留兰香组织培养及快速繁殖条件的优化

以留兰香(Menthaspicata L.)茎尖为实验材料,对外植体消毒、不定芽增殖和试管苗移栽生根的最佳条件进行研究。结果表明,最佳外植体消毒方法为:用体积分数75%乙醇浸泡30s,再用1.0g·L-1HgCl2浸泡10min,培养7d后外植体生长状况良好。正交实验结果表明,在附加0.2mg·L-16-BA和0.02mg·L-1NAA的MS培养基中,留兰香不定芽的增殖倍数最高,试管苗生长状况最好。在含25mg·L-16-BA和50mg·L-1NAA的混合溶液中浸泡1h,移栽试管苗的生根率可达100%,且根较长。     

芨芨草愈伤组织器官发生及植株再生

芨芨草(Achnatherum splendens(Trin.)Nevski)种子消毒并在MS培养基上萌发获得无菌苗,以幼苗的叶鞘和胚轴为外植体诱导愈伤组织,经继代后进一步诱导不定芽及生根.研究结果表明,诱导愈伤组织最适合的培养基为B5 1.5 mg·L-12,4-D 0.5 mg·L-1NAA;诱导芽分化较适合的培养基为B5 0.5 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1 NAA;1/4B5 1.0 mg·L-1NAA 0.2 mg·L-1 IBA 1.0 g·L-1活性炭培养基则有利于芨芨草试管苗的生根.本实验建立了完整的芨芨草植株再生体系,移栽成活率高.     

香石竹叶片离体再生体系的建立

以香石竹(Dianthus caryophyllus Linn.)无菌苗叶片为外植体,从不同细胞分裂素及其他激素配合使用等方面进行筛选,建立香石竹叶片离体再生体系.结果表明,不同的细胞分裂素影响叶片不定芽分化频率,其中较低浓度的6-BA(0.5 mg·L-1)和TDZ(0.001 mg·L-1)配合使用能有效诱导香石竹叶片不定芽分化;添加一定浓度的PP333(4 mg·L-1)可提高叶片不定芽分化频率和平均芽数.香石竹叶片不定芽分化的适宜培养基为:MS 0.002mg·L-1TDZ 0.5 mg·L-16-BA 0.2 mg·L-1IAA 4 mg·L-1PP333;壮苗培养基为:MS 0.2 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1IAA;生根培养基为:1/2 MS.不定芽诱导频率达到42.61%,平均芽数为4.53个.     

白花天目地黄的愈伤组织再生体系研究

白花天目地黄是天目地黄的一个优良变型,其资源稀少。本研究以白花天目地黄幼嫩叶片为外植体,探讨不同生长调节物质对其愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:MS+BA1.5mg·L-1+IBA0.5mg·L-1是诱导叶片愈伤组织最佳的培养基;MS+BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基对不定芽分化的效果最好;不定芽增殖最适宜的培养基为MS+BA2.0mg·L-1+IBA0.2mg·L-1;其不定芽的最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.05mg·L-1;试管苗移栽成活率达到96.7%。同时,在此基础上探讨了白花天目地黄的园林绿化及对地黄属药用方面的利用前景。     

PP333对分蘖洋葱试管苗增殖和生根的影响

以MS 0.1 mg·L-1NAA 0.4 mg·L-1 6-BA为增殖培养基,1/2MS 1.5 mg·L-1IBA 0.01 mg·L-1NAA为生根培养基,添加不同浓度PP333的结果表明:增殖培养基中添加1.0 mg·L-1PP333对分蘖洋葱试管苗增殖生长有促进作用,减少超度含水态苗的发生;生根培养基中添加0.1 mg·L-1PP333对分蘖洋葱试管苗生根壮苗有良好效应.     

