对肝癌细胞增殖及克隆形成能力的影响;流式细胞术检测阿帕替尼对肝癌细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法检测阿帕替尼影响肝癌细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase3的表达情况。结果:与对照组相比,阿帕替尼可显著抑制肝癌细胞增殖(P0.05)。平板克隆实验提示与对照组相比,10μM和20μM阿帕替尼组肝癌细胞克隆数明显减少(P0.05)。流式细胞术结果提示10μM和20μM阿帕替尼处理组细胞凋亡率明显增加(P0.05)。蛋白免疫印迹法结果显示经阿帕替尼处理的肝癌细胞,促凋亡蛋白Bax及Caspase3的活性片段Cleaved-caspase3表达水平显著上调,抗凋亡蛋白Bcl-2显著下调(P0.01)。结论:阿帕替尼通过调节肝癌细胞凋亡相关蛋白从而抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡。