莪术醇对非酒精性脂肪性肝大鼠肝功能和肝纤维化的影响及机制*

目的:探讨莪术醇(CC)对非酒精性脂肪性肝(NAFLD)大鼠模型肝功能和肝纤维化的影响及机制。方法:采用高脂饮食构建非酒精脂肪肝炎(NASH)伴肝纤维化的大鼠模型,将60只SD大鼠随机分为:空白对照组、模型组(NASH)、NASH+复方鳖甲软肝片(CBT)组(阳性对照组)、NASH+CC组(25、50、100 mg/kg),每组10只。测量大鼠肝脏占体重的百分比,测量大鼠高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,HE染色观察肝纤维化情况,免疫组化检测鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及肝组织核因子κB p65(NF-κB p65)的阳性染色情况,蛋白印迹(Western blot)检测α-SMA、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达及Toll样受体-4(TLR4)、转化生长因子激活激酶-1(TAK1)、NF-κB p65、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中白介素(IL-6、IL-10、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠HDL、 IL-10含量、MMP-1蛋白表达量显著降低(P＜0.05),TG、ALT、AST、肝组织P65阳性率,α-SMA、TIMP-1、TLR4、TAK1、NF-κB p65、VCAM-1表达、IL-6、TNF-α及IL-1β含量显著升高(P＜0.05)。与模型组相比,CBT和CC处理后大鼠HDL、 IL-10含量、MMP-1蛋白表达量显著升高(P＜0.05),TG、ALT、AST、肝组织P65阳性率,α-SMA、TIMP-1、TLR4、TAK1、NF-κB p65、VCAM-1表达、IL-6、TNF-α及IL-1β含量显著降低(P＜0.05),其中模型+CC组以高浓度组改善最显著(P＜0.05),但各剂量改善幅度均低于模型+CBT组(P＜0.05)。结论:莪术醇通过调节TLR4、TAK1、NF-κB p65信号通路,减轻炎症反应,改善肝功能,从而缓解非酒精性脂肪肝肝肝纤维化,且在一定范围内呈浓度依赖性。     

miR-124-3p靶向TLR4抑制流感病毒性肺炎小鼠的炎症反应

目的:探讨miR-124-3p靶向Toll样受体4(TLR4)对流感病毒性肺炎小鼠炎症反应的影响。方法:建立流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染所致病毒性肺炎小鼠模型,采用RT-qPCR测定肺组织miRNA-124-3p表达水平。病毒性肺炎小鼠尾部注射miR-124-3p agomir或agomir NC后,第4 d摘眼球取血并取出肺组织,ELISA检测血浆中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,HE染色观察肺组织病理变化,Western印迹测定TLR4和核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白水平。结果:与正常肺组织比较,病毒性肺炎小鼠肺组织miR-124-3p表达量降低(P0.001);miR-124-3p agomir注射组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α明显低于注射agomir NC组和模型组(P0.001),而高于正常组;HE染色结果表明miR-124-3p agomir注射组小鼠的肺组织炎细胞渗出和浸润较agomir NC组和模型组减轻;与agomir NC组比较,miR-124-3p agomir注射组的TLR4、NF-κB p65表达减少(P0.01)。结论:miR-124-3p抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻流感病毒性肺炎小鼠的炎症反应。     

过表达miR-31对结肠炎模型小鼠TLR4/NF-κB信号通路及凋亡蛋白的调控

目的: 探讨miR-31对DSS诱发结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路和凋亡相关蛋白的影响。方法: ①小鼠结肠炎实验:用1%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠溃疡性结肠炎(UC)。14只FVB非转基因小鼠随机分为control组(n=6),DSS组(n=8),16只FVB miR-31转基因小鼠随机分为miR-31过表达组(n=8),miR-31过表达+DSS 组(n=8),DSS溶于水后通过饮水给予小鼠。DSS组和miR-31+DSS组第一周饮用1%DSS水,第二周饮用正常无菌水,第三周饮用1%DSS水,如此5周后造模完成,之后留取小鼠的结肠组织,通过Western blot和IHC检测小鼠结肠组织NF-κB p65、TLR4、Bax、Bcl-2蛋白的表达;TUNEL检测小鼠结肠组织细胞凋亡。②细胞培养实验:在人结肠上皮细胞系HCT 116细胞中通过脂质体转染的方法转染miR-31 mimic和inhibitor,使miR-31过表达或敲低,每组均进行三次重复,48 h后收取细胞,通过Western blot检测NF-κB p65、TLR4蛋白的表达。结果: ①动物实验中,与control组相比,小鼠结肠组织中DSS组和miR-31过表达组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05或P＜0.01);且与DSS组相比,miR-31+DSS组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数也显著升高(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01)。②细胞实验中,与control组相比, HCT 116细胞过表达miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),敲低miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平下降(P＜0.05)。结论: miR-31通过促进TLR4/NF-κB信号通路和介导肠上皮细胞凋亡促进结肠炎的发展。     

