实验技术

疟原虫血涂片的复染与褪色作为教学标本的疟原虫血片,因常用香柏油观察、二甲苯擦拭、封片的加拿大胶 pH 偏低及空气中二氧化碳可致血膜褪色;或因血片染色过深,致虫体难以辨认。为此,进行了复染和褪色试验。     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

生物组织石蜡切片的不脱蜡染色程序

石蜡切片法是生物学中应用最广泛的一种研究技术,沿用至今已一百余年,形成了一个基本固定的操作程序,为人们所普遍采用。常规的石蜡切片的染色,必须首先用二甲苯将石蜡溶去(即脱蜡),然后经下行的梯度酒精将切片下降至水(水化),用染料的水溶液进行染色;染色后又经上行梯度酒精逐级脱水,经二甲苯透明后用树胶封藏。此染色程序不仅手续较烦琐,而且切片在染色后脱水时容易褪色以及在此过程中组织里一些孤立分散的细胞如孢子、     

简便制作保存蚊体孢子体及 虫幼虫的方法

1.疟原虫孢子体制作法大家知道,发现蚊体唾液腺内有孢子体感染,是难得的教学标本。但往往制作的结果很不满意,不是染液沉淀,就是孢子体染色后被水冲洗掉很多。近午来,笔者采用鲜血固定后染色保存,效果甚佳。方法是:待其感染有孢子体的唾液水滴在空气中自干,然后取耳垂血1—2滴涂在玻片上有孢子体的地方,干后溶血用姬氏(Giemsa's stain)或瑞志氏(Wright's stain)液按照染瘧原虫方法操作程序进行,这样的标本在高倍镜下看得十分清晰。油镜看后,再用二甲苯及镜纸拭油也不至減少孢子体的数目。如孢子体很多,可以多取一点血量稀释,再用裁玻片的一端取血涂在另外的玻片     

关于改革石蜡切片工艺的试验

众所周知,在石蜡切片的制作过程中,历来是用苯类(尤其是二甲苯)作为透明剂和石蜡的有机溶剂。组织块经酒精脱水后,必须再用二甲苯作为中间媒剂将酒精取代出来,然后才能进行透蜡。否则,虽然水分除尽,但组织内部积蓄酒精,石蜡仍难透入。同样,切片染色前和染色后,也需用二甲苯脱蜡和透明。因此,在整个制片过程中,不但要多次用到二甲苯,手续繁琐,而且组织块在二甲苯中浸渍时间较难掌握,久浸会使材料松脆,影响切片质量;时间不足又会影响透蜡效果。另外,苯类是有毒药品,且有致癌作用,对人体极为有害,国外组织学实验室     

蚤类染色体的制片方法及分带技术

本文首次介绍了蚤类染色体的空气干燥制片方法和分带技术。以蚤成熟三龄幼虫和成蚤生殖腺为材料,采用体外短期培养、空气干燥、Giemsa染色技术制片,具取材容易、操作简便、中期分裂相多且染色佳、标本不需封片即可长期保存等优点,克服了以往醋酸地农红压片法染色体分散不佳、杂质多、染色易褪色及标本需封片才能保存等缺点。在印鼠客蚤等四种蚤的染色体研究中均获得满意效果,成功率高,重复性好,尤以生殖腺染色体制片成功率为100％。在此基础上还摸索建立了蚤类染色体的C-分带、G-分带和银染技术。     

蚤类染色体的制片方法及分带技术

本文首次介绍了蚤类染色体的空气干燥制片方法和分带技术。以蚤成熟三龄幼虫和成蚤生殖腺为材料,采用体外短期培养、空气干燥、Giemsa染色技术制片,具取材容易、操作简便、中期分裂相多且染色佳、标本不需封片即可长期保存等优点,克服了以往醋酸地衣红压片法染色体分散不佳、杂质多、染色易褪色及标本需封片才能保存等缺点。在印鼠客蚤等四种蚤的染色体研究中均获得满意效果,成功率高,重复性好,尤以生殖腺染色体制片成功率为100%。在此基础上还摸索建立了蚤类染色体的C一分带、G一分带和银染技术。     

课堂教学中疟原虫血涂片染色方法的改进

疟原虫血涂片染色是高校寄生虫学实验课中的重要内容。传统的疟原虫血涂片染色采用的是经典的Giemsa染色法,但是染色效果受各种因素影响不稳定,严重影响教学质量。采用Diff-Quik染色方法进行染色发现,血涂片上的红细胞及疟原虫的形态与Giemsa染色结果相比更加明显和典型,染色背景干净无杂质,有利于进一步分辨疟原虫形态和进行数据统计。     

