氨基酸定性分析技术的一些改进 Ⅱ.高压电泳高温层析双向纸上分离,小型滤纸层析和琼脂电泳

(1)本文以高压电泳和高溫层析分离氨基酸,可在10小时左右完成。甘氨酸与絲氨酸,組氨酸,精氨酸和賴氨酸的分离較双向层析为佳;但谷氨酸、門冬氨酸、谷氨酰胺与門冬酰胺尚需借第二向长时間层析才能分开。(2)以高溫层析溶剂系統作小型滤紙层析,可得高温层析图譜的縮影。小型滤紙层析的特点是样品和溶剂用量少,速度快,設备簡单,适合于大批样品同时并举之用。(3)利用pH8.8,离子強度0.025的巴比土緩冲液在琼脂板上进行DNP-谷氨酸,DNP-門冬氨酸,DNP-谷氨酰胺和DNP-門冬酰胺的电泳分离,效果很好,因此琼脂电泳法可作为末端分析的一种輔助技术,分辨上述4种DNP-氨基酸和驗証紙层析的結果。     

血红蛋白的结构分析

本文应用指纹法和肽段氨基酸层析法对血红蛋白A(HbA)和血红蛋白S(HbS)进行结构分析。 指纹法:淀粉板电泳提纯的HbA和HbS,经胰蛋白酶酶解后,点样于60×25厘米的新华3号滤纸上,作高压电泳分离(缓冲液为呲啶:冰醋酸:水=100∶4∶900 V/V,电压2,800伏,电泳2小时),继而进行垂直于电泳方向的上行层析(溶剂系统为吡啶:异戊醇:水=35∶35∶30),茚三酮显色,得血红蛋白酶解图谱。和HbA比较,发现HbS酶解图     

血清苯丙氨酸的纸层析测定法

本文报告一种改进的纸层析法,其原理为先将血清去蛋白质并脱盐,然后进行层析。溶剂系统为正丁醇:甲酸:水(15∶3∶2)。所得结果清晰,斑点也较集中。适用于苯酮尿病的诊断和随访;并可用于筛选,由于先天性代谢缺陷而引起的氨基酸代谢障碍和诊断,由于肾小管功能缺陷(先天性或后天性)所形成的氨基酸尿。     

精氨酸纸层析鉴定的理想展开剂

本文通过大量筛选,找到一组溶剂系统,其溶剂组成为正丁醇∶醋酸∶乙醇∶水(8∶2∶2∶5)。该溶剂系统在纸层析中能有效地将精氨酸与赖氨酸和组氨酸分开,经多方面考察,我们认为该溶剂系统适宜于作精氮提取工艺中纸层析组份鉴定的展开剂。     

高速逆流色谱分离制备栀子苷

以栀子苷粗提取物为原料,采用高速逆流色谱法分离栀子苷,溶剂系统为A:乙酸乙酯∶正丁醇∶水(2∶1.5∶3)和B∶正丁醇∶水(1∶1),上相为固定相,下相为流动相,流速为2.0 mL/min,转速为850 r/min,温度控制在25℃,纯度用HPLC测定.结果表明,利用溶剂系统A和B进行HSCCC制备栀子苷,使栀子苷含量从50.75％(HPLC)分别提高至86.6％和91.8％,回收率分别为81.36％和78.12％.     

豚鼠听觉系统慢性引导电极安装方法

声音在听觉系統各部分引起的誘发电位,是在听觉生理及中樞神經系統生理的研究中經常被采用的反应指标。大动物(主要在猫)的皮层听区、耳蝸、內膝体等部位的慢性引导电极安装方法,已有一些描述。豚鼠体型較小,解剖結构也与大动物有差异,因此慢性电极的安装在技术上有特殊的困难。适用于大动物的方法,包括电极的插入和固定(如定位仪的使用,头骨上装螺旋座等),用于豚鼠却不合适。豚鼠的听觉系統頗为发达,其声音誘发电位也表現得很明显,因此是研究听觉系統电生理的較好的     

普通小麦T型细胞质雄性不育系及其保持系线粒体多肽的电泳比较研究

应用单向SDS-PAGE和双向IEF-SDS电泳技术对两个品种的普通小麦(T.aestivum L.)T型细胞质雄性不育系及其保持系的线粒体多肽进行了比较研究,结论如下:1.黄化苗期不育系和保持系线粒体多肽在单向SDS-PAGE和双向IEF-SDS电泳行为上无明显差别;2.在孕穗期幼穗线粒体多肽的单向SDS-PAGE图谱上,两个不育系都缺少28Kd多肽带纹,因而不育系和保持系间表现出明显的差异。双向IEF-SDS凝胶电泳证实28Kd带纹实际上是分子量相同而等电点分别为5.58和5.65的两个多肽;3.线粒体基因的表达是具有时空性质的;4.线粒体与T型细胞质雄性不育可能存在着某种特定的关系。 本文还就T型细胞质雄性不育的分子机制进行了探索性讨论。     