姜黄提取物对小鼠肝纤维化的影响

目的:探究姜黄提取物对小鼠肝纤维化的影响。方法:通过CCl4诱导建立肝纤维化小鼠模型,经过姜黄提取物和姜黄素给药干预后,测定并比较每组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平和肝脏中TC、TG、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平。结果:与模型组相比,经姜黄提取物给药干预后,小鼠血清中ALT(P0.01)、AST(P0.05)、TNF-α(P0.05)、IL-6(P0.05)有显著差异,而TG及TC无显著差异;经姜黄素给药干预后,血清中ALT(P0.01)、AST(P0.01)、TG(P0.05)、TNF-α(P0.05)、IL-6(P0.05)有显著差异,而TC无显著差异。与模型组相比,姜黄提取物及姜黄素给药的小鼠肝脏组织中的TG、TC、SOD、MDA和GSH-Px均无显著差异。与姜黄素给药组相比,经姜黄提取物给药干预后,小鼠血清及肝脏中的各项生化指标均无显著差异。病理切片分析观察结果表明,与模型组相比,姜黄提取物给药组及姜黄素给药组小鼠的胶原纤维沉积显著减少,2组间无显著差异。结论:姜黄素提取物对CCl4诱导的小鼠肝纤维化有一定的改善作用,且与姜黄素的效果相当。     

小鼠肝纤维化中内质网应激分子的表达与作用

[目的]利用高脂饲料和异种血清诱导建立肝纤维化模型,检测内质网应激分子在该纤维化模型中的作用及机制。[方法]收集各组小鼠血清进行ALT检测,对小鼠肝组织进行HE和Masson染色观察肝组织的结构变化以及胶原纤维状况,并分别用Western和RT-PCR检测组织内CRT、GRP78、TLR2等基因的表达。[结果]与正常对照组(48.8±6.1 U/L)相比高脂饲料饮食组(139.7±13.4 U/L)、腹腔注射异种血清组(72.8±7.2U/L)以及高脂饲料联合腹腔异种血清注射组(193.0±14.1 U/L)血清ALT显著升高(p0.05);镜下也观察到肝细胞脂肪变性,大量的胶原纤维产生;肝组织内GRP78和TLR2基因mRNA水平、CRT蛋白水平均升高(p0.05)。[结论]高脂饲料和异种血清诱导建立的肝纤维化模型显示内质网应激与肝纤维化的发生发展密切相关。     

雷公藤甲素致小鼠肝损伤的机制研究

本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17、IL-6、维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)mRNA表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-6蛋白表达水平,Western blot法检测小鼠肝脏中TLR4蛋白表达水平。与对照组比较,雷公藤甲素模型组小鼠血清ALT水平显著升高(P0.005),HE染色切片显示较多的肝细胞坏死和炎症细胞浸润,IL-17、IL-6、ROR-γt mRNA表达水平和IL-17、IL-6蛋白表达水平显著升高(P0.005),此外,TLR4蛋白表达水平显著升高(P0.005)。结果表明,雷公藤甲素所导致的肝损伤可能通过激活TLR4信号,增加IL-17、IL-6的表达,影响Th17特异性转录因子ROR-γt,进而促进Th17细胞活化,增强其致炎功能。     

