反义基因治疗

除了反义核酸和核酶外,最近又发展了一种新型的反义药物———反义肽核酸(PNA)。反义治疗的经典策略是阻断异常基因的表达;随着研究的深入,又发现了以反义药物调整基因表达比例(即调控基因治疗)的反义治疗途径。本文对反义基因治疗的策略、反义药物的设计及稳定性等方面的新思路和该领域的发展与应用前景作了概括介绍。     

感染性疾病的公共卫生问题与反义防治研究前瞻

从下述六方面概括论述了感染性疾病,尤其是病毒病的反义防治研究进展、存在问题、发展对策和应用前景：（一）感染性疾病的公共卫生问题;（二）反义技术的兴起;（三）反义较常规抗病毒疗法的优越性;１、靶点的精确选择;２、出现抗药性病毒变异株的风险可能降低;（１）用特异性不同的多种反义因子联合治疗;（２）定靶高度保守的病毒序列;（３）可用反义定靶调控序列;（四）反义治疗的潜在毒性;（五）反义物能在体内发挥作用吗？（六）可采用什么类型的反义方法？     

反义核酸药物的研究现状

反义药物以其合理设计药物的可能性和精确的特异性广泛吸引了人们的注意,但反义药物的研究并非如人们最初预想的那样简单。本文从其特异性,稳定性,透过靶细胞的能力,作用强度,活性判定,给药途径,安全性和毒性,生产成本等诸方面对反义药物的研究现状,现存问题进行了综述。相信伴随这些问题的解决,反义药物很可能成为药典的一部分,给疾病的治疗带来益处。     

反义核酸技术应用难点及研究进展

反义核酸技术已被广泛用于治疗药物、药物靶点确认、探知病理基因的表达。目前对其作用原理的研究集中于其被吸收入细胞的机制、在细胞内的分布、反义核酸序列的最佳长度和性质,并针对体内可能抑制反义核酸活性的影响因素,采取了各种相应的反义核酸优化技术,如对反义核酸的化学修饰、联结高效的转运载体、确定最佳的反义结合位点等,通过这些技术来提高其体内稳定性、跨细胞转运的效率,识别靶序列的特异性,以获得更多更好的反义药物投入实用。     

反义核酸抗肝炎病毒研究进展

病毒性肝炎的治疗一直是困扰人类的一个难题.目前可利用的药物仍屈指可数.反义核酸技术的发展为病毒性肝炎的治疗带来了新的希望.利用反义DNA,反义RNA和核酶技术来抑制乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒,在体外已进行了大量的研究,体内也进行了一些研究,为临床应用反义核酸治疗病毒性肝炎奠定了基础.     

Isis公司和Rosetta公司合作开发治疗肝细胞癌的反义药物

利用MicroRNAs（miRNA）开发诊断药和治疗药的以色列Rosetta Genomics公司和美国Isis Pharmaceuticals公司于2006年2月宣布缔结共同研究的合同，目的是开发抑制miRNAs功能的反义药物，用来治疗肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。[第一段]     

鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对肝癌细胞HepG2的影响

目的：探讨鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC）基因反义RNA对肝癌细胞HepG2的影响。方法：构建ODC反义RNA的真核表达质粒,将此质粒转染HepG2细胞后,RT-PCR和Western印迹法筛选ODC表达抑制的细胞株。以此细胞株为模型,分析ODC反义RNA对细胞生长、细胞周期和对抗癌药物米托蒽醌敏感性的影响。结果：成功构建ODC反义RNA真核表达载体并获得稳定低表达ODC的肝癌细胞株Hr1。与对照细胞相比,ODC低表达引起HepG2细胞生长抑制,72h生长抑制率为31%;流式细胞术检测细胞周期发现,Hr1G1期细胞数（56.2%）显著性高于对照（48.2%）,而S期细胞（25.5%）则显著性低于对照（34.9%）,提示ODC低表达导致G1期阻滞;用米托蒽醌（100μg/L）处理两种细胞后发现,Hr1对药物的敏感性显著性高于对照细胞,处理48h后药物对HepG2和Hr1的抑制率分别是33.4%和60.6%,72h后的抑制率分别是60.8%和83.8%。结论：ODC反义RNA能抑制肝癌HepG2细胞生长,在抗肿瘤治疗中具有潜在的临应用价值。     