疟原虫厚血膜染色最佳条件的经验介绍

本文介绍疟原虫厚血膜染色采用一种瑞氏-姬姆萨混合快速染色法,并对其最佳条件作了初步摸索。当溶血剂(0.6%甲醛PBS)的pH值在7.0、溶血时间2分钟、染色时间6分钟获得的效果最佳。不仅缩短了染色时间,且被感染的红细胞仍保留淡红色残影。其它红细胞多被溶解。疟原虫形态完整,核红浆蓝,清晰易辨,而且标本可长期保存。克服了瑞氏或姬姆萨染色的不足,适用于临床和教学。现将操作方法简介于下:取血1小滴于玻片中央,按常规涂成直径约0.6cm的厚血膜。平置干燥后,滴加溶血剂6滴于血膜上溶血2分钟,再用同样大小的滴管加瑞氏-姬姆萨染液(4:1)配成的…     

火棉胶包埋组织切片及冰冻切片的连续切片与染色

近年来为了教学和研究所用之切片标本,曾广泛使用火棉胶包埋组织切片和冰冻切片法,这两种方法虽然它是有比石腊包埋组织切片稍厚一点,但它的优点是远超过了缺点。组织用石腊包埋,在组织经过不同浓度酒精脱水后,须用氯仿或二甲苯透明,再置于58℃温箱石腊中几个小时。以上透明剂具有使组织收缩变小,在经过这样高温之下,组织增加它由收缩而扭转和变形,纤维曲折,细胞及所含物质缩小,折光率增强,组织内所含之尖脂脂亦易于被以上透明剂所溶解,致染色不佳。作为观察和研究组织形态是不够美满的。因为石腊包埋组织制作切片有以上之缺点,     

中华大蟾蜍卵球受精过程中的细胞学研究

用蕃红、亮绿染色对中华大蟾蜍卵子受精过程的不同时期进行了观察。 材料均为受精前后(0—190分钟)的卵子。用Bataillon液固定,连续切片,蕃红和亮绿复染。光镜下观察。 结果 中华大蟾蜍成熟未受精的卵子处于第二次减数分裂中期。纺锤体位于动物极中央皮层,中期染色体只被蕃红着色。授精15—20分钟,精子入卵,仍为杆状,精虫星光已开始形成;授精40分钟,雌雄原核已具雏形,亮绿着色很淡;授精70分钟,两原核相联,亮绿着色加深,授精90分钟,两原核体积最大,亮绿着色最深;110分钟出现染色线,亮绿着色减弱,染色线被蕃红所染。授精120分钟进入第一次卵裂中期。细胞质亮绿染色加深。染色反应上的变化,表明了细胞周期中核质之间物质的转移,卵细胞质着色有明显的区域差别,表明受精前卵就已存在着“初级分化”(见图版)。     

介绍一种生物玻片标本简单染色法

(1)将切好的标本放在载玻片上,用滴管滴上95%酒精将材料固定(保存材料的构造成分,使其接近生活状态)约20分钟,然后换入50％酒精中放置5分钟,最后用清水洗净。(2)用另个滴管吸一些墨水(曾用民生红墨水及民生蓝墨水分别试验染色)加于材料上,染色一分钟。(3)用滴管吸清水将     

电泳和免疫扩散标本的染色比较及摄影实验

对流电泳和琼脂扩散阳性标本应及时染色或拍摄,便于长期保存查考。目前染色方法较多,为探索一种简易和着色佳的方法,以考马斯亮蓝、品红、胺基黑和偶氮胭脂红斗种方法作了     

动物组织苏木精——伊红不脱蜡染色

百余年来,石蜡切片苏木精—伊红染色一直是研究动物组织结构的主要技术,通常是采用甘油蛋白胶粘片,于染色前首先脱去石蜡,然后再行染色.本文介绍采用重铬酸钾明胶为粘片剂进行不脱蜡直接染色.实验结果表明,苏木精和伊红都能使不脱蜡片中的动物组织和细胞结构着色,其效果与脱蜡后染色基本相同.这种方法节约了大量的乙醇、二甲苯,简化了染色程序,缩短了制片时间,为教学实验、病理检查和科学研究提供了简便易行的制片方法.     

树脂包埋半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中的应用

目的探讨半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中的应用,寻找一种视神经形态学研究和疾病诊断的有效方法。方法健康Sprague-Dawley大鼠视神经分别行树脂包埋制成半薄切片与石蜡包埋制成石蜡切片,分别采用HE、甲苯胺蓝染色及髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组织化学方法染色,光学显微镜下观察并比较半薄切片与石蜡切片染色结果的差异。结果石蜡切片HE和甲苯胺蓝染色均显示视神经髓鞘不着色,MBP免疫组织化学染色示MBP阳性着色较重,着色较紊乱,髓鞘着色不清晰。半薄切片HE及甲苯胺蓝染色均显示髓鞘呈环形,着色清晰,颜色对比鲜明;MBP免疫组化染色结果可见髓鞘呈环形,非特异性染色不明显,阳性对比显著,可清晰显示髓鞘结构。结论半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中优于石蜡切片,可用于视神经疾病的诊断和研究。     