白藜芦醇抑制肠癌细胞焦亡的作用*

目的: 研究白藜芦醇(Res)对肠癌细胞焦亡的影响。方法: ①葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠结肠癌(CRC)实验:30只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Contro组),氧化偶氮甲烷(AOM)组,AOM/DSS组,AOM/DSS+Res组和Res组,每组6只,造模周期共70 d。第1周第1日对AOM组、AOM/DSS组和AOM/DSS+Res组小鼠AOM(10 mg/kg)腹腔注射一次,无菌水饮水,1% DSS水供AOM/DSS组和AOM/DSS+Res组饮用,对AOM/DSS+Res组和Res组小鼠灌胃给予Res(50 mg/kg),造模结束后,取小鼠结肠组织固定、包埋、切片; IHC和Western blot检测小鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达情况。②离体实验:HCT 116细胞给予Res(2.4 μg/L)以及转染miR-31,加Res实验分为4组,分别标记0 h、12 h、24 h、48 h组;细胞转染分组为5组,即control组、miR-31 mimic组、miR-31 mimic+Res组、miR-31inhibitor组、miR-31inhibitor+Res组,48 h后收集细胞,每组设置三个复孔,并通过Western blot检测细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达情况。结果: 动物实验:与control组相比较,AOM/DSS组NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达显著升高(P<0.01),AOM/DSS+Res组NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达水平相较于AOM/DSS组有显著下降(P<0.01);细胞实验:与control组相比,miR-31 mimic组NLRP3(P<0.01)、GSDMD-N(P<0.05)、IL-18(P<0.01)蛋白表达显著升高, miR-31 inhibitor组NLRP3、GSDMD-N、IL-18蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论: Res可通过细胞焦亡抑制结肠癌。     

黑果枸杞汁对大鼠酒精性肝损伤的保护作用*

目的: 研究黑果枸杞汁对大鼠酒精性肝损伤的保护作用,探讨其中Toll样受体4(TLR4)/p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的调节机制。方法: 60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(C)、模型组(M)、低剂量黑果枸杞汁组(LLM)、中剂量黑果枸杞汁组(MLM)、高剂量黑果枸杞汁组(HLM),每组12只。M、LLM、MLM和HLM组每天以20 ml/kg(8 g/(kg·d))剂量分2次灌胃400 g/L酒精,C组于相同时间点灌胃等体积蒸馏水。每日首次酒精灌胃前4 h,黑果枸杞汁各剂量组分别以2.4、4.8、9.6 ml/(kg·d)进行灌胃,其他组于相同时间点灌胃等体积蒸馏水。实验周期4周,末次实验结束后24 h处死大鼠,取血液和肝脏,计算肝脏指数,HE染色观察肝脏组织形态,比色法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,免疫组化法检测肝脏TLR4、p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白质表达,酶联免疫吸附试验检测肝脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-18(IL-18)水平。结果: 与C组比较,M组成功建立酒精性肝损伤模型。与M组比较,黑果枸杞汁各剂量组的相关指标出现改善,其中HLM组肝脏组织形态改善最为显著,其肝脏系数、血清ALT和AST、肝脏TLR4蛋白质表达、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、TNF-α、IL-1β和IL-18水平均显著降低(P＜0.05或P＜0.01),肝脏IL-10水平显著升高(P＜0.01)。黑果枸杞汁各剂量组组间比较,肝脏系数、血清AST、肝脏TLR4蛋白质表达、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、TNF-α和IL-18水平,HLM组较LLM组均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);肝脏IL-10水平,HLM组较LLM和MLM组均显著升高(P＜0.05或P＜0.01);其余主要指标组间比较均无统计学差异(P＞0.05)。结论: 黑果枸杞汁可以通过调控TLR4/p38 MAPK信号通路,改善炎症应激,缓解大鼠酒精性肝损伤,高剂量组效果优于其他剂量组。     

microRNA-129-5p在脓毒症患者血清中的表达及对肺内皮细胞的影响

该研究旨在探讨miR-129-5p(microRNA-129-5p)在脓毒症患者血清中的表达及对肺内皮细胞的影响。收集临床脓毒症患者的血液样本,通过荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-129-5p的水平并分析其表达水平与患者临床特征的关系。在肺微血管内皮细胞(HPMEC)中过表达miR-129-5p后,用Transwell和ELISA实验检测其对细胞迁移以及炎症因子释放的影响。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,脓毒症组miR-129-5p的表达水平降低(P0.05);与脓毒症组相比,脓毒性休克组miR-129-5p的表达水平更低(P0.05)。miR-129-5p的表达与氧合指数呈正相关,与降钙素原、IL-1β、IL-6、TNF-α水平呈负相关(P0.001),且脓毒性休克组的28天死亡率较脓毒症组高(P0.05)。过表达miR-129-5p可以明显促进细胞的迁移,减少炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的释放。综上所述,miR-129-5p在脓毒症模型中低表达,病情越重其水平越低,且与氧合指数、降钙素原水平相关。过表达miR-129-5p可以明显促进细胞的迁移并减少炎症因子的释放。     

