用碱水解的方法测定蛋白质的消光系数

在蛋白质结构与功能的研究中,有时蛋白质溶液的浓度是一个重要的参数.紫外吸收法是测定蛋白质溶液浓度最为常用的方法,而已知蛋白质的消光系数是用紫外吸收法准确测定蛋白质溶液浓度的前提条件.在0.1 mol/L NaOH溶液中,蛋白质发生碱性水解,因而蛋白质溶液可以看作是色氨酸和酪氨酸的二元体系.以此为依据,给出了用碱水解的方法测定蛋白质消光系数的方法.这一方法操作步骤简便易行,蛋白质消光系数的计算公式简单明了.用这一碱水解的方法分别测定了几种氨基酸组成不同的蛋白质的消光系数,与文献数据对照,得到了令人满意的结果,测定误差均小于±5％.     

用邻苯三酚红钼络合显色法测定临床样品蛋白质含量

长期以来,实验室对蛋白质含量甚微的尿液、脑脊液蛋白质定量分析缺乏满意的方法。一些文献报道的微量蛋白定量法,均有较严重的缺点。Bradford、Pierce等先后报道用考马斯亮兰G-250染料结合法测定微量蛋白质有不少优点,但测定蛋白质浓度的线性范围不宽,蛋白质浓度低时线性较差,比色皿及实     

原位化学切割法对油桐尺蠖核型多角体病毒两种相似多肽的比较研究

油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)自1978年分离以来,对其形态结构、形态发生、毒力测定、血清学、理化特性、安全性试验、剂型研究及大田应用等已进行了广泛的研究,其基因组物理图谱也已构建。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)研究BsNPV蛋白质时发现,多角体蛋白与病毒粒子的一种主要蛋白质的分子量非常接近,     

蛋白质及多肽的C端分析

本文采用（异）硫氰酸化学法,以乙酸酐为活化试剂,四丁铵硫氰酸为偶联试剂,溴甲基萘为烷化试剂,将蛋白质或多肽的Ｃ端依次转化并裂解为ＡＴＨ－氨基酸,在２５４ｎｍ进行检测。分析了若干种天然的、基因工程表达的蛋白质或多肽,测定了不同长度的Ｃ端序列,并确证了Ｃ端的修饰及突变情况。为蛋白质和多肽的完整性、均一性,基因工程产品及合成多肽的质控提供了重要的Ｃ端信息。目前,可在１￣２ｎｍｏｌ水平上测定了３￣５个Ｃ端     

结构基因组学中的衍射相位问题

简要介绍了结构基因组学研究中,用于测定蛋白质结构的X射线分析在解决衍射相位问题方面的最新进展。     

蛋白质二级结构的真空紫外圆二色性研究

利用同步辐射真空紫外圆二色谱仪和特制的样品池,测定溶液中蛋白质的真空紫外圆二色谱,测定波长低至175nm,并应用一种新的计算法分析计算了蛋白质5种二级结构的含量,所得结果与用X射线衍射法测定的结果一致.讨论了获得好的真空紫外圆二色谱的几个重要因素.结果表明,真空紫外圆二色法是目前测定溶液中蛋白质二级结构的较好方法之一.     

宽叶独行菜的化学成分研究

对宽叶独行菜不同物候期的蛋白质、１７种氨基酸进行了分析测定。同时对其不同器官中的蛋白质、氨基酸及１７种矿质元素和氨基酸含量的动态规律进行了研究,讨论了其作为青饲料的开发利用前景。     

稀有氨基酸的测定

<正> 本章讨论几种稀有氨基酸的测定。这些氨基酸在相当少的几种蛋白质中存在。它们的测定存在着特殊的困难或特性,然而,它们的测定方法对今后可能将是重要的。稀有氨基酸的测定蛋白质中除了已遇到的普通氨基酸外,还有许多非普通氨基酸存在,例如,这些非普     

介质表面修饰对蛋白质芯片固定率和反应性的影响

评价最常用的二种玻璃表面修饰方法对蛋白质芯片质量的影响．选择蛋白质的固定效率、反应性作为检测指标,对戊二醛修饰法和多聚赖氨酸修饰法进行比较,由机械手将探针蛋白质分别固定在两种玻片上,靶蛋白用荧光染料Cy3标记,两种修饰方法的芯片均可使蛋白质保持较好的固定效率和反应活性．由共价键偶联的醛基修饰玻片制备的蛋白质芯片不仅有更高的反应活性,而且图象佳,但背景偏高、用醛基修饰的玻片制备蛋白质芯片是较理想的选择、     

