茉莉酸甲酯与二氢茉莉酮酸甲酯对悬浮培养的甘草细胞生长和黄酮积累的影响

建立了稳定的甘草细胞悬浮培养体系,在一个培养周期内,细胞的生长曲线呈"S"型,培养21 d的干重、鲜重和黄酮产量都达到最高值.甘草细胞悬浮培养体系中分別添加100 μmol·L-1 二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯时,虽然对细胞生长有一定程度的抑制,但细胞中甘草黄酮产量仍有提高.添加二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯的最适时间分别为细胞培养后的第5天和第10天.     

四种前体对胀果甘草细胞悬浮培养生产甘草黄酮的调控效果评价

在胀果甘草细胞悬浮体系中加入苯丙氨酸、酪氨酸、肉桂酸和乙酸钠来研究前体对甘草细胞生产甘草黄酮的影响。结果显示,4种前体在合适的浓度下对细胞的生长没有明显的抑制作用,而且均能促进细胞内甘草黄酮的生物合成,但高浓度的肉桂酸对细胞的生长有一定的抑制作用。苯丙氨酸的最佳添加浓度为20 mg/L,酪氨酸、肉桂酸、乙酸钠的最佳添加浓度都是5 mg/L。此时,均可使培养体系的甘草黄酮产量高达100 mg/L以上,其中酪氨酸的添加使得产量高达对照的1.43倍。苯丙氨酸、肉桂酸和乙酸钠3种前体的添加时间均以第10天为宜,酪氨酸添加时间以第5天为最佳。而且,在添加苯丙氨酸和乙酸钠后的第3天收获细胞,此时细胞的生物量和甘草黄酮产量最大。此外,苯丙氨酸、乙酸钠的添加可以增加黄酮合成的关键酶之一——苯丙氨酸裂解酶的活性。酪氨酸对苯丙氨酸裂解酶影响不大,而肉桂酸的添加却导致其活性显著降低。     

胀果甘草的化学成分

本文报道从甘肃产胀果甘草（Glycyrrhiza inflata Bat.)中分出12种成分,其中8种为黄酮类化合物,即甘草查尔酮甲（licochalcona A.),甘草查尔酮乙（licochalcone B),甘草黄酮（licoflavone),甘草甙（liquiritin),甘草甙元（liquiritigenin),异甘草甙元（isoliquiritigenin),芒柄花甙（ononin)和4,7－二羟基黄酮（4,7－dihydroxyflavone),另外3种为三萜类化合物,即甘草酸（glycyrrhizic acid),甘草次酸（glycyrrhetinic acid)和11－脱氧甘草次酸（11－deoxyglycyrrhetinic acid)以及β-谷甾醇（－sitosterol)。其中除甘草查尔酮甲外,其余均为首次从胀果甘草中分得,4,7－二羟基黄酮和芒柄花甙为首次从本属植物中分得。     

紫外分光光度法测定甘草黄酮含量

采用分光光度法,测定了甘草中总黄酮的合量,检测波长为500nm,标准曲线相关系数R^2为0．9994,相对标准偏差为0．20％,平均加样回收率为100．20％。结果表明,此法准确度较高,为甘草生药及成品药中甘草黄酮合量测定提供了一种切实可行的方法     

胀果甘草的化学成分

本文报道从甘肃产胀果甘草（Glycyrrhiza inflata Bat.)中分出12种成分,其中8种为黄酮类化合物,即甘草查尔酮甲（licochalcona A.),甘草查尔酮乙（licochalcone B),甘草黄酮（licoflavone),甘草甙（liquiritin),甘草甙元（liquiritigenin),异甘草甙元（isoliquiritigenin),芒柄花甙（ononin)和4,7－二羟基黄酮（4,7－dihydroxyflavone),另外3种为三萜类化合物,即甘草酸（glycyrrhizic acid),甘草次酸（glycyrrhetinic acid)和11－脱氧甘草次酸（11－deoxyglycyrrhetinic acid)以及β-谷甾醇（－sitosterol)。其中除甘草查尔酮甲外,其余均为首次从胀果甘草中分得,4,7－二羟基黄酮和芒柄花甙为首次从本属植物中分得。     

