玉米素核苷的酶标免疫测定法

牛血清白蛋白-玉米素核苷(BSA-ZR)的兔抗血清对玉米素核苷具有很高的亲和性,而且专一性强,除了玉米素外,对其它一些细胞分裂素如激动素(KT)的交叉反应甚微。用辣根过氧化物酶(HRP)作为标记物的酶标免疫法,由于它的灵敏度高,相当于几十毫克量的样品就可以测出细胞分裂素的含量。测定范围在0.25—50pmol之间,测定范围较广。由于该方法专一性高,植物组织的粗提取物可以直接用于测定。避免了提取分离的繁琐程序,使得测定方法较简便、快速,可成批进行,适用于一般实验室。用该方法测得风信子(Hyacinthus orientalis L.)各部分的细胞分裂含量(以玉米素核苷计)在10—60×10~(-9)克/克鲜重,即10—60ng/g F.W.。     

云南山楂中吲哚乙酸、脱落酸、玉米素和玉米素核苷的内源水平及其生根率

以云南山楂(Crataegus scabrifolia (Franch.)Rchd.)几个株系的成年树和实生苗的离体培养芽条为材料,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定了它们的叶片中吲哚乙酸(IAA),脱落酸(ABA),玉米素和玉米素核苷(Z+ZR)的内源水平,探讨了这三种激素及其之间的平衡与生根率的相关性。结果发现:1.IAA内源水平之差异存在于株系间。2.内源(Z+ZR)在株系间无显著差异,而幼树发育至成年树的过程中,与IAA的平衡是多样的,同成年树的生根率似有以下相关性,当IAA水平降低,同时(Z+ZR)水平升高,有利于生根,反之则抑制生根。3.ABA内源水平无论成年或幼年树都呈低水平且无显著差异。     

褐飞虱胁迫下两种水稻不同生育期玉米素核苷含量动态

应用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）研究了在褐飞虱胁迫下镇稻2号（粳稻）和协优63（籼稻）抽穗期和灌浆期水稻叶片和根中玉米素核苷（zeatin riboside, ZR）含量变化情况。结果表明, 镇稻2号抽穗期ZR含量变化比灌浆期对褐飞虱侵害更为敏感,密度分别为15、30、60、120头/株的褐飞虱侵害水稻抽穗期3、6、9天后,叶片和根中ZR含量显著下降;灌浆期除各个褐飞虱密度侵害9天叶片中ZR含量和120头/株褐飞虱密度侵害9天根部ZR含量显著下降外,其他处理根和叶片中ZR含量下降不明显。协优63抽穗期受褐飞虱侵害后体内ZR的变化不同于镇稻2号,密度分别为15、30、60头/株的褐飞虱侵害3天后,叶片中ZR含量明显升高;在灌浆期,除30、60、120头/株褐飞虱密度侵害6天和120头/株褐飞虱密度侵害9天叶片中ZR含量有显著增加外,其他处理变化不明显。表明不同品种水稻在不同密度褐飞虱侵害下对根和叶片中ZR含量有不同的影响。     

抗天花粉蛋白IgE单抗的抗独特型抗体及其鉴定

为了研究抗独特型抗体对天花粉蛋白特异的IgE反应的调节作用,建立了分泌针对天花粉蛋白的IgE单抗的独特型决定簇的大鼠-小鼠异种杂交瘤细胞株(6 C_5)。以分泌抗天花粉蛋白IgE单抗的小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞株(TE—1)诱生的腹水,通过免疫亲和层析,分离得到TE-1单抗免疫Wistar大鼠。将免疫大鼠脾细胞与小鼠骨髓细胞(NS-1)进行异种间细胞融合,通过严格的筛选和克隆化,最终得到3侏生长稳定、连续分泌抗体的异种杂交瘤细胞株(6 C_5、3 E_3和8 G_6),并能顺利地经受冰冻保种和复苏。用间接ELISA法对所获得的单抗进行鉴定,即比较三个单抗对下列包被抗原的反应性,其中包括TE-1(天花粉蛋白特异的IgE单抗)、3A 12(天花粉蛋白特异的IgA单抗)、ADNP和142(抗DNP IgE单抗,来自两个不同的杂交瘤株),以及M Ig(正常小鼠血清Ig)。结果表明6C_5单抗只与TE-1呈阳性反应,对其余各种包被抗原的反应均呈阴性,说明杂交瘤株6C_5具有抗TE-1单抗独特型决定簇的特异性,实验经多次重复,因此可以结论,成功地建立了一株能分泌抗独特型抗体的异种淋巴细胞杂交瘤株。此外,8G_6与所有包被抗原均呈强阳性,说明它具有抗各类小鼠Ig共同决定簇的特异性。3 E_3的特异性尚未最终确定。在方法学上的改进包括细胞融合时所用的HAT选择培液中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的剂量较常量加倍,而氨基喋呤的剂量较常量减半。并且缩短在HAT培液中和HT培液中培养时间。这些可能为杂种淋巴细胞杂交瘤株的建立提供了有利条件。为了保证ELISA检测的特异性,作包被抗原的TE-1单抗与免疫大鼠用的TE-1单抗的来源不同,它来自无血清培养液培养的TE-1的上清液。同时,间接ELISA法所采用的酶联第二抗体(兔抗大鼠Ig),通过小鼠Ig的吸收等,证明其与小鼠Ig无交叉反应后才使用。     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体和免疫酶技术研究