版纳省藤的组织培养

以版纳省藤的萌蘖芽为试材,从取材、材料的处理、外植体的诱导分化、芽的增殖、生根以及影响试管苗形成几个重要因素等方面探讨了版纳省藤组织培养和快速繁殖的技术和方法,获得了生长素与细胞分裂素对芽的诱导分化及芽的增殖最佳配比浓度。以改良MS为基本培养基,在增殖培养基中添加0.5mg·L-1NAA、0.5mg·L-1KT和0.1mg·L-1BA,产生的有效苗最多;在生根培养基中添加1.5～2.0mg·L-1IBA生长素有利于版纳省藤组培苗生根。     

黑莓品种‘Chester’离体培养过程中适宜激素种类和浓度以及光照度的筛选

以黑莓(Rubus spp. )品种'Chester'带腋芽茎段为外植体,对初代培养基、不定芽增殖培养基和生根培养基中适宜的激素种类及浓度进行了筛选,并对增殖培养过程中适宜的光照度进行了研究.结果显示,在初代培养基中添加不同质量浓度的6-BA和NAA对侧芽的萌发和生长有明显的影响,其中,NAA不利于芽的萌发和生长,而添加适量的6-BA可促进芽的萌发和生长;适宜于'Chester'茎段的初代培养基为添加了1.00 mg·L-16-BA的MS培养基(含25 g·L-1蔗糖和5.9 g·L-1琼脂,pH 5.8).单因素实验结果显示,在 'Chester'不定芽的增殖过程中,细胞分裂素主要影响不定芽增殖,而生长素主要影响不定芽生长,以质量浓度低于1.0 mg·L-1的6-BA以及质量浓度低于0.3 mg·L-1的NAA较为适宜;经过进一步的组合筛选,确定适宜于'Chester'不定芽增殖的培养基为添加了0.5 mg·L-16-BA和0.1 mg·L-1NAA的MS培养基(含25 g·L-1蔗糖和5.9 g·L-1琼脂,pH 5.8).在生根培养基中添加高浓度NAA易诱导不定芽基部产生愈伤组织,不利于不定芽生根,因而,'Chester'不定芽适宜的生根培养基为添加了0.10 mg·L-1NAA的1/2MS培养基(含20 g·L-1蔗糖和5.9 g·L-1琼脂,pH 5.8).在不定芽的增殖培养过程中,光照度较强有利于不定芽生长,适宜的增殖培养条件为:光照度3 000 lx、光照时间15 h·d-1、温度(25±2) ℃、相对湿度约70%,此条件下不定芽的增殖系数(1.95)和平均芽长(1.44 cm)最高,芽生长状况良好.     

LA系列百合‘Eyeliner’花器官组培快繁技术研究

该试验以LA系列百合‘Eyeliner’花器官为外植体,通过不定芽直接诱导和愈伤组织再分化2种途径,建立了花器官组培快繁技术体系。结果表明:以花器官为外植体污染率接近于0;4种百合花器官诱导从易到难的顺序为花梗、花丝、子房和花柱;花丝易诱导愈伤组织,花梗易诱导不定芽,最适诱导培养基均为MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA;不定芽增殖最佳培养基为MS+2.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA,愈伤组织分化最佳培养基为MS+1.5mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA;诱导生根最佳培养基为MS+45g·L-1蔗糖;最佳炼苗方式为将组培苗封口放置在自然环境中3d,然后开口放置在自然环境条件下2d;当试管苗鳞茎大小为3.15cm时,移栽成活率最高;移栽最佳基质为草炭∶蛭石∶珍珠岩=2∶1∶1。     

中国传统菊花品种‘小林静’再生及转化体系的建立

以中国传统菊花品种‘小林静’叶片为外植体,建立了‘小林静’较好的再生体系及遗传转化体系.结果表明,‘小林静’叶盘最适不定芽分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA,不定芽分化率为92.76％,平均再生不定芽数为2.3767个;试管苗最佳生根培养基为1/2MS,生根率达100％.移栽采用灭菌的蛭石,再生苗移栽成活率达90％以上.采用根癌农杆菌C58C1介导的叶盘转化法进行‘小林静’的遗传转化试验,农杆菌OD600=0.5-0.6,侵染10 min后,将叶片外植体接种到MS+2.0 mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA的培养基中黑暗共培养2d,之后转接到附加10 mg/L硫酸卡那霉素和400 mg/L羧苄青霉素的分化筛选培养基中进行转化细胞的筛选,待长出抗性芽后转接至生根培养基中进行培养,最终建立了菊花品种‘小林静’的遗传转化体系.     

