中国青鳉属鱼类新纪录：鳍斑青鳉

2015年11月在中国广西省靖西市龙江河(22°59′25″N,106°21′50″E,海拔664 m)采得青鳉属鱼类30尾,经鉴定为中国鱼类新纪录种——鳍斑青鳉(Oryzias pectoralis Roberts,1998)。其主要鉴别特征为:体形细长而侧扁;胸鳍基部具黑色斑块;背鳍和臀鳍鳍条无角化延伸;尾鳍末端呈圆弧状;尾鳍上下边缘的鳍条呈橙黄色。通过设计简并引物进行PCR扩增得到CO1基因序列,以其657 bp序列与同属其他种比较并构建邻接进化树,以斑马鱼(Danio rerio)和食蚊鱼(Gambusia affinis)为外群,所得系统树支持形态鉴定结果。该鱼标本现保存于湖南师范大学生命科学学院脊椎动物标本室。     

一种可高效转染的青鳉肌肉细胞系的建立与应用

在哺乳动物细胞系中转基因的效率相对较高而在鱼类细胞系中相对较低, 为了获得鱼类高效转基因细胞系, 我们从模式鱼类青鳉(Oryzias latipes)中分离和构建了肌肉细胞系OLM。该细胞系类似于纤维细胞, 在28℃ DMEM和10%的胚胎牛血清中培养了超过88代。通过染色体分析, 它属于两倍体并含有48条染色体。在脂质体介导下, 报告基因的转染效率可以达到40%, 在测试的其他鱼类细胞中转染效率最高。此外还构建了稳定转染转基因或者非编码RNA的细胞系。OLM细胞对常见的病毒SVCV、GCRV、SGIV等不敏感。综上所述, 研究在青鳉中建立了一种能高效转染的肌肉细胞系, 它适用于鱼类瞬时和稳定的转基因研究。     

形目鱼类连体胚胎两例

报道了鳉形目鱼类食蚊鱼(Gambusia affinis)和青鳉(Oryzias latipes)的连体胚胎现象各一例.上述连体胚胎均为腹部粘连,内脏各器官分别独立,产出或孵化后短时存活.     

青鳉鱼DBI基因全长cDNA的克隆与蛋白结构分析

地西泮结合抑制因子(diazepam binding inhibitor,DBI)具有抑制由葡萄糖诱导的胰岛素分泌、促进胆固醇跨线粒体膜转运和调节脂肪酸合成与代谢等多种生理功能。本研究使用反转录PCR结合RACE方法克隆了青鳉鱼(Oryzias latipes)的DBI基因全长cDNA序列。该序列全长592bp,包含长度为102bp的5'端非编码区(5'-UTR),长度为220bp的3'端非编码区(3'-UTR),和长度为270bp的开放阅读框,推测其编码89个氨基酸。同源性分析结果显示青鳉鱼DBI蛋白序列与大西洋鲑、鲤鱼、斜带石斑鱼、斑马鱼、非洲爪蟾、大鼠和人的同源性分别为82%、76%、76%、75%、72%、71%和70%,说明DBI基因在脊椎动物的进化过程中非常保守。同源建模显示青鳉DBI蛋白的4个α螺旋结构围成一个脂酰CoA结合口袋,与已测定果蝇DBI蛋白具有非常相似的三级结构。本研究结果为阐明脊椎动物在进化过程中DBI分子结构的演变规律及DBI在低等脊椎动物中的作用机理等提供了有意义的科学参考。     

铜和镉胁迫对海洋青鳉摄食行为的影响

以海洋青鳉(Oryzias melastigma)为试验动物, 分析了铜和镉两种重金属离子胁迫对海洋青鳉摄食行为特征的影响, 包括摄食响应时间、摄食量、摄食成功率和摄食效率等参数。结果显示, 随着Cu2+浓度的升高, 开始时, 海洋青鳉的摄食量有所升高, 当Cu2+浓度达到0.087 mg/L时有最大的摄食量和最短的摄食响应时间。随后, 摄食量出现下降, 在0.174 mg/L时达到最低。低浓度的Cu2+还能提高海洋青鳉的摄食成功率和摄食效率, 而Cu2+的高浓度和长时间暴露则降低海洋青鳉的摄食成功率和摄食效率。Cd2+对海洋青鳉的摄食行为具有明显的抑制效应, Cd2+抑制海洋青鳉摄食的最低可见效应浓度为 0.65 mg/L, 摄食量、摄食成功率和摄食效率均随着Cd2+浓度的升高而降低。此外, 在Cu2+和Cd2+胁迫下, 对食物的响应时间有性别差异, 雌性显著短于雄性, 还存在群体显著短于个体等现象。     

青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用

青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类, 为探究prdm14同源基因的潜在作用, 实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先, 将prdm14基因的部分编码区连接到pET32a质粒中, 构建重组表达载体pET32a-prdm14?600。随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3), 经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)诱导表达, 获得分子量为60 kD的Prdm14重组蛋白。接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化, 免疫家兔(Oryctolagus cuniculus), 6周后获得阳性抗体, 最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性。结果显示, 在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下, 可获得Prdm14重组蛋白的高效表达; 制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在HepG2细胞中过表达的青鳉Prdm14: EGFP融合蛋白。综上所述, 研究首次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体, 该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具。     

广东淡水鱼类弓背青鳉分类形态性状再描述

食蚊鱼Gambusia affinis的入侵导致弓背青鳉Oryzias curvinotus种群严重下降而趋于濒危。其模式标本产地种群(海南岛那大)已经灭绝,野外种群已多年未见报道。过去,研究者对正模标本的描述存在严重错误且难于复检,现亟需对其分类性状进行再描述及模式标本重建。本文对近期采自广州南沙岛的弓背青鳉孑遗种群进行了分类形态性状再描述,补充了活体及浸制标本彩色照片,并对其雌雄间的形态差异进行了统计分析。结果显示,弓背青鳉区别于其他青鳉鱼类的主要分类检索性状是臀鳍条数目为19.60±0.80(19~22)、体侧纵列鳞数目为28.51±0.67(27~30),定种的关键特征是背鳍-吻端/体长:雄鱼为(80.9±1.3)%、雌鱼为(82.2±1.0)%、全部为(81.6±1.3)%;同时,通过单因素方差分析、主成分分析及判别分析等多元统计方法证实了其种内存在的雌雄异形现象,文中回顾并澄清了有关弓背青鳉的分类形态性状问题。当前亟待加强弓背青鳉保护生物学研究并应采取有力的保护措施尽早对现存种群进行有效保护。     

青鳉(Oryzias latipes)性腺分化与发育的组织学观察

青鳉(Oryzias latipes)繁殖力强、繁殖周期短,为硬骨鱼类研究领域的模式生物。目前,尚无青鳉性腺分化与发育过程的系统资料。该文以青鳉孵化后不同时期的生殖腺为材料,经石蜡切片和HE染色后,于光学显微镜下观察其性腺的出现、分化及成熟过程。结果显示:孵化后5~10 d,仔鱼腹腔右侧已可见生殖腺,生殖细胞体积明显大于周围的体细胞;孵化后10 d,性腺开始分化,雌、雄性个体性腺出现结构上的差异,雌性个体内可明显观察到生殖包囊结构;随后,雌、雄性个体内先后可见卵子和精子的发生过程和组织学分期;孵化后50 d,首见卵巢腔结构和成熟精子。此外,还观察到性反转现象的特例,即两性特征共存的现象。该结果将为发育生物学、遗传生物学提供基础资料。