细叶小檗果色素成分研究

细叶小檗(Berberis poiretii schneid)之红色浆果,经压榨得鲜果汁。采用醋酸铅沉淀,正丁醇提取的纯化方法,得到纯化色素。此色素在三种溶剂系统中纸层析,均显示两条不同红色谱带。酸水解后,甙元部分与标准品对照,在三种溶剂系统中进行纸层析,证明含有下面两个花青甙元:(1)天竺葵甙元(pelargonidin)、(2)矢车菊甙元(cyanidin)。纸层析制备后,在0.1％盐酸-乙醇中测定两个花青甙元的吸收光谱,最大吸收峰分别在532mm和547mm。配糖的测定用甲酸水解,与标准糖对照纸层析和薄层层析,证明配糖为葡萄糖和阿拉伯糖。色素经纸层析制备成两条谱带后,分别用高效薄层法直接水解,与标准糖对照层析,证明色素1配糖为葡萄糖,色素2配糖为葡萄糖和阿拉伯糖。     

涡虫神经纤维的硫酸铜-硝酸银显示法

整体染色:(1)在10毫升福末林(普通的);45毫升95％乙醇;2毫升冰醋酸組成的混合剂內固定24—48小时。(2)不用洗滌,轉入70％乙醇內3—10天。(3)在蒸餾水內洗滌一小时。(4)在50℃下,在10％硫酸銅(CuSO_4·5H_2O)內浸3小时。(5)不經洗滌,在50℃下,轉入1％硝酸銀內1.0—1.5小时。(6)在蒸餾水內洗3分钟,連續三次,每次一分钟。(7)在40—45℃时水浴內,在下述显影剂內还原,显影剂配法:1％連苯三酚10毫升;56％乙醇(一般为60％)     

高速逆流色谱结合制备液相色谱分离纯化桂枝中化学成分

本文首次采用高速逆流色谱结合高效液相色谱的方法对桂枝正丁醇相进行分离纯化。首先,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶2∶6∶4,v/v)为高速逆流色谱溶剂系统,将桂枝正丁醇萃取相分为两个馏分,然后结合制备高效液相,共分离得到4个高纯度化合物。通过核磁共振波谱鉴定其化学结构,分别为香豆素(1)、反式-邻甲氧基桂皮酸(2)、桂皮酸(3)、反式-桂皮醛(4),这四种化合物纯度经高效液相检测均大于95%。该方法简便、快速、节省溶剂,可以对桂枝正丁醇相进行快速有效的分离纯化,具有较好的实用价值,为桂枝资源的进一步开发应用提供了技术和物质支持。     

高速逆流色谱分离雷公藤中的雷酚内酯异构体

利用高速逆流色谱法从雷公藤植物粗提物分离得到一个化合物.两相溶剂体系为正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(2∶3∶3∶2,V/V/V/V),水相作流动相,有机相作固定相.经单晶X-衍射分析确定该化合物为雷酚内酯异构体.晶体参数为:晶体为正交晶系,空间群为P2(1)2(1)2(1);晶胞参数为:a=0.71913(10) nm,...     

环腺苷酸及其相关化合物的氧化铝薄板层析

使用极性不同的溶剂系,研究了3',5'-环腺苷酸(cAMP)及其相关化合物在国产中性氧化铝薄板上的层析行为,发现正丁醇:乙醇:水(30:10:13)系统能把cAMP与腺嘌呤、腺苷、3',5'-环鸟苷酸、二腺苷焦磷酸、AMP(GMP GTP ATP)等分离开来。磷酸盐和柠檬酸盐的中性水溶液能定量地洗脱cAMP斑点。从而使方法达到分离定量的目的,用于cAMP化学合成反应液的分析和环核苷酸磷酸二酯酶活力的测定。     

纸层析法测定庆丰霉素

我们通过试验,找到了一种测定庆丰霉素的纸层析法,此法简易、快速、较准确。现介绍如下。一、试剂层析溶剂:正丁醇:冰乙酸:蒸馏水=2.8:1:1。显色剂:0.3克茚三酮,5毫升吡啶用95%的乙醇定容为100毫升配成。春雷霉素溶液(作定量标准用):贮备液为2毫克/毫升,用时以蒸馏水稀释为500微克/毫升。贮备液可在冰箱中保存三个月。     

丝瓜籽中一种具有翻译抑制活性和胰蛋白酶抑制剂活性的多肽——Luffin P1的纯化和性质

通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、蓝胶亲和层析和FPLCMonoS阳离子交换层析 ,从丝瓜籽抽提液中分离到一种多肽luffinP1。经MALDI TOFMS测得其分子量为 5 2 2 6 .5。氨基酸序列测定及同源性分析发现 ,luffinP1的N端 11个氨基酸序列与丝瓜籽中的一种 6 .5K富含Arg Glu的多肽AGRP的部分序列相同 ,并与南瓜籽中一种胰蛋白酶抑制剂C2肽具有很高的同源性。体外分析表明 ,luffinP1同时具有两种生物活性 :(1)对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 0 .6nmol L ;(2 )具有明显的胰蛋白酶抑制活性 ,IC50 为 2 2 μmol L。     

