一株小麦内生真菌的鉴定及其发酵产物对兔软骨细胞的影响

本研究对分离自青海大骨节病区小麦籽粒中优势内生真菌6-5-1菌株进行菌种鉴定并探讨其发酵产物对兔膝软骨细胞的影响。通过形态学观察及ITS序列分析进行菌种鉴定;其发酵产物经75%乙醇提取,并将乙醇总提物用3种不同有机溶剂(石油醚,乙酸乙酯和乙醚)进行萃取,分别作用于兔软骨细胞;四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide,MTT)显色法检测细胞存活率,甲苯胺蓝(toluidine blue,TB)染色法和免疫组化法分别检测蛋白聚糖和胶原蛋白的表达;RT-PCR检测蛋白聚糖和Ⅱ型胶原m RNA的表达。经鉴定6-5-1菌株为三线镰孢霉(Fusarium tricinctum)。其发酵产物乙醇总提物对细胞存活率有较强的抑制作用,对蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的合成与m RNA的表达均有抑制作用;其他萃取分部对软骨细胞损伤程度各不相同,石油醚分部作用最强,且各分部的影响作用均弱于乙醇总提物。可见6-5-1菌株代谢产物中应该有多种对软骨细胞产生损伤的物质,且这些物质可能存在协同作用。石油醚分部中可能存在已知损伤软骨细胞毒素以外的其他物质。     

不同硒浓度培养的一株链格孢霉产物对兔软骨细胞的影响

本实验研究了加硒培养的一株链格孢霉(Alternaria alternate)菌株的产物对兔软骨细胞毒损作用的影响。采用合成培养液,添加不同浓度硒元素后进行摇瓶培养链格孢霉菌株;发酵产物用75%乙醇提取后减压浓缩;将不同硒处理的发酵产物提取物加入兔软骨细胞培养体系,采用四氮唑蓝(MTT)法测定软骨细胞的生长速率,甲苯胺蓝染色法检测其蛋白聚糖的表达,免疫组化法检测Ⅱ型胶原表达量,半定量RT-PCR法检测细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果显示,在实验所设浓度范围内,加硒对该链格孢霉菌株的生长有一定影响,但不显著。加不同浓度硒培养所得发酵产物提取物对兔软骨细胞生长速率的影响各异,多表现为抑制作用。菌株发酵产物的提取物对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA的表达量有些微促进作用,尤其是加一定浓度硒的处理;但对这两种蛋白的表达都有抑制作用,不过和未加硒的处理相比,加一定浓度硒培养所得提取物的抑制效果有所减轻。本研究结果表明,硒对该链格孢霉菌株的生长有一定影响;加不同浓度硒培养的菌株提取物对兔软骨细胞损伤有关的指标影响不同;说明环境硒水平—真菌产物毒性—软骨细胞损伤之间可能存在一定关系,值得进一步研究。     

青海大骨节病区小麦内生镰刀菌和硒对兔膝软骨细胞的影响

小麦内生镰刀菌5-5-1菌株是从青海大骨节病区穗期小麦籽粒中分离的一株优势内生镰刀菌,本试验通过采用干重法测定菌丝体生长量;MTT(methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide)法检测软骨细胞存活率;甲苯胺蓝染色法和免疫组化染色法分别检测兔膝软骨细胞内蛋白聚糖(aggrecan)和Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)的表达;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测软骨细胞内蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白m RNA的表达水平,探讨了硒对5-5-1菌株生长的影响及不同硒水平下培养该菌株获得的发酵产物对兔膝软骨细胞有关指标的影响。结果表明,硒浓度在0.05~0.5 mg/L的范围内,对5-5-1菌株生长有促进作用,且呈浓度效应;低浓度硒条件下培养的该菌株发酵产物对软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的合成及其m RNA表达的抑制作用相对较小。由此推断适宜浓度硒具有促进镰刀菌生长的作用,但同时能够减轻其发酵产物对软骨细胞的损伤。     