采用蛋白质连接技术合成玉米赤霉烯酮抗原,免疫Balb/c鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术建立六株分泌抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体杂交瘤细胞株。间接酶联免疫吸附试验测定细胞上清抗体效价为1:2084(4H8)、1:256(6H9、4H3、2H5、2C8)、1:16(3F10);腹水抗体效价为10~9(4H3、4H8)、10~8(2H5)、10~7(6H9)、10~5(3H10)。竞争间接酶联免疫吸附试验测定六株单克隆抗体对玉米赤霉烯酮的敏感度为0.3—0.8ng/ml。六株抗体与玉米亦霉烯醇的交叉反应率为1.3—9.0％。六株单克隆抗体均属IgG类。细胞体外传代培养和冻存复苏后分泌抗体稳定。纯化抗体在37℃保存12天稳定,-30℃保存90天抗体滴度不变。用该抗体建立竞争间接酶联免疫吸附试验检测掺合玉米赤霉烯酮的玉米、小麦、饲料,平均回收率分别为105％、90％、103％,平均批间变异系数为5.8％、2.8％、6.8％,批内变异系数为3.8％、12.7％、15.7％。样品中玉米赤霉烯酮掺合量与竞争间接酶联免疫吸附试验检出量有良好相关性(r≥0.9996)。     

吡咯喹啉醌对烟草幼苗中IAA和玉米素加玉米素核苷及核酸含量的影响(简报)

经吡咯喹啉醌（PQQ）喷施叶片和灌根处理的烟草幼苗中IAA、玉米素（z） 玉米素核苷（ZR）和核酸含量明显增加,根系活力增大。     

P—选择素凝集素—EGF功能域的克隆、表达及其单克隆抗体制备

制备特异性抗人P 选择素的凝集素 表皮生长因子 (L EGF)功能域的单克隆抗体。利用特异引物 ,通过RT PCR从外周血血小板中扩增出人P 选择素的L EGF功能域基因 ,将其克隆至pET42b( )载体中 ,测序验证后转染大肠杆菌BL2 1,经诱导表达了C端融合 6×His的蛋白质。融合蛋白质经分离纯化后 ,免疫Balb/c小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,通过间接ELISA筛选阳性克隆。获得 3株可稳定分泌抗L EGF功能域单抗的杂交瘤细胞株 (B10、F3和H5 )。其亚型分别为IgG2 、IgG1和IgG3;轻链均为κ型。所获的单抗对LPS刺激活化的人脐静脉内皮细胞均有特异性结合反应 ,并可在体外阻断经凝血酶激活的血小板与中性粒细胞间的粘附。表明所获的单抗可特异性识别结合天然P 选择素 ,具有体外抗活化血小板与中性粒细胞粘附的功能 ,为进一步应用此单抗进行P 选择素结构和功能及抗粘附治疗研究提供了实验基础。     

促胰液素和生长抑素经血管灌流大鼠离体胃抑制胃酸分泌

本工作利用血管灌流离体大鼠胃研究促胰液素和生长抑素对泌酸的影响及其与内源性前列腺素E(PGE)和前列环素(PGI_2)释放的关系。结果表明:(1)促胰液素和生长抑素都能有效地抑制五肽胃泌素(G_5)促进胃酸分泌的作用,消炎病可翻转这种抑制作用。(2)促胰液素能显著促进PGE和PGI_2代谢产物6-酮-前列腺素F_(1α)(6-Keto-PGF_(1α))释放;生长抑素只能促进FGE释放。消炎痛分别阻断促胰液素对PGE和6-keto-PGF_(1α)释放及生长抑素对PGE释放的促进作用。上述结果提示:(1)促胰液素的抑酸效应由促进PGI_2和PGE释放介导;(2)生长抑素的抑酸效应通过促进PGE释放介导。     

酶联免疫法(ELISA)测定内源植物激素

用酶联免疫法测定植物激素兼备灵敏、专一、快速等特点。在聚苯乙烯微量滴定板上依次分别连接上单克隆抗体(mAb)、抗原和酶标抗原,再通过酶促催化底物反应的量来确定非标记抗原(植物激素)的量,测定激素的极限量可达0.01pmol。本文介绍了吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA_4)、玉米素核苷(ZR)、异戊烯基腺嘌呤(iPA)和脱落酸(ABA)的ELISA程序。在植物材料测定中,发现鸭跖草表皮气孔与其ABA、iPA的含量有关。     

人B淋巴细胞分化的表面标志

抗人B细胞表面抗原单克隆抗体的制备促进了B细胞分化的表面标志的研究。迄今为止已发现的泛B标志有B_1、B_2、B_4、L_(23)、L_(25)、L_(27)、L_(30)、FMC_1等,与B细胞活化有关的标志有B_5、HB-5、L_(29)、BLAST-1、BLAST-2、Leu8、DR、DS、4F_2、5E_9、IL-2受体等。文中还就B_1、B_2、B_4、CALLA、胞浆μ链等与B细胞分化及功能的关系作了介绍。     

A REINTERPRETATION OF THE ONTOGENY OF THE ASCOCARP OF SPECIES OF THE ERYSIPHACEAE

A study of four species of Erysiphaceae (Uncinula salicis, Podosphaera leucotricha, Erysiphe cichoracearum, and Microsphaera diffusa) revealed that the binucleate stages of the ascocarp are initiated in a similar manner to those of Diporotheca rhizophila Gordon & Shaw. The “appendages” developing on immature ascocarps are considered to be receptive hyphae. Appendages characteristic of mature ascocarps are produced much later. Lysis of certain centrum cells occurs, and asci are initiated from some of the remaining binucleate centrum cells. Resorption of centrum cells by the asci is supported by this investigation, corroborating Björling's earlier studies on Erysiphe graminis.