植物蛋白质S-亚硝基化修饰的检测与分析

S-亚硝基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式, 是指一氧化氮(NO)基团共价连接至靶蛋白特定半胱氨酸残基的自由巯基, 从而形成S-亚硝基硫醇(SNO)的过程。S-亚硝基化修饰广泛存在于各有机体中, 通过改变蛋白质生化活性、稳定性、亚细胞定位以及蛋白质-蛋白质相互作用等机制而调控不同的生物学过程或信号通路。在蛋白质S-亚硝基化检测分析方法中, 最为广泛使用的是生物素转化法(biotin switch assay), 其基本原理是首先封闭未被修饰的自由巯基, 进而将被修饰的SNO基团特异地还原为自由巯基并使用生物素将其特异标记。被生物素标记的半胱氨酸残基(即被修饰位点)可进一步通过蛋白质免疫印迹和/或质谱等方法进行检测分析。该文详细描述了植物蛋白质样品的体内和体外生物素转化法的实验流程, 并对实验过程中的注意事项进行了讨论。     

桐柏野大豆种子粗蛋白质测定及方法探讨

野大豆因其高蛋白、低油脂含量等特点,越来越引起人们的关注。为了快速精确测定野大豆粗蛋白质含量,采用半微量凯氏法和消化—分光光度法对采自桐柏的8个野大豆样品进行蛋白质含量的测定,并分析比较两种测定方法。试验结果显示,采用消化—分光光度法测定的野大豆的蛋白质含量与经典的半微量凯氏法测定结果一致。半微量凯氏法适用范围广,测定结果精确,而消化—分光光度法相对于半微量凯氏法简化了试验操作,缩短了分析时间,又没有特殊的仪器设备和试剂要求,更便于普及应用。     

蛋白质折叠、动力学以及蛋白质-配体结合的物理化学基础

蛋白质是生物体的重要组成部分并参与细胞内几乎所有的生物学过程.随着越来越多物种基因组序列的测定,准确理解基因产物的功能并探索蛋白质功能多样性的原因,已经成为当前的研究热点.为了研究蛋白质的功能,已有大量蛋白质的静态三维结构被测定.但是,蛋白功能最终受其动力学行为所控制,这包括折叠过程、构象波动、分子运动以及蛋白质-配体相互作用等.基于自由能图谱理论,本文深入讨论了蛋白质动力学的底层物理化学机制,并回答了以下问题:蛋白质为什么能够折叠、以及如何折叠成其天然三维结构?为什么蛋白质的动力学特征是固有的?其动力学行为如何控制蛋白质的功能?讨论结果将有助于后基因组时代生命科学研究中蛋白质结构-功能关系的理解.     

菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinesis）血浆中防卫素的纯化及其抑菌功能

经硫酸铵沉淀、凝胶排阻层析和离子交换层析 ,自菲律宾蛤仔 (Ruditapesphilippinnesis)血浆中分离纯化得到一种新的蛋白质———防卫素RPD 1(Ruditapesphilippinesisdefensin 1)。经SDS PAGE分析 ,其估计分子量为 2 4 .8kD ;经ABI4 73蛋白质自动测序仪测定 ,其N端部分氨基酸序列为AVPDVAFNAYG。在NCBI和EBI EMBL两个蛋白质数据库中未发现任何与该蛋白质有同源性的已知蛋白质。该蛋白质对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抗性。对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)、枯草杆菌 (Bacillussubtilis)、四联微球菌 (Micrococcustetragenus)、大肠杆菌 (Escherichiacoli)、副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)和鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)的最小抑菌浓度分别为 9.6mg L、76 .8mg L、38.4mg L、76 .8mg L、19.2mg L和 19.2mg L。实验结果证明RPD 1为一种新的防卫素蛋白质。     

NaCl溶液体系溶菌酶结晶相图的测定

溶液相图测定是研究蛋白质晶体生长的一重要方法。使用微量配液（Ｍｉｃｒｏｂａｔｃｈ）自动化结晶技术，对鸡蛋清溶菌酶－ＮａＣｌ溶液体系的相图进行了较精细的测定，获得该体系的精细相图。该结果反映了蛋白质结晶相图的一般分布规律，并揭示了一些细节特点。实验还表明，微量配液法自动化结晶技术便于这类相图测定，而后者又可提供优化蛋白质结晶条件的有用信息。     