益生菌干预对肥胖小鼠肝脏miR-33 和miR-122表达的影响

目的探讨益生菌干预对高脂饮食诱导肥胖小鼠肝脏miR-33和miR-122表达的影响。方法 18只雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、肥胖组和益生菌干预组,每组6只,分别给予标准饲料、高脂饲料以及高脂饲料+益生菌合剂灌胃,自由采食及饮水,连续喂养6周。每周测量3组小鼠的体质量,6周后,留取小鼠血液样本采用全自动生化仪检测小鼠血脂,安乐法处死小鼠,留取小鼠肝脏样本Hair-pin RT-PCR法检测miR-33和miR-122的含量。结果与对照组小鼠相比,肥胖组小鼠体质量明显增加(t_(2周)=3.985,t_(3周)=4.751,t_(4周)=4.380,t_(5周)=4.728,t_(6周)=4.112,均P0.01);益生菌干预组小鼠体质量较肥胖组明显降低(t_(3周)=3.694,t_(4周)=4.415,t_(5周)=3.752,t_(6周)=3.392,均P0.01);肥胖组小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白含量较对照组明显升高(t=10.850,t=7.024,均P0.01),益生菌干预组小鼠较肥胖组小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白含量降低(t=3.034,t=2.881,均P0.05),但与对照组仍有差异。与对照组小鼠相比,肥胖组小鼠肝脏miR-122的表达升高(t=9.170,P0.01),miR-33的表达降低(t=3.420,P0.05),益生菌干预组小鼠较肥胖组小鼠miR-122的表达降低(t=3.204,P0.05),miR-33的表达升高(t=2.070,P0.05)。结论益生菌干预能够影响高脂饮食小鼠肝脏miR-33和miR-122的表达,这可能是益生菌干预改善高脂饮食小鼠肝脏脂代谢的机制之一。     

白细胞介素-1家族细胞因子水平与非酒精性脂肪性肝病及非酒精性脂肪性肝炎病程进展的相关性分析

目的:探讨并分析血清白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)及非酒精性脂肪性肝炎(NASH)病程进展的相关性。方法:选取我院收治的54例NAFLD患者为研究对象,根据NAFLD活动度积分(NAS)积分分为非NASH组和NASH组;另选取同期来我院体检的30例健康人群作为对照组。比较各组临床特征及相关生化指标,分析血清IL-1RA、IL-1β、IL-18水平与各生化指标及NAS积分的相关性。结果:NAFLD患者体重指数(BMI)、丙氨酸转氨酶(ALT)、谷氨酰转肽酶(GGT)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(GLU)、IL-1β和IL-18水平均显著高于对照组(P0.05),血清IL-1RA、高密度脂蛋白(HDL)低于对照组(P0.05),其中NASH组患者ALT、AST、GGT、IL-1β和IL-18水平高于非NASH组(P0.05),非NASH组血清IL-1RA水平高于NASH组(P0.05)。相关性分析结果显示,相关性分析结果显示,血清IL-1RA水平与NAS积分呈负相关(P0.05),与BMI、ALT、GGT、TG、低密度脂蛋白(LDL)呈正相关(P0.05),IL-1β和IL-18水平与NAS评分呈正相关(P0.05)。结论:血清IL-1RA、IL-1β和IL-18水平与NAFLD及NASH患者病情进展有关,可反应其病变严重程度,血清IL-1RA后期持续分泌不足使其对炎症的抑制作用减弱可能是NAFLD患者病情进展至NASH的重要原因。     