环链棒束孢Isaria cateinannulata发酵液的化学成分分析

环链棒束孢广泛存在于自然界,并且在植物病虫害防治中起重要作用,目前相关的研究多集中于其发酵条件、生物学特性及杀虫毒力的研究,对该菌发酵液中的化学物质研究甚少。本文依次用石油醚和乙酸乙酯对环链棒束孢发酵液进行分级萃取,借助气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术和超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法（UPLC/Q-TOF-MS）鉴定分析石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和萃余物中的化学物质组成。共鉴定69个化合物的结构,其主要化学成分为酚类、酯类、烷烃、烯烃、卤代烃和酮类非极性/弱极性的小分子化合物等,其中邻苯二甲酸二丁酯、角鲨烯、环戊烯丙菊酯物质、瓜叶菊素Ⅰ等物质具有特殊的作用。发酵液提取物中还含有多种小分子化学物质,应结合多种色谱分离手段和波普学手段对代谢产物进行分离、纯化和结构鉴定,为其次生代谢产物的广泛利用提供数据支撑。     

鸭跖草叶点霉粗毒素的提取方法和产毒条件的研究

以石油醚、乙酸乙酯、四氯化碳三种极性不同的溶剂对鸭跖草叶点霉病原菌的菌丝和培养液进行萃取,获取粗毒素。结果表明,叶点霉菌产生的毒素既有胞外毒素,又有胞内毒素,且用极性中等的乙酸乙酯萃取效果最好。大豆培养基和PSK分别是适合菌株生长和毒素分泌的固体培养基和液体培养基。确定有利于叶点霉产毒的温度为32℃、培养时间为14d、培养方式为150r/min振荡培养。     

一株产T-2毒素镰孢菌的分离、鉴定及其产毒条件的研究

【目的】从青海大骨节病区小麦麦穗中分离的内生真菌中筛选产T-2毒素的菌株,并研究影响其合成该毒素的条件。【方法】采用种子胚芽抑制试验和抑菌试验从分离所得的菌株中筛选产毒菌株;利用薄层层析和高效液相检测待测菌株产物,复筛出产T-2毒素的菌株。通过显微形态学观察及ITS序列分析对筛选出的菌株5-5m-1进行鉴定。应用单因素筛选方案研究固体培养时间、温度以及液体培养转速、初始p H等对其产T-2毒素的影响,并采用正交试验进一步优化。【结果】菌株5-5m-1的显微形态与梨孢镰孢菌(Fusarium poae)相似;ITS序列分析显示,该菌株与F.poae的相似度也较高。其产T-2毒素的最佳条件为:玉米固体培养基、日温25°C/夜温15°C、光暗交替。【结论】5-5m-1菌株为梨孢镰孢菌,培养条件对其产T-2毒素能力有很大影响。实验结果将为进一步研究T-2毒素产生的机制和防止真菌毒素污染提供参考。     

墨旱莲提取物抑菌活性初步研究

对药用植物墨旱莲Eclipta prostrata提取物的抑菌活性物质进行研究。结果表明：（1）通过不同部位提取物的抑菌试验,发现只有叶和根茎含有抑菌活性物质;（2）墨旱莲提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、藤黄球菌的最低抑菌浓度分别为0.6、2.0、0.8、1.0 g/mL,最小杀菌浓度均为1.0 g/mL,对白色念珠菌有很强的抑菌作用,但对黑曲霉无效;（3）通过不同极性溶剂的抑菌试验表明,抑细菌活性物质易溶于石油醚、乙醚等非极性溶剂,具有最佳抑细菌效果的提取溶剂为偏碱性的65%乙醇溶液;（4）墨旱莲的抑菌活性物质可能为黄酮类物质。     

小珊瑚藻对赤潮异弯藻的化感效应

研究了不同浓度的小珊瑚藻组织4种不同极性有机溶剂(甲醇、丙酮、乙醚、氯仿)提取物对赤潮异弯藻的生长抑制作用.结果表明：小珊瑚藻组织甲醇提取物对赤潮异弯藻的生长抑制活性最强,并且在较高浓度下能使赤潮异弯藻完全死亡,其他3种有机溶剂提取物对赤潮异弯藻的生长无明显影响.表明小珊瑚藻组织中含有的对赤潮异弯藻有抑制作用的活性物质具有较高的极性.对小珊瑚藻的甲醇提取物进行液液萃取,将其分离为石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和蒸馏水相, 并对赤潮异弯藻进行生物活性检测.结果发现石油醚相和乙酸乙酯相具有较强的杀藻活性,表明脂肪酸可能是小珊瑚藻组织内抑制赤潮异弯藻生长的化感物质的重要组成成分之一.     