反义核酸的骨架修饰及其应用

反义核酸的发展经历了反义寡核苷酸,混合骨架寡核苷酸和多肽核酸等几个阶段。这３种不同类型的反义核酸均能与ＤＮＡ或ＲＮＡ结合,阻断目的基因的表达。３种反义核酸的结构有较大差异,各自的性质和反义作用机理也不尽相同。尽管作用机制还不十分明确,反义核酸已广泛应用于生物学和医学等领域,作为反义药物用于治疗癌症等疾病,或作为试剂研究生物大分子的功能。     

爱滋病的反义抑制治疗

爱滋病的反义抑制治疗黄建生，王昌才，任大明（广州第一军医大学生物化学教研室，广州５１０５１５）（复旦大学遗传所国家重点实验室，上海２００４３３）关键词反义ＲＮＡ，爱滋病（ＡＩＤＳ）反义ＲＮＡ是一种与ｍＲＮＡ互补的ＲＮＡ分子，是反义基因的转录产物，它能...     

高血压基因治疗研究进展

高血压是一种多基因病症,传统的化学药物治疗有很多的缺点,拟议中的基因治疗方案是针对高血压易感基因设计出反义寡核苷酸（AS ODN）,将其导入体内后可以阻断特定基因表达,从而发挥治疗作用,这种治疗方法的特点是持续时间长,效果好,无副作用,但是由于有一些技术上的难题,此法目前正处于实验阶段。     

FPLC分离鉴定寡脱氧核苷酸片段

机器合成的反义核酸药物需要有效的鉴定纯度方法,用ＭＯＮＯ－Ｑ柱在ｐＨ１２时以ＮａＣｌ浓度度洗脱,可以将１９－２１个碱基的小片段寡核苷到很好地分开,因此快速蛋白质液相色谱（ＦＰＬＣ）可以用来分离鉴定反义核酸药物。     

靶向C—Raf-1基因的反义核酸抗乙型肝炎病毒活性研究

目的：通过体内外实验验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸是否具有抑制乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：设计靶向c-Raf-1基因的反义核酸,并在细胞水平进行体外抗HBV活性筛选,通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化,通过体内药效学实验进一步验证反义核酸的抗HBV效果。结果：经体外筛选,靶向c-Raf-1基因的反义核酸Raf-3145具有相对明显的抑制HBV表面抗原（HBsAg）的作用,并可剂量依赖性地抑制c-Raf-1基因的表达;体内药效学结果显示,反义核酸Raf-3145在30 mg/kg剂量下对HBsAg的表达具有一定的抑制作用。结论：经体内外活性评价,初步确定了靶向宿主基因c-Raf-1的反义核酸具有一定的抑制HBsAg表达的活性,也进一步验证了c-Raf-1基因可以作为抗HBV药物设计的候选靶点。     

反义技术研究进展

过去几年目睹了反义技术的爆炸性发展,文章较全面地评述了反义技术的主要内容和近几年来的研究进展,它们包括几类受人注意的DNA类似物、RNA和Ribozyme.。此外,基于研究现状还展示了反义技术的前景。     

反义RNA调控的不同方式

反义ＲＮＡ调控的不同方式宫明,宫锋（山东大学微生物系,济南２５０１００）关键词反义ＲＮＡ,调控方式反义ＲＮＡ最早发现于原核生物,但是１９８６年Ｗｉｌｌｉａｍｓ发现真核细胞中也存在天然反义ＲＮＡ。不同的反义ＲＮＡ其功能和作用方式不尽相同,它们控制着噬菌...     

载体疫苗,反义治疗及抗病育种的研究进展

载体疫苗、反义治疗及抗病育种的研究进展张德礼（北京军区后勤部军马防治检验所,１０００７１）近年来,国内外在利用载体技术制各重组疫８、利用反义技术治疗疾病以及通过转基因技术进行抗病育种方面的研究取得了重大进展。一、病毒载体疫苗载体疫苗是以病毒或细菌作载...     