糖皮质激素对小鼠急性肝衰竭的干预作用研究

摘要 目的：探讨糖皮质激素对小鼠急性肝衰竭（Acute liver failure, AHF）的干预作用。方法：通过腹腔注射D-GaIN/LPS构建AHF小鼠模型,并随机分为对照组、AHF模型组（AHF组）和糖皮质激素处理急性肝衰竭组（GCs + AHF组）。通过全自动生物化学分析仪检测小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL水平;采用ELISA试剂盒测定小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6水平;通过定量PCR检测mRNA表达水平;苏木精-伊红（H&E）染色检测肝组织病理学情况;免疫组织化学检测肝组织中SOX9表达水平;蛋白质印迹检测Hedgehog信号通路关键蛋白因子的表达水平。结果：与对照组相比,AHF组小鼠血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高,SOD、GSH和CAT活性水平显著降低（P＜0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低,SOD、GSH和CAT活性水平显著升高（P＜0.01）。H&E染色结果显示,对照组小鼠的肝脏切片显示正常的细胞结构,AHF组小鼠出现广泛的细胞坏死和炎性细胞浸润;与AHF组相比,GCs + AHF组小鼠中细胞坏死和炎性细胞浸润等病理变化显著减弱。免疫组织化学结果显示：与对照组相比,AHF小鼠肝脏中SOX9的表达水平显著升高（P＜0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组小鼠肝脏中SOX9的表达水平显著降低（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组相比,AHF组小鼠的Hedgehog通路关键蛋白因子Shh、Ptch-1和Gli-1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组的Shh、Ptch-1和Gli-1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论：GCs可有效改善AHF小鼠肝功能指标,降低炎性因子表达,提高急性肝衰竭小鼠抗氧化能力,并使Hedgehog通路关键蛋白因子表达恢复正常。     

轻断食对高脂高胆固醇诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠焦亡的影响

该实验旨在研究轻断食对高脂高胆固醇诱导的非酒精性脂肪肝大鼠焦亡的影响。该研究将SD大鼠随机分为正常饮食饲喂的对照组、高脂高胆固醇饲喂诱导非酒精性脂肪肝炎模型组以及其相对应的轻断食组,饲喂16周后,收集大鼠腹主动脉血浆和肝脏标本,检测血浆ALT与AST的活性;检测肝脏总胆固醇(total cholesterol,TC)与甘油三酯(triglyceride,TG)的含量;HE和Masson三色染色观察肝脏病理变化;Western blot与qRT-PCR检测各组肝脏组织焦亡相关蛋白与基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、消化道皮肤素D(gasdermin D,GSDMD)和白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)的表达。与对照组相比,模型组肝细胞脂肪变性明显,出现纤维沉积,血浆ALT、AST和肝脏TC、TG含量明显升高,焦亡相关蛋白与基因Caspase-1、GSDMD和IL-1β含量明显升高(P0.05);与模型组相比,轻断食组细胞脂肪变性显著减轻,无大量纤维沉积,血浆ALT、AST和肝脏TC、TG含量明显降低,焦亡相关蛋白与基因Caspase-1、GSDMD和IL-1β含量明显降低(P0.05)。实验表明,轻断食可能通过抑制Caspase-1、GSDMD和IL-1β介导的细胞焦亡而改善非酒精性脂肪性肝炎。     

有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏CNPY2-PERK通路的影响*

目的: 探讨有氧运动对高脂诱导小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响及其肝脏冠层成纤维细胞生长因子信号调节器 2 (CNPY2) - PKR样内质网激酶(PERK)机制。方法: 8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(C)、对照+运动组(CE),NAFLD模型组(M)和NAFLD模型+运动组(ME),每组10只。C组和CE组小鼠给予普通饲料,M组和ME组小鼠给予高脂饲料(脂肪供能占比为60 %),连续喂养18周至实验结束,取小鼠血清和肝脏。CE组和ME组从第10周起进行有氧跑台训练(12 m/min,每次60 min,每周5 d)。检测小鼠血清总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;观察小鼠肝组织病理学形态;检测肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2a、CHOP、CNPY2 mRNA、PERK mRNA表达和CNPY2、PERK的阳性表达。结果: 与C组比较,M 组小鼠的血清LDL-c、TC、TG、ALT和AST水平显著升高(P＜0.05),HDL-c水平显著降低(P＜0.05);小鼠肝组织可见明显的肝脂肪性变,肝细胞脂滴数量增加,肝组织的CNPY2、CNPY2 mRNA、PERK、PERK mRNA、p-eIF2a、CHOP表达、CNPY2和PERK阳性表达均显著升高(P＜0.05);而CE组的上述指标均没有显著性差异(P＞0.05 )。与M 组比较,ME组小鼠的血清LDL-c、TC、TG、ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),小鼠肝组织脂肪性变明显减轻,肝细胞脂滴数量显著减少,肝组织的CNPY2、CNPY2 mRNA、PERK、PERK mRNA、p-eIF2a、CHOP表达、CNPY2和PERK阳性表达均显著降低(P＜ 0.05)。结论: CNPY2-PERK通路参与NAFLD的形成。有氧运动可有效改善NAFLD,其机制可能与有氧运动降低CNPY2-PERK通路相关分子表达有关。     