甘草细胞在搅拌式生物反应器中的放大培养

在建立了稳定的甘草细胞搅拌式生物反应器放大培养体系的基础上,本文研究了甘草细胞在搅拌式反应器中悬浮培养的生长特性,包括细胞生长、细胞膜的透性、培养体系的p H变化及甘草黄酮合成情况等,并与摇瓶培养作比较。结果发现,同等条件下,反应器中培养细胞生物量的积累低于摇瓶培养,整个培养周期较摇瓶培养缩短。培养过程中同一时间段反应器中的p H值略低于摇瓶中的p H,细胞中H2O2的浓度是摇瓶中的1.8倍,甘草黄酮的产量是摇瓶培养的1.5倍,表明反应器中机械搅拌与流体剪切的培养环境对细胞生长起到一定程度的抑制作用,但刺激了细胞次生代谢产物甘草黄酮较高水平的合成。     

不同浓度茉莉酸甲酯对悬浮培养的胀果甘草细胞合成甘草总黄酮的影响

研究了不同浓度的茉莉酸甲酯对胀果甘草悬浮培养细胞的生长和黄酮合成的影响,初步探讨了其影响甘草黄酮合成的机制.研究结果表明,一定浓度(10-200lanol/L)的茉莉酸甲酯对胀果甘草细胞的生长有抑制作用,但是能够促进甘草总黄酮产量的增加.此外,茉莉酸甲酯的添加导致细胞中过氧化氢含量升高,引起细胞中苯丙氨酸裂解酶、过氧化氢酶、过氧化物酶活性的增强和丙二醛含量升高,说明茉莉酸甲酯能够引起细胞产生防御反应,并提高防御反应的关键酶的活性,同时细胞膜在一定程度上仍发生过氧化,但最终促进了甘草总黄酮的合成,其最大产量达到对照的3.39倍.     

胀果甘草化学成分的研究（Ⅲ）

继前文工作,本文报道从胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat)根及根茎用95％乙醇渗滤后的提取部分中获得的另外五个化合物的结构鉴定。经理化性质及波谱分析,分别鉴定为胡萝卜甙(Daucosterol)、甘草查尔酮甲(Licochalcone A)、β-谷甾醇(β-Sitosterol),异芒柄花甙(Isoononin)和4＇,7一二羟基黄酮(4＇,7-Dihydroxy-flavone)。其中胡萝卜甙和异芒柄花甙为首次从该植物中获得。药理实验表明,甘草查尔酮甲对H_2O_2诱异的溶血有极好的抑制作用(97.3％),但甘草甙在三个体外氧化体系中都没有明显的活性。     

甘草悬浮细胞的玻璃化法超低温保存研究

以甘草悬浮细胞为材料,进行了超低温保存技术的研究。高产黄酮的甘草悬浮细胞是一种极具价值但又难于保存的材料,为解决甘草细胞超低温保存中存在的关键问题,即如何减少渗透压的突然改变对细胞造成损伤,通过优化预培养时间、细胞年龄、预处理时间、脱水时间、洗涤液蔗糖浓度等影响因素,建立了一套适合于甘草悬浮细胞的保存方法。采用改良的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测,此法存活率可达82.9%。将保存后的细胞进行恢复培养,其恢复生长率可达80.4%。     

甘草毛状根培养系统的建立及化学成分分析

利用发根农杆菌转化甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.)外植体获得毛状根,经PCR法检测,表明已转化成功。应用均匀设计法与比较法,建立了适合甘草毛状根的培养系统。化学成分分析结果表明,甘草毛状根含半胱亚磺酸,不含胱氨酸,商品甘草却含胱氨酸而不含半胱亚磺酸;甘草毛状根能合成多种黄酮成分,其中甘草查尔酮A的含量高达干生的0.18％。