利用Fusarium poae制备T-2毒素的培养条件和提取方法

比较2种不同优化方法对分离纯化梨孢镰孢菌(Fusarium poae)产生的T-2毒素的效果,并得到高纯度的T-2毒素,解决国内T-2毒素产业化问题.在优化Fusarium poae产毒培养条件的基础上,对Burmeister的提取方法和Gregory培养基进一步优化以最大限度地提高T-2毒素的产率,从而得到高纯度并且...     

喜旱莲子草提取物的杀虫活性

【背景】喜旱莲子草是全球性恶性入侵杂草,近年来在我国已呈蔓延之势,对经济及生态环境造成严重破坏。目前已开展了其入侵机制和生物防治等方面的研究,然而,针对其资源化利用的研究较少。【方法】分别研究了喜旱莲子草的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等溶剂提取物对小菜蛾、斜纹夜蛾的选择忌避、触杀和胃毒作用。【结果】喜旱莲子草各有机相提取物对小菜蛾和斜纹夜蛾均具有一定的选择忌避作用。随着处理时间的延长,不同溶剂提取物对小菜蛾和斜纹夜蛾的触杀和胃毒作用效果逐渐增强,且校正死亡率与提取物浓度呈正相关关系;经喜旱莲子草石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物4000 g·L-1处理后,小菜蛾的触杀校正死亡率均达到70%,经石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物4000 g·L-1及正丁醇层和水层500 g·L-1处理后,斜纹夜蛾的触杀和胃毒校正死亡率均达到80%。【结论与意义】该研究结果对喜旱莲子草的进一步研究开发具有参考价值。     

藏药玛宁江巴提取物对大鼠利尿作用的初步研究

目的:研究玛宁江巴系统溶剂提取物对大鼠的利尿作用.方法:采用清醒状态下正常wistar大鼠,观察玛宁江巴各系统溶剂提取物的利尿作用.结果:玛宁江巴石油醚提取物、乙酸乙酯提取物有显著促进排尿的作用.结论:玛宁江巴利尿作用的有效成分主要集中于石油醚提取物及乙酸乙酯提取物中,可能是脂肪酸及黄酮类成分.     

18种中草药提取物对褐飞虱和甜菜夜蛾的杀虫活性分析

为了筛选对农产品和环境安全、对害虫高效的植物源杀虫剂,分别采用喷雾法和饲毒法,测定了18种中草药的3种溶剂（水、乙醇、石油醚）提取物对褐飞虱Nilaparvata lugens Stål的触杀活性和对甜菜夜蛾Spodoptera exigua Hübner的胃毒作用。结果表明,各种提取物（0.8 g/mL）对甜菜夜蛾的胃毒作用不明显,校正死亡率最高为33.33%;但对褐飞虱的杀虫活性较高,其中百部、黄柏、榧子、生山栀、鹤虱、木香的乙醇或石油醚提取物,对褐飞虱3龄若虫的24 h校正死亡率均在80%以上,其石油乙醚提取物的LC50值依次为：0.0826,0.0455,0.0145,0.0047,0.0038,0.0033 g/mL。采用系统溶剂法分析发现,木香和鹤虱的主要杀虫活性成分均在氯仿萃取物中,表明其杀虫成分易溶于较弱极性溶剂中。进一步通过活性追踪法,对鹤虱提取物的柱层析各流分的活性检测表明,其杀虫活性成分的Rf值为0.5556~0.5926。该研究为进一步纯化新型植物源杀虫物质并确定其分子结构,从而开发其应用前景及发现新的杀虫活性先导化合物奠定了基础。     