反义寡核苷酸的抗病毒作用及其研究进展

根据靶核酸序列设计的具有一定长度的反义寡核苷酸可与靶核酸特异结合,从而发挥调节基因表达的功能。本文涉及反义寡核苷酸及其类似物的抗病特性、抗病毒机理、反义寡核苷酸的毒性和药物动力学以及未来的发展前景。     

多肽核酸在分子生物学中的应用

多肽核酸（peptide nucleic acid,PNA）是DNA类似物,其生物性质稳定,不被核酸酶和蛋白酶消化降解。PNA遵循Watson—Crick规则和Hoogsteen规则与单链DNA（RNA）以序列特异性形成极其稳定的杂交二聚体或三聚体。根据PNA的生物特性,以PNA为基础的PNA探针和PCR钳制技术在肿瘤和老化研究以及染色体畸形、细菌和DNA点突变诊断等方面的应用日益增多。PNA协助的携带非天然氨基酸的氨基酰化tRNA的改造已获得成功,并且合成了人工蛋白。作为反义抑制药物,PNA在抑制细菌和病毒的基因表达以及蛋白质翻译方面也取得了初步成果。基于PNA的由RNA触发的药物释放系统设计巧妙,是十分有希望的靶向治疗药物。     

bFGF反义寡核苷酸增强鼠黑色素瘤B16细胞化疗药物敏感性研究

目的:研究bFGF反义硫代寡核苷酸增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性作用。方法:设计、合成bFGF寡核苷酸,用聚乙烯亚胺(polyemyleneimine,PEI)介导bFGF反义硫代寡核苷酸转染入黑色素瘤B16细胞,MTT法检测bFGF反义硫代寡核苷酸及其与化疗药物联合处理后的细胞增殖率;半定量RT-PCR测定bFGF反义硫代寡核苷酸转染后细胞中bFGF mRNA水平;流式细胞仪分析bFGF反义硫代寡核苷酸诱导的细胞凋亡。结果:bFGF反义硫代寡核苷酸对B16细胞增殖的抑制率为64.8%,且呈剂量依赖效应。B16细胞中bFGF mRNA被bFGF反义硫代寡核苷酸显著降低,为对照细胞的57.9%,且bFGF反义硫代寡核苷酸诱导B16细胞凋亡,凋亡率为41.8%。bFGF反义硫代寡核苷酸转染能显著增强B16细胞对阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂的敏感性,非特异性硫代寡核苷酸不影响阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂抑制B16细胞增殖。结论:bFGF反义硫代寡核苷酸显著增强B16细胞的化疗敏感性,表明其可协同化疗药物用于治疗肿瘤。     

锁核酸——一种新的反义寡核苷酸

1978年 ,Ｚａｍｅｃｎｉｋ等[1] 开创了根据碱基互补配对原理 ,设计反义寡核苷酸以用于基因治疗的研究。相当时间内 ,反义治疗成为研究领域的热点。至今该研究已经进行了2 0多年 ,但所取得的成果一直不令人满意。其中的一个关键问题是反义寡核苷酸的易降解及杂交结合力不强。所以 ,近十几年来 ,科学家们一直在找寻一种强有力的核苷酸替代物质。这种物质既要有强大的杂交亲合力及抗核酸酶能力 ,又必须对人体没有毒性[2 ] 。已经有很多关于各种核苷酸类似物被用于反义研究的报道 ,如硫代磷酸寡核苷酸、甲基化寡核苷酸、肽核酸 (ＰＮＡ)等。近…     

反义技术在抗HBV感染中的应用

反义技术是近些年来随着现代分子生物学技术的发展而产生的新的生物医学治疗技术。它采用反义核酸分子抑制、封闭或破坏靶基因组的技术手段,包括反义寡核苷酸、核酶及RNA干扰等。反义分子通过与靶基因异性互补配对结合,阻断靶基因的复制、转录或翻译过程,从而发挥抗病毒作用。针对乙型肝炎病毒的反义技术也有了广泛而深入的研究。根据反义技术在分子、细胞以及动物水平上的研究表明：反义技术能够高效、特异地抑制HBV的复制与表达。