双歧杆菌缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎作用机制的研究

目的通过RT—PCR检测IECs中TLR2与TLR4的表达,通过荧光定量PCR检测IECs中IL-1和TNF-α的表达,以对双歧杆菌预防与辅助治疗UC作用机制加以探讨。方法将36只Babl／c小鼠随即分为3组,即正常对照组（N）、DSS诱导组（D）、双歧杆菌喂养组（B）。N组不施加作用,D组生理盐水灌肠2周,并在第2周给以2％的DSS自由饮用;双歧杆菌组双歧杆菌灌肠2周,并在第2周再给以2％的DSS自由饮用。2周后处死小鼠做组织切片和分离IECs并提取IECs中的总RNA,用RT—PCR检测TLR2、TLR4的表达,用Real time RT—PCR检测IL-1和TNF-α表达。结果双歧杆菌组IECs表达TLR2远远高于单纯的DSS诱导组,结果具有统计学意义,而双歧杆菌组IECs表达TLR4、IL-1和TNF-α则远远低于单纯的DSS诱导组,结果具有统计学意义。结论双歧杆菌通过与诱导IECs中TLR2的表达而抑制其TLR4、IL-1和TNF一Ⅸ的表达,从而达到预防与辅助性治疗DSS诱导的UC作用。     

三种金花茶提取物降脂作用实验研究

目的:探讨金花茶浓缩液、金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物以及金花茶水提物对高脂血症小鼠血脂的调节作用。方法:将小鼠按照体重随机分成正常饮食组和高脂饮食组,分别给予正常饲料和高脂饲料喂食,4周后将高脂饮食小鼠按照体重以及血脂水平(TC)随机分成金花茶浓缩液组、金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物组、金花茶水提物组以及辛伐他丁组。3种金花茶提取物以及辛伐他丁混悬液连续灌胃10周,同时给予高脂饮食。末次给药后禁食不禁水12 h,摘眼球取血,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)。结果:与模型组相比,金花茶浓缩液和辛伐他丁能显著降低血清TC、TG、LDL-C水平(P0.01或P0.05),但是对HDL-C无明显调节作用;对血清中的AST、ALT、SOD以及MDA影响不大。金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物以及水体物对血清中的TC、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT、SOD及MDA无明显的调节作用。结论:金花茶浓缩液对高脂血症小鼠的血脂具有良好的调节作用。     

Nrf2激动剂CDDO-Im对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪变性的影响

摘要 目的：探究Nrf2激动剂CDDO-Im对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪变性的作用。方法：33只雄性C57BL/6J小鼠随机分为两组：一组16只饲喂普通饲料,另一组17只饲喂高脂饲料建立肥胖模型。造模成功后将小鼠随机分成四组：普通饲料溶剂对照组（Control ND组）、普通饲料Nrf2激动剂组（Nrf2(+) ND组）、高脂饲料溶剂对照组（Control HFD组）和高脂饲料Nrf2激动剂组（Nrf2(+) HFD组）。分别给予Nrf2激动剂CDDO-Im和等体积溶剂灌胃干预6周后,检测各组小鼠血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（T-CHO）和低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）。苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏组织形态学变化。RT-qPCR检测肝脏Nrf2下游抗氧化基因Nqo1、Ho1和Gclc的mRNA表达水平,Western Blot检测肝脏NQO1、HO-1和GCLC的蛋白表达水平。结果：与正常小鼠相比,肥胖小鼠的体重、TG和LDL-C升高（P＜0.05）,肝脏脂肪变性增加,GCLC的蛋白表达水平降低（P＜0.05）。在肥胖小鼠中,与溶剂对照组相比,Nrf2激动剂组小鼠的体重、血清TG降低（P＜0.05）,肝脏脂肪变性减轻,Nqo1和Gclc的mRNA表达水平升高（P＜0.05）,NQO1和GCLC的蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论：Nrf2激动剂CDDO-Im可改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪变性,可能与Nrf2激动剂CDDO-Im激活抗氧化基因的表达来减轻肝细胞氧化应激有关。     