在过量巯基化合物存在时蛋白质中巯基的测定

萘醌与巯基化合物如巯基乙酸、乙硫醇和谷胱甘肽等有当量加成关系。加合物在波长420mμ左右有一吸收峯。虽然改变測定时的溶剂系統或酸碱度会影响此吸收峯位置及高度,但在同一測定条件下光密度增值与巯基浓度的关系符合Beer定律。比較不同巯基化合物(包括巯基乙酸、谷胱甘肽及一些还原型蛋白貭中的巯基)与萘醌反应后光譜性貭的結果,它們的吸收峯位置及消光系数均大致相同。在18N H_2SO_4中每一巯基的毫克分子消光系数皆接近1.9 mM~(-1)巯基。利用巯基乙酸-萘醌加合物可以被乙醚抽提去淨的性貭,可以在过量巯基乙酸存在时测定蛋白貭中的巯基。在过量巯基乙酸存在时测定谷胱甘肽的結果与后者单独测定时完全相同。应用此法测定胰島素被过量20倍巯基乙酸在30℃,pH5,8M脲素水溶液內还原的过程,結果說明,胰島素三个硫硫鍵在6小时內可以定量地轉变为巯基。     

多核苷酸合成的研究 Ⅲ.CpUpCpG>p的合成

本文报道用PNPase和RNase N_1相结合的方法合成了CpUpCpG>p。选择适当的反应条件,包括1.CpUpC∶GDP=1∶5(克分子比),2.RNase N_1:PNPase=4∶1(活力单位比),3.反应pH为7.6,4.37°反应10小时,CpUpCp@>p产率可达64%。另有18%开环产物CpUpCpGp。后者又可用氯甲酸乙酯进行环化得到60%产率的CpUpCpG>p。     

叶绿素的研究 Ⅱ.叶绿素和类胡萝卜素的薄层层析

研究了叶綠素和类胡蘿卜素的薄层层析法。层析采用硅藻土-煅石膏(8∶2)湿板,对叶綠素的分离溶剂系统为石油醚-乙醚(3∶1),对类胡蘿卜素的分离为苯-石油醚-乙醚-丙酮(1∶5∶0.5∶0.6)。并且研究了色素     

用微型放射自显术观察带标记不同安眠药穿透入脑组织的定位研究

在以前的报导中曾經指出带标記原子的S~(35)-硫噴妥鈉和C~(14)-双乙基巴比妥鈉穿透入机体中樞神經系統的速度有显著的差异:前者在注射到机体內5分钟时,脑中各部位即已达最大濃度,而后者却要在注射后1小时才达到。同时实驗又表明,不同的巴比妥类药物所引起睡眠的快慢,是与它們穿透入中樞神經系統脑部速度有关。但是有关它們透入脑組織后的詳細弥散部位和彼此間的定量关系,还不了解,有必要加以进一步闡明。因此,在研究中我們用微型放射自显术观察了S(35)-硫噴妥鈉和C~(14)-双乙基巴比妥鈉在脑組織各部位的細胞体內和細胞体間的弥散状况,因为微型放射自显术能够清晰的辨明放射性物质进入体內后在組織中的精确部位。     

毛冬青中三萜皂苷类化合物的提取分离及电喷雾多级质谱快速分析研究

建立电喷雾多级质谱结合硅胶柱层析快速、全面分析中药毛冬青中三萜皂苷成分的方法。毛冬青干燥根70%甲醇提取物,先用乙酸乙酯萃取,再用正丁醇萃取。取正丁醇萃取物经硅胶柱层析,以甲醇-氯仿-水(1∶9∶0.1→2∶8∶0.2→3.5∶6.5∶1→1∶1∶0.3,V/V)溶剂系统进行梯度洗脱。通过TLC比较,将毛冬青皂苷粗提物分成3个组分。通过全扫描电喷雾多级质谱对每个组分分别进行分析,并结合文献报道,确定皂苷的结构。确定了毛冬青中11个已知皂苷的结构,对1个未知皂苷的结构进行了推测。此方法具有操作简单、成本低、效率高等优点。     

抑制剂影响生成两个酶中间物系统的动力学

我們用稳态的方法处理了抑制剂存在下,酶作用于一个底物,生成两个酶中間的系統,得到了該系統的动力学方程。根据微扰項消失的条件討論了用Lineweaver-Burk法作图时得到直綫关系的条件。当在不同的抑制剂浓度下,得到一組直綫交于第二象限或横軸时,則有K_1=K的关系。并且只有k_(+2)>>k_(+3)时,米氏常数才等于米氏絡合物的解离常数,亦即Botts和Morales的結論也能够在这个系統适用。此外对于在k_(+2)>k_(+3),和k_(+2)=k_(+3)的情况下,米氏常数与平衡常数之間的关系也进行了討論。应用本文推导的动力学方程,討論了胰凝乳蛋白酶,木瓜蛋白酶和半乳糖苷酶的动力学行为。鉴于一些轉換酶、裂解酶、(?)构酶、合成酶甚至于氧化还原酶也都包含两个酶中間物。本文的討論可能具有較为普遍的意义。