OPN对卵巢癌Hey细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)对卵巢癌Hey细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其可能涉及的分子机制。方法:选择卵巢癌细胞株Hey、HO8910、A2780和正常卵巢上皮细胞IOSE80,采用Western blot检测OPN蛋白的表达情况。对OPN表达量相对较高的Hey细胞株的OPN基因敲减或过表达,运用CCK-8、平板克隆实验、细胞划痕、Transwell侵袭实验等方法研究OPN对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,采用Western blot检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、CyclinD1、c-myc的表达情况。结果:OPN在卵巢癌细胞株Hey、HO8910、A2780内均有表达,且表达量均高于正常卵巢上皮细胞IOSE80。si RNA-OPN转染卵巢癌Hey细胞沉默OPN表达,CCK-8和平板克隆实验显示沉默OPN能够降低Hey细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell侵袭实验显示下调OPN可降低Hey细胞的迁移和侵袭能力,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、CyclinD1、c-myc表达下降。ex-OPN转染Hey细胞使OPN表达升高,与对照组相比,OPN过表达能够增强Hey细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、CyclinD1、c-myc表达升高。结论:OPN能够促进卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,该作用可能通过促进Wnt/β-catenin信号通路实现。     

沉默BCAT1对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究BCAT1在肺癌细胞A549的增殖、迁移及侵袭能力中的作用。方法:通过小干扰RNA(si RNA)沉默A549细胞中BCAT1的表达,细胞分为对照组(Con)、BCAT1基因沉默组(si RNA-BCAT1)和si RNA阴性对照组(si RNA-NC)。利用Western blot检测si RNA对BCAT1的沉默效果;划痕愈合实验检测沉默BCAT1后A549细胞迁移能力的改变;Transwell小室侵袭实验检测沉默BCAT1后A549细胞侵袭能力的变化;MTT实验检测沉默BCAT1对A549细胞增殖能力的影响。结果:与Con组相比,si RNA-BCAT1组的BCAT1蛋白表达明显降低(P0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P0.05),能够穿膜的细胞数明显减少(P0.05),而Con组和si RNA-BCAT1组细胞的增殖能力比较差异无明显统计学意义(P0.05)。结论:沉默BCAT1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,而对其增殖能力无影响。     

使用规律间隔的短回文重复序列cas9系统研究转化生长因子β1在小鼠黑色素瘤细胞中的作用

目的研究在小鼠黑色素瘤细胞系(B16)中使用成簇的、规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)靶向敲除转化生长因子β1(TGF-β1)后,细胞体外增殖、侵袭、迁移能力的变化。方法使用CRISPR-cas9系统建立敲除TGF-β1的小鼠黑色素瘤细胞系,用细胞培养计数法检测对照组、载体对照组与TGF-β1-组B16细胞的生长速度,用平板克隆与软琼脂克隆实验来检测三组细胞体外增殖能力,分别用Transwell小室与加基质胶Transwell小室检测三组细胞的体外迁移与侵袭能力。结果成功建立TGF-β1敲除了的B16细胞系,生长曲线在24、48、72、96 h测得3组细胞数目之间差异均无统计学意义(P均0.05);平板克隆一周结果显示:TGF-β1-组的克隆形成率0.067±0.032小于载体对照组0.489±0.034,而载体对照组小于对照组0.633±0.041,F=198.710,P=0.000;平板克隆2周时,TGF-β-组的细胞克隆形成率0.443±0.012与对照组0.489±0.064均大于载体对照组0.370±0.005,F=7.599,P=0.023;还发现虽然TGF-β-组的克隆形成数量多,但是克隆的直径小于其他两对照组;软琼脂克隆实验:对照组的形成率0.008±0.0001低于载体对照组0.012±0.0006与TGF-β1-组0.012±0.0007,F=65.39,P0.0001。侵袭能力实验显示:TGF-β1-组穿过膜的B16细胞数目(12±4.359)个明显的低于对照组(101±18.735)个与载体对照组细胞(100±8.889)个,F=52.34,P=0.0002;迁移能力实验结果显示:TGF-β1-组的B16通过Transwell膜的细胞数量(2.037±0.132)个明显的少于对照组(4.07±0.481)个与载体对照组(8.683±1.017)个,F=81.34,P0.0001。结论 TGF-β1敲除后的小鼠黑色素瘤细胞的体外生长、增殖能力并没有受到影响,但是侵袭与迁移能力受到了抑制。     