坪山柚上胚轴离体再生体系的建立

以坪山柚(Citrus grandis Osbeck'Pingshanyou')无菌苗的上胚轴为外植体,研究了其离体培养和植株再生技术.结果表明:坪山柚上胚轴的形态学上部出芽能力最强,诱导不定芽的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mgL-1+TDZ 0.05 mg L-1+NAA0.2 mg L-1+GA31.0 mg L-1+蔗糖40 g L-1,培养4周后不定芽诱导率为100%,平均不定芽数为8.35;最适生根培养基为1/2MS+NAA1.5 mg L-1,生根率为88.7%,平均生根6.4条;生根试管苗移栽30 d后成活率达90%.     

短距槽舌兰的驯化栽培与快速繁殖

为促进短距槽舌兰的资源驯化栽培, 本文对其生物学特性、生长发育规律和组织培养快速繁殖技术进行了研究。对开花植株进行人工授粉, 取种子进行观察发现, 授粉后140 d 种子才达到成熟状态; 将其接种在无植物生长调节剂的RE培养基上, 萌发率可达90%以上。将萌发的种子转接在RE＋0.2 mg·L-1 NAA＋0.2 mg·L-1 6-BA＋5 g·L-1椰粉＋2 g·L-1水解酪蛋白的培养基上可诱导原球茎大量增殖。最适壮苗生根培养基为RE＋0.6 mg·L-1 NAA＋0.2 mg·L-1 6-BA＋80 g·L-1香蕉泥, 生根率100%。试管苗移栽到直径0.3-1.7 cm的小号细树皮盆栽中, 成活率在95%以上, 试管苗栽培6个月后可分化花芽, 这为短距槽舌兰的产业化生产奠定了基础。     

极东锦鸡儿幼胚子叶的体细胞胚胎发生和植株再生

以极东锦鸡儿未成熟合子胚子叶为外植体进行其体细胞胚胎发生和植株再生研究。在添加不同BA与NAA或2,4-D,外加500mg·L~（-1）水解酪蛋白、30g·L~（-1）蔗糖和8g·L~（-1）琼脂的MS培养基上诱导产生了体细胞胚。在5mg·L~（-1）NAA＋5mg·L~（-1）BA和5mg·L~（-1）2,4-D＋1mg·L~（-1）BA处理中体胚诱导率分别为14%和10%;NAA处理每外植体上诱导出的体胚数量最多为4.3个,而2,4-D为10.5个。体细胞胚经成熟培养后,在添加0.01mg·L~（-1）NAA、20g·L~（-1）蔗糖和6g·L~（-1）琼脂的MS培养基上萌发率达到58.94%。萌发的体胚在MS培养基上长成正常小植株,再生率为87%。经炼苗后的体胚苗移植到草炭土：蛭石：珍珠岩=5：4：1（V/V/V）的栽培基质中,可以正常生长,移栽成活率为40%。     

菘蓝花药培养及单倍体的诱导

探讨菘蓝花药处于单核晚期的形态指标,并以适宜发育时期的花药为外植体,进行花药培养及单倍体诱导。实验结果表明,4℃低温处理2d后,在含有6-BA0．5mg·L-1和NAA1．0mg·L-1。的Ms培养基上,花药愈伤组织的诱导率为23．35％;将其转接到Ms附加6．BA1．0mg·L-1,NAA0．5mg·L-1的分化培养基上,80．00％以上的愈伤组织可以诱导产生不定芽;再将分化出的试管苗转接到1／2MS＋NAA1．0mg·L-1的生根培养基上,3d左右即可获得完整植株。经叶边缘压片检查染色体数目,花药培养所得的弱小绿苗为单倍体植株。     