简易连续密度梯度凝胶电泳

目前,圆盘电泳由于其操作的简便和测定的灵敏已在生化研究中广泛地应用。但是,对于一些含有多种蛋白质分子的样品来讲,一种胶的浓度往往不能同时适合于各种蛋白质分子的分离。连续密度梯度凝胶由于其凝胶的浓度可在一定范围内(如4％—12％)连续地逐步增加,故颇能得到良好的     

细菌内毒素对A群C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖蛋白质含量测定结果的影响

目的 探究Lowry法测定A群C群脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)多糖原液蛋白质含量时,细菌内毒素对Lowry法的干扰情况。方法 根据《中华人民共和国药典》2015版(三部)规定的方法,测定含不同浓度的细菌内毒素的A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量,对检测结果进行分析。以细菌内毒素为干扰物质,设计3种方法进行验证,对验证结果进行离散系数,即CV值分析,确定干扰限值。结果 当细菌内毒素含量较高时,A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量明显增高,该结果可能为假阳性。验证试验结果显示,当溶液中细菌内毒素浓度达到0.313EU/mL时,会对检测结果产生干扰,浓度越高,干扰程度越高。结论 为获得准确的检测结果,当细菌内毒素浓度达到干扰限值时,应先消除干扰,再测定蛋白质含量。     

江浙蝮蛇毒L—氨基酸氧化酶的分离纯化及其性质鉴定

从江浙蝮蛇粗毒中经SephadexG 15 0凝胶过滤、DEAE SepharoseCL 6B以及FPLCSuperose 12分离出一种蛋白质。该蛋白质经SDS PAGE测定在非还原和还原条件下分子量均为 5 7kD左右 ,等电聚焦测得其等电点约为 4.9。生物活性测定表明该蛋白质具有L 氨基酸氧化酶活性 ,能够抑制由ADP和胶原所引起的血小板聚集 ,具有抑制革兰氏阴性菌的作用 ;并且具有细胞毒性 ,能够诱导细胞凋亡     

植物蛋白质S-亚硝基化修饰的检测与分析

S-亚硝基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式, 是指一氧化氮(NO)基团共价连接至靶蛋白特定半胱氨酸残基的自由巯基, 从而形成S-亚硝基硫醇(SNO)的过程。S-亚硝基化修饰广泛存在于各有机体中, 通过改变蛋白质生化活性、稳定性、亚细胞定位以及蛋白质-蛋白质相互作用等机制而调控不同的生物学过程或信号通路。在蛋白质S-亚硝基化检测分析方法中, 最为广泛使用的是生物素转化法(biotin switch assay), 其基本原理是首先封闭未被修饰的自由巯基, 进而将被修饰的SNO基团特异地还原为自由巯基并使用生物素将其特异标记。被生物素标记的半胱氨酸残基(即被修饰位点)可进一步通过蛋白质免疫印迹和/或质谱等方法进行检测分析。该文详细描述了植物蛋白质样品的体内和体外生物素转化法的实验流程, 并对实验过程中的注意事项进行了讨论。     

RGD-葡激酶的凝胶过滤层析法复性及其纯化

构建的溶栓和抗栓双重功能的RGD-葡激酶突变体(RGD-Sak)在大肠杆菌中高表达,目的蛋白质以包涵体形式存在。为获得有活性的蛋白质,需要对包涵体进行变复性。利用凝胶层析方法对包涵体中RGD-Sak进行复性,并与稀释复性法进行比较,发现凝胶柱复性方法具有操作周期短、简便、成本低而高效等优点。复性后蛋白质用Q-Sepharose FF离子交换进一步纯化,纯度达95%,酪蛋白凝胶板活性测定表明两种复性法得到的蛋白质比活性相当。圆二色谱测定显示两种复性法得到的蛋白质的二级结构成份和谱形一致,说明在两种复性过程中完成了RGD-Sak分子的正确折叠。     

罗汉果蛋白质的含量测定

对罗汉果三个栽培品种的蛋白质和氨基酸进行了含量测定,从水解产物中检出了18种氨基酸。