卵巢癌细胞中RhoA和NF-κB表达与癌细胞增殖、侵袭能力的关系

目的:探讨卵巢癌细胞中RhoA和NF-κB表达与癌细胞增殖、侵袭能力的关系。方法:采用RT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞A2780、SW626、Skow3和正常卵巢上皮HOSEA中RhoA和NF-κB的表达;MTT法测定A2780、SW626、Skow3的增殖能力;Transwell小室体外侵袭实验检验细胞侵袭能力。结果:三种卵巢癌细胞中RhoA与NF-κB的表达无差异,但均高于正常卵巢上皮HOSEA中表达(P0.05);MTT实验结果显示在24 h、48 h、72 h、96 h、120 h时间点,过表达RhoA组和NF-κB组吸光光度值大于对照组(P0.05);RhoA转染后,A2780、SW626、Skow3、HOSEA 4种细胞的穿膜细胞数测值分别是33.56±12.42、56.21±9.53、25.53±11.89、0,说明SW626侵袭力最强,HOSEA无侵袭力(P0.05),不同细胞间侵袭力存在差异,且具有统计学意义(P0.05)。NF-κB转染后,A2780、SW626、Skow3、HOSEA 4种细胞的穿膜细胞数分别为22.53±12.57、33.90±10.12、45.91±9.02、0,其中穿膜细胞数最多的是Skow3细胞,不同细胞间穿膜细胞数比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:卵巢癌细胞中RhoA与NF-κB表达增加,可增强细胞增殖能力,并使细胞具有侵袭性。     

miR-335对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的:通过研究miR-335对骨肉瘤细胞系SOSP-9607增殖和迁移的影响,探讨miR-335在骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法:体外培养SOSP-9607细胞并将其分三组,分别为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组转染miR-335模拟物(has-miR-335 mimics),阴性对照组转染阴性对照序列(negative control,NC),空白对照组细胞不行任何转染。采用噻唑蓝(MTT)比色实验法检测和比较细胞处理24、48、72和96 h的增殖情况,采用Transwell实验检测和比较各组细胞的迁移情况。结果:MTT结果显示,实验组细胞48、72和96 h增殖率较阴性对照组明显降低(P0.01),而阴性对照组及空白对照组细胞增殖率比较未见明显差异(P0.05)。在Transwell迁移和侵袭实验中,与阴性对照组比较,实验组细胞的侵袭及迁移能力也明显降低(P0.05),而两对照组细胞迁移及侵袭能力也无明显差异(P0.05)。结论:miR-335可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖及迁移,有望成为骨肉瘤治疗的新靶点,值得深入研究。     

Cosmc基因在卵巢癌中生物学功能的研究

目的:明确Cosmc基因在卵巢癌细胞中的生物学功能。方法:本研究采用慢病毒转染技术,在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中过表达Cosmc基因,MTT实验、细胞凋亡实验以及Transwell侵袭实验对过表达Cosmc后卵巢癌细胞在生长、凋亡、侵袭等方面的影响。结果:慢病毒转染卵巢癌细胞A2780和SKOV-3后,Cosmc的蛋白表达显著提高;MTT结果显示,与空载体对照组相比,过表达Cosmc的卵巢癌细胞生长能力显著减弱;流式细胞术结果表明Cosmc过表达的卵巢癌细胞凋亡数较空载体对照组细胞显著增加;Transwell实验显示Cosmc过表达的细胞侵袭和迁移能力较空载体对照组显著减少。结论:卵巢癌细胞系中过表达Cosmc基因能抑制卵巢癌细胞的生长和侵袭并促进细胞凋亡。     