基于微量筛选模型的48种中草药提取物乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选及评价

采用微量筛选模型考察48种中药提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性。采用不同极性溶剂对中药材进行提取,采用微量筛选模型对不同浓度提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行考察,并采用Origin8.0计算其IC50值。结果表明,几种中药材的不同极性溶剂(水、80%乙醇、乙酸乙酯、石油醚)提取物有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。其中黄柏、元胡的80%乙醇提取物,丹参的乙酸乙酯提取物的抑制率较高。当上述提取物在实验体系中的终浓度为76.92 mg/L时,抑制率分别为66.72±0.02%、52.67±0.04%、46.84±0.03%,其IC50值分别为295.12、229.09、1202.26 mg/L。本研究结果为从中草药中快速筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂提供了方法和数据支持。     

菊苣叶片不同溶剂提取物对粘虫的生物活性

采用冷浸和超声波提取相结合的方法,分别获得了菊苣(Cichorium intybus L.)叶片乙酸乙酯、乙醚和石油醚提取物;并应用饲喂称重法及叶碟法研究了这3种提取物对粘虫(Mythimna separata Walker)幼虫生长发育的影响及拒食效应.结果表明:菊苣叶片乙酸乙酯提取物的得率显著高于乙醚和石油醚提取物,3种提取物的得率分别为4.36%、1.96%和1.08%.在实验期内(9 d),3种提取物处理组的试虫个体质量均显著低于对照组(P＜0.05),且各处理组间总体上差异显著;其中,乙酸乙酯提取物处理组试虫的个体质量最小,发育抑制率最高并随培养时间延长持续增高,饲养第9天发育抑制率达到79.27%;乙醚和石油醚提取物处理组的发育抑制率则表现为先升高后降低的趋势,均在饲养第5天达到最高,分别为62.44%和45.83%.各处理组试虫的死亡率和单蛹质量均显著高于对照组,化蛹率(50.00%～80.00%)均显著低于对照组.其中,乙酸乙酯提取物处理组试虫的死亡率和校正死亡率均最高,分别为57.80%和52.05%.各处理组试虫的幼虫期与对照组也有显著差异,分别较对照组延长了3.62～11.78 d.各处理组对试虫的拒食作用显著高于对照组,其中,乙酸乙酯提取物处理组的拒食率最高;乙酸乙酯、乙醚和石油醚提取物处理组72 h的拒食率分别为84.43%、76.46%和16.67%.研究结果显示,菊苣叶片的乙酸乙酯、乙醚和石油醚提取物对粘虫均有致死及抑制生长发育的作用,尤其是乙酸乙酯提取物的生物活性更强,可作为天然植物源驱虫剂进行开发利用.     

鸡舍环境中tri5基因阳性镰孢菌的分离及其产毒特性

【目的】探讨利用tri5-PCR鉴定产毒镰孢菌的可行性以及tri5阳性菌株的产毒特性和产毒条件。评估鸡舍空气和固体基质中镰孢菌分离株中产单端孢霉烯族毒素潜力的发生率。【方法】利用编码单端孢霉烯族毒素合成酶的起始基因(tri5基因)对139株镰孢菌分离株进行PCR检测,并对tri5阳性菌株进行产毒培养,通过免疫亲和柱-高效液相色谱方法来检测培养产物中的T-2毒素和HT-2毒素含量。【结果】共筛选到42株tri5阳性菌株,其中分离自鸡舍空气中的10株tri5阳性菌株经产毒培养后7株菌株产生T-2毒素(1.36-5 ng/mL)或HT-2毒素(6.1-17.1 ng/mL)。在5℃-20℃间隔24 h变温、光照与黑暗间隔24 h交替、前期振荡后期静止的培养条件下培养9 d镰孢菌的产毒量最高;镰孢菌的产毒量与温度和时间显著相关,而与菌丝体干重无显著相关性。【结论】与传统鉴定产毒镰孢菌的方法比较,tri5-PCR更适用于快速、准确地检测大量鸡舍环境样本中的产毒镰孢菌。本研究为养殖环境的产毒镰孢菌的危害预警和控制提供技术支撑和理论依据。     