欧石楠体细胞胚发生和植株再生

以欧石楠茎段为外植体,研究其体细胞胚胎发生和植株再生。对影响茎段不定芽分化及胚性愈伤组织诱导的主导因子进行比较分析,并研究其体胚萌发、生根及移栽;同时,采用树脂切片法对茎段脱分化产生胚性愈伤组织及体胚发育过程进行组织细胞学观察。结果表明,接种在1／2WPM基本培养基上的茎段,胚性愈伤组织诱导率为88．7％,显著高于其他处理,不定芽诱导率可达90．6％,平均分化倍数为3．6个,平均分化苗高3．82cm;体细胞经过成熟培养后。在添加1．0mg·L-1 ZT和0．3mg·L-1 IBA的1／2WPM培养基上萌发,萌发的体胚在I／2WPM附加0．2mg·L-1 NAA和0．3mg·L-1 IBA的培养基上形成完整的体胚苗植株,体胚苗生根率达到87．4％,经炼苗后移栽到蛭石：珍珠岩=3：1（V／V）的栽培基质中,成活率可达63．7％。在显微镜下可观察到球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚;体细胞胚以间接方式发生,表现为愈伤组织外层细胞直接发生和愈伤组织组织内部细胞发生。     

红籽鸢尾高频离体再生条件的初步筛选

红籽鸢尾(Iris foetidissima Linn.)为鸢尾科(Iridaceae)鸢尾属(Iris Linn.)多年生草本植物,原产于西欧和非洲北部。该种的叶鞘呈深绿色剑形,蒴果饱满且蒴果成熟开裂后露出红、橙黄和白等不同色泽的种子并一直垂挂到翌年春天,集观花、观叶和观果为一体,观赏价值较高。另外,该种还具有耐寒性好、在长江中下游地区四季常绿、适应性强及耐粗放管理等优     

PP333与BA组合对怀地黄试管苗生长发育的影响

本文研究了PP333与BA组合对怀地黄(Rehmanniaglutinosa)试管苗生长发育的影响。结果表明:(1)与对照相比,不同浓度的PP333与0.5mg.L-1BA组合均严重地抑制试管苗根、茎和叶的生长,表现为植株矮小,生根晚,前期根畸形生长(呈棒状或球状);(2)与单独使用0.5mg.L-1BA相比,低浓度PP333(0.01和0.1mg.L-1)与0.5mg.L-1BA组合促进茎的伸长和加粗;(3)2mg.L-1PP333与0.5mg.L-1BA组合能显著地提高愈伤组织芽的分化率和腋芽的萌发率,有利于试管苗的快速繁殖。     

PP333与BA组合对怀地黄试管苗生长发育的影响

本文研究了PP333与BA组合对怀地黄(Rehmannia glutinosa)试管苗生长发育的影响。结果表明:(1)与对照相比, 不同浓度的PP333与0.5 mg.L-1 BA组合均严重地抑制试管苗根、茎和叶的生长, 表现为植株矮小, 生根晚, 前期根畸形生长(呈棒状或球状); (2)与单独使用0.5 mg.L-1 BA相比, 低浓度PP333(0.01和0.1 mg.L-1)与0.5 mg.L-1 BA组合促进茎的伸长和加粗; (3) 2 mg.L-1 PP333与 0.5 mg.L-1 BA组合能显著地提高愈伤组织芽的分化率和腋芽的萌发率, 有利于试管苗的快速繁殖。     