银杏黄酮对非酒精性脂肪肝模型小鼠的作用及NF-κB在其机制中的相关性分析

本文观察银杏黄酮对非酒精性脂肪性肝(NAFLD)模型小鼠的作用,并分析NF-κB与小鼠肝脏脂肪变性及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的相关性。170只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、银杏黄酮高[300mg/(kg·d)]、中[150 mg/(kg·d)]、低[75 mg/(kg·d)]剂量组。采用高脂饲料构建非酒精性脂肪肝小鼠动物模型,分别于给药后4周、8周和12周末处死,观察肝脏病理变化,计算肝指数,检测血清总胆固醇(TC)、ALT、TNF-α以及肝组织NF-κB的表达。各剂量银杏黄酮组小鼠肝指数,血清TC、ALT和TNF-α水平,肝组织NF-κBp65的表达量比模型组显著降低,肝脏脂肪变性明显减轻(P0.05或P0.01);肝组织NF-κBp65相对表达量与肝脏脂肪变性程度及血清ALT含量呈正相关(r0、P0.01或P0.05)。实验结果表明:银杏黄酮可降低NAFLD小鼠血脂、减轻肝脏脂肪变性、改善肝功能指标及肝脏大体形态,且有一定的剂量和时间依赖性;NF-κB上游炎症通路可能是其作用的主要机制。     

对比不同灸时对高脂小鼠肝脏脂质沉积的影响

探讨10 min、20 min、30 min艾灸时间下对C57BL/6高脂小鼠肝脏脂质沉积的影响及相关HMG-COAR、JNK1 m RNA表达的变化,定量定性判定不同灸时对高脂血症疗效差异,并找出作用的可能机制。雄性C57BL/6J野生小鼠30只,依据随机数字表分为空白组、模型组、艾灸10 min组、20 min组、30 min组,每组6只,除空白组给予普通饲料喂养外,其余各组给予高脂饲料喂养,共4周。艾灸组小鼠艾灸"神阙"穴,一周6次,治疗4周,空白及模型同步抓取与固定,4周后取材。每周监测小鼠体重及食量,采用生化法检测小鼠血脂,采用HE染色法观察小鼠肝细胞形态,运用q RT-PCR检测HMG-COAR、JNK1表达的变化。干预结束后,3组小鼠体重较之治疗前明显下降,p(10 min,20 min)0.05,p(30 min)0.01;与模型组对比,10 min组TC、TG、LDL含量明显下降,而HDL含量明显上升,p(TC、TG、LDL、HDL)0.01,20 min组及30 min组TC、TG含量明显下降,p(TC、TG)0.05;与模型组比较,艾灸组小鼠肝细胞受损情况皆有明显改善,脂滴减少,炎症程度降低;用PCR检测基因表达情况,发现与模型组对比,三组HMG-COAR表达显著下降,p0.01,而10 min、20 min组JNK1基因表达明显下降,p0.05。三组艾灸方法对高脂血症小鼠皆有良性干预作用,其中10 min组效果最佳,其作用机制可能与艾灸能够下调HMG-COAR、JNK1的表达,从而促进脂质分解代谢有关。     

白藜芦醇通过TLR4调节自噬发挥抗骨关节炎作用

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)的抗骨关节炎(osteoarthritis,OA)作用是否涉及Toll样受体4(TLR4)介导的自噬。方法 C57BL/6雄性小鼠喂饲高脂饲料并同时给予RES灌喂,共计22周,采用番红O-固绿染色观察软骨组织学改变,Western blot法检测关节软骨TLR4、beclin 1和LC3II/LC3I水平;SW1353软骨肉瘤细胞系采用TLR4抑制剂CLI-095预处理后,再给予IL-1β或IL-1β+RES共同处理,Western blot法检测细胞中beclin 1和LC3-II/LC3-I水平。结果高脂喂养的小鼠关节软骨表现出OA早期样改变,而RES具有一定的改善作用;高脂组小鼠软骨组织TLR4及beclin 1、LC3II/LC3I水平增加,RES处理可以抑制上述蛋白的增加。SW1353软骨肉瘤细胞系中,CLI-095单独预处理降低IL-1β诱导的beclin 1和LC3II/LC3I水平的增加,而同时加入RES却使beclin 1水平逆转,但对LC3II/LC3I水平无显著影响;与IL-1β+RES组相比,IL-1β+RES+CLI-095组beclin 1和LC3II/LC3I水平无明显变化。结论 OA早期软骨的自噬水平增加,RES的抗骨关节炎作用可能与调节TLR4和自噬有关。