商陆不同极性、根和茎提取物的抑菌性能分析

为探究商陆不同极性、部位提取物的抑菌性能,本实验分别从商陆根和茎中提取石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相4种不同极性的提取物,再采用滤纸片法测量提取物对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyt-icus)4种细菌的抑制性能。结果表明,部分商陆的提取物有一定的抑菌活性,如根正丁醇相对巨大芽孢杆菌和副溶血弧菌,茎水相对副溶血弧菌的抑菌圈在10mm以上,但总体上商陆的提取物的抑菌性能远不及头孢氨苄好。实验还发现商陆抑菌活性最强的物质大都存在于根中,且抑菌活性最强的物质大都存在于水和正丁醇这种极性较高的溶剂的提取物中,不同提取物对不同细菌的抑菌活性情况不一致。因此本研究结果可以为商陆提取物抑菌性能的进一步探索提供参考。     

石上柏乙酸乙酯萃取物对喉癌Hep-2细胞增殖与迁移作用的研究

本文利用三种不同极性溶剂从石上柏中分离出活性成分,观察其对喉癌Hep-2细胞的增殖与迁移作用的影响。干燥的石上柏全草粉碎后经乙醇回流提取浓缩得浸膏,依次采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯三种溶剂进行萃取,以获得各极性溶剂萃取部位;MTT法检测石上柏提取物对Hep-2细胞增殖的影响;流式细胞仪检测石上柏提取物对Hep-2细胞周期的影响;细胞划痕实验检测石上柏提取物对Hep-2细胞迁移能力的影响;采用p53报告基因探讨石上柏提取物对喉癌Hep-2细胞的作用机制。结果显示31.2~500.0μg/m L的乙酸乙酯萃取部位能明显抑制Hep-2细胞的生长及划痕区域的迁移;15.0~60.0μg/mL的乙酸乙酯萃取物部位能使喉癌Hep-2细胞阻滞于G1期,并且能激活p53的表达。结果表明石上柏乙酸乙酯萃取部位可明显抑制喉癌Hep-2细胞的生长及迁移,其作用与激活p53通路有关。     

银杏叶粗提物对小菜蛾的拒避和生长发育抑制作用

银杏叶不同溶剂的粗提物对小菜蛾幼虫均有较强的拒食作用。其中在选择性取食时,乙醚提取物对小菜蛾幼虫的拒食中浓度（AFC50）最低,即拒食作用最强,其次分别为石油醚和乙醇提取物,氯仿提取物的拒食作用最低;在非选择性条件时,乙醚提取物的拒食作用最强,其次分别为乙醇和石油醚提取物,氯仿提取物的拒食作用最低。各抽取物对小菜蛾幼虫的生长发育具有明显的抑制作用,取食各提取物处理的叶片对小菜蛾幼虫的体重增加显低于对照,但各提取物之间差异明显。各提取物对小菜蛾成虫产卵的拒避作用均不明显。     

内蒙古产白刺、小果白刺和霸王α-葡萄糖苷酶抑制活性

首次利用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型对内蒙古产3种蒺藜科植物的9个提取物进行活性评价,并与阳性对照Acarbose比较,发现3种植物均有抑制α-葡萄糖苷酶活性。其中白刺石油醚提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性(IC50=81.80 mg/L)最高,其余依次为小果白刺乙酸乙酯提取物(IC50=610.29 mg/L),霸王石油醚(IC50=627.22 mg/L)和乙酸乙酯提取物(IC50=838.40 mg/L),它们的抑制活性远大于阳性对照Acarbose(IC50=1103.01 mg/L)。结果发现,不同植物不同溶剂提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性不同。同一植物不同溶剂提取物相比较,甲醇提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性不及乙酸乙酯和石油醚提取物。