福尔马林长时间固定石蜡切片免疫组织化学染色体会

许多标本经过福尔马林长时间固定后,其免疫组织化学染色会具有一定的难度,就此,本人进行了如下总结：（1）切片入二甲苯,37℃,两次,各10min,彻底脱蜡。（2）无水乙醇,两次,各10min。（3）95％、90％、80％酒精各5min。     

应用VAN-Clear与低甲醛的病理组织处理改良方法的评价

目的探索一种可靠、稳定、高效、环保、可替代传统病理组织处理与制片方法的改良方法。方法选取10只实验大鼠,每只大鼠选取14种组织,每个组织均匀切成3块,第一块采用4%中性甲醛固定(改良中性甲醛组),第二块采用4%多聚甲醛固定(改良多聚甲醛组),第三块采用4%中性甲醛固定(传统中性甲醛组);两个改良组的组织经相应固定液固定后均用流水及75%酒精祛除组织的固定液,然后进入梯度酒精及VAN-Clear进行脱水透明;传统中性甲醛组在固定后不进行祛除固定液处理而直接入梯度酒精及二甲苯进行脱水透明。对比3组实验的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果和HE染色评分;比较取材室及技术室的甲醛、二甲苯及噪声污染的数据。结果两个改良组与传统组的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果及HE染色评分基本一致,3组HE切片的优良率均为100%,优级率均大于85%;甲醛及二甲苯检测结果远远低于我国的最高容许浓度,噪声监测优于中国环境噪声容许的夜间噪声标准。结论采用VAN-Clear以及低甲醛的病理组织处理改良方法可靠、稳定、高效、环保,可替代传统病理组织处理方法。     

应用H.E染色的鼻咽癌细胞涂片进行DNA含量测定和EB病毒基因原位杂交的研究

分析鼻咽癌常规 H.E染色细胞涂片分别作 Feulgen染色检测 DNA含量和原位杂交检测 EB病毒编码 RNAs(EBERs)的效果 ;将常规 HE染色的 9例正常鼻咽细胞涂片和 38例鼻咽癌细胞涂片用 1%酸性酒精褪色 ,然后作 Feulgen染色 ,应用图象分析仪测定涂片细胞 DNA含量 ,并将 38例鼻咽癌细胞病例的阳性涂片进行 EBERs原位杂交检测 ;结果显示正常鼻咽细胞均为 DNA二倍体核型 ,38例癌阳性涂片中呈 DNA二倍体者 6例 ,DNA非二倍体者 32例 (84.2 % ) ,癌细胞核 EBERs阳性者 35例 (92 .1% ) ;结果表明 HE染色的鼻咽癌细胞学涂片经褪色后作 Feulgen染色和原位杂交检测 ,能较满意进行 DNA和 EBERs分析 ,表明常规 H.E染色和褪色处理均不影响 Feulgen染色和 EB病毒原位杂交的质量效果。本检测方法可靠、可行 ,适用于常规染色细胞学样本的回顾性研究和随访研究 ,并可用于鼻咽癌可疑病人的诊断和鉴别诊断     

室间质控中AB-PAS染色的异常着色原因分析

目的 分析室间质控工作中AB-PAS染色异常着色产生的原因。方法 选取有局部肠上皮化生的完整胃壁组织的连续切片,分别进行PAS和AB单一染色,以及以下3种不同顺序的AB、PAS和Mayer苏木精（Mayer）联合染色：ABPAS-Mayer、PAS-AB-Mayer或PAS-Mayer-AB联合染色。结果 单一PAS染色时,胃黏膜上皮内的中性黏液和化生肠上皮杯状细胞内的混合性黏液均显示玫瑰红色;单一AB染色时,仅化生肠上皮杯状细胞内的混合性黏液显示湖蓝色;AB-PASMayer联合染色时,胃小凹上皮呈玫瑰红色,化生肠上皮呈紫蓝色,差异明显且细胞核着色清晰;PAS-AB-Mayer联合染色时,胃小凹上皮和化生肠上皮内杯状细胞均呈蓝紫色,无法区别,但细胞核着色正常;PAS-Mayer-AB联合染色时,胃小凹上皮和化生肠上皮内杯状细胞均呈蓝紫色,无法区别,而且细胞核着色不佳。结论 行AB和PAS联合染色时必须严格按照先行AB染色后行PAS染色,最后行苏木素Mayer染色的染色步骤,不能将染色顺序随意打乱,否则会出现中性、酸性和混合性黏液物质混染,或者细胞核不着色等异常染色结果,进而干扰病理诊...     

一种线虫,棘头虫快速透明方法

从７０％酒精保存液中取出的纯虫、棘头虫标本直接入高氏洋红中染色,再在乳酸液中透明,结果：虫体透明时间只需３－５ｍｉｎ,虫体结构更为清晰。