杂交兰类原球茎增殖中芽分化的控制和快速繁殖

以‘玉女杂交兰’为材料,研究了培养时间、活性炭、切块大小和外源生长调节物质对类原球茎增殖和分化的影响。结果表明,培养时间、活性炭和切割处理对类原球茎增殖和分化影响显著,在培养基中添加活性炭或对类原球茎进行切割均能有效控制增殖过程中的芽分化。将类原球茎切成直径2~3 mm的小块接种到培养基MS＋1.0 mg.L-16-BA＋0.2 mg.L-1NAA＋0.3 g.L-1AC＋30 g.L-1蔗糖＋5.5 g.L-1琼脂中培养40 d,类原球茎增殖率为384.23%。将增殖后的类原球茎接种到培养基1/2MS＋1.5 mg.L-16-BA＋0.1 mg.L-1NAA＋20 g.L-1蔗糖＋5.5 g.L-1琼脂中培养40 d,芽分化率为463.06%。将分化的芽转入培养基1/2MS＋0.5 mg.L-1NAA＋0.5 g.L-1AC＋20 g.L-1蔗糖＋100 g.L-1土豆汁＋5.5 g.L-1琼脂中培养,生根率为100%,平均根分化数为2.80条.株-1。以泥炭土为基质,组培苗的移栽成活率可达97.78%。     

小叶龙竹（Dendrocalamus barbatus）愈伤组织诱导及植株再生

以小叶龙竹种子为外植体,通过研究MS培养基中不同植物生长调节剂浓度组合对外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响以及不同配比对生根的作用,建立了稳定的繁殖再生体系。试验结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS＋2,4-D5．0mg·L-1;不定芽分化的最适培养基为MS＋2,4-D0．5mg·L-1＋6．BA1．0mg·L-1＋KT0．25mg·L-1;小苗的最适生根培养基为1／2MS＋6-BA0．5mg·L-1＋NAA1．0mg·L-1＋IBA0．4mg·L-1,建立的繁殖再生体系将为进一步利用分子生物学技术对竹类植物进行遗传改良奠定基础。     

甜叶菊茎段腋芽诱导培养基和NaN3诱变条件筛选及诱变试管苗POD同工酶分析

以甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)茎段为外植体,采用L9(34)正交表对腋芽诱导培养基中的激素种类和浓度(0.0、0.1和0.2 ng·L-1NAA;0.0、0.5和1.0 mg·L-16-BA;0.000、0.005和0.010 mg·L-1TDZ)进行筛选;在此基础上对诱变过程中NaN3溶液的浓度(3、6和9 mmol·L-1)和处理时间(1、2、4和8h)进行比较,并初步筛选出最佳的NaN3诱变条件;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)对经上述NaN3诱变处理后培养5、10和15 d的试管苗POD同工酶酶谱的变化进行了分析.结果表明:在添加了不同激素组合的培养基上均能诱导出腋芽,但腋芽数和苗高有差异;经综合比较后可确定适宜于甜叶菊腋芽诱导的培养基为添加1.0 mg·L-16-BA和0.1 mg·L-1NAA的MS培养基(含5.0g·L-1琼脂粉和30g·L-1蔗糖,pH 6.0).经NaN3诱变处理后,茎段在腋芽诱导培养过程中的死亡率随NaN3浓度提高和处理时间延长逐渐增加,平均腋芽数和苗高则下降,且多数处理组试管苗矮化;根据半致死剂量确定的最佳NaN3诱变处理方法为将甜叶菊茎段置于9 mmol·L-1 NaN3溶液中浸泡4h.PAGE分析结果表明:甜叶菊诱变试管苗的POD同工酶谱均可分为a、b和c区,但在不同培养时间各处理组POD同工酶的条带数和活性有所变化.在培养5和10 d后各处理组诱变试管苗POD同工酶的活性和条带数量有明显差异,而在培养15 d后各处理组诱变试管苗POD同工酶活性有差异,但条带数量没有明显变化,表明用适宜浓度的NaN3进行诱变处理可导致甜叶菊试管苗短期的应激效应.