沉默细胞分裂相关基因NUF2的表达对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响

目的:研究沉默细胞分裂相关基因NUF2的表达对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步探讨其潜在的分子作用机制。方法:用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测卵巢癌组织和细胞中NUF2的表达情况;将卵巢癌HEY、SKOV3细胞分为空白对照组、control siRNA(si-control)组和NUF2 siRNA(si-NUF2)组,用qRT-PCR检测各组细胞的NUF2 mRNA表达水平以验证转染效果;Transwell小室实验和细胞划痕实验检测沉默NUF2后各组细胞侵袭、迁移能力的改变;蛋白印迹法检测各组细胞中Notch通路相关蛋白Notch1、Hes1的表达水平。结果:NUF2在卵巢癌组织或细胞中均高表达,差异均有统计学意义(P0.05);与空白对照组和sicontrol组相比,si-NUF2组细胞中NUF2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),侵袭、迁移细胞数明显减少(P0.05),Notch1和Hes1蛋白表达降低。结论:沉默NUF2表达可抑制卵巢癌细胞侵袭、迁移能力,其分子作用机制与抑制Notch信号通路有关。     

血根碱通过下调TGF-β1/Smad通路抑制紫杉醇耐药卵巢癌细胞生长

培养紫杉醇耐药卵巢癌细胞A2780/Taxol,分为对照组与血根碱组,对照组不加血根碱,血根碱组应用不同浓度血根碱(0.67μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L)处理,应用MTT法、克隆形成、流式细胞检测和Western blot等实验方法检测血根碱对A2780/Taxol细胞增殖、凋亡、周期的影响及Bax、TGF-β1、Smad3蛋白的表达情况。结果显示,2.0μmol/L浓度的血根碱可显著抑制A2780/Taxol细胞增殖,与对照组相比,Bax表达显著上调,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平明显下调(P0.05)。血根碱通过下调TGF-β1/Smad通路,促进细胞凋亡而抑制紫杉A2780/Taxol细胞生长。     

人卵巢癌A2780 细胞侵袭转移与HES1 相关性

目的:探讨人卵巢癌细胞A2780中的HES1表达与人卵巢癌侵袭及转移的关系。方法:分别运用实时RT-PCR、WesternBlotting及细胞免疫荧光法检测γ分泌酶抑制剂作用前后A2780细胞中HES1的表达水平,Transwell小室试验及MTT法分别用于检测细胞的侵袭、迁移及黏附能力。结果:下调A2780细胞中HES1的表达水平后,A2780细胞的黏附、侵袭及转移能力下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HES1的表达与人卵巢癌细胞的侵袭及转移密切相关,下调其表达可抑制卵巢癌细胞的黏附、侵袭及转移能力。     

沙棘总黄酮抑制肺癌A549增殖和迁移作用及机理

为探究三种沙棘总黄酮(TFH)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响,并探讨其分子作用机制,选择不同浓度的西藏沙棘(Hippophae tibetana Schlecht)、中国沙棘(H.rhamnoides L.subsp.sinensis Rousi)、肋果沙棘(H.neurocarpa)总黄酮作用于A549细胞。通过MTT检测细胞相对活力,平板克隆形成实验及软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡比例。选择效果最佳的西藏沙棘总黄酮应用细胞划痕实验及Transwell实验分析该化合物对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot检测MMP9、E-cadherin等侵袭迁移相关蛋白表达。敲低E-cadherin基因检测沙棘总黄酮对细胞迁移能力的影响。结果显示,三种沙棘总黄酮均对A549细胞系具有增殖抑制作用,抑制作用依次为:西藏沙棘中国沙棘肋果沙棘。西藏沙棘总黄酮可显著性抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭迁移能力(P0.05)。实验组中MMP9、MMP2、TGF-β、N-cadherin表达水平显著降低,E-cadherin表达水平上调。我们发现在A549细胞中敲低E-cadherin,西藏沙棘总黄酮可逆转迁移增加。以上研究表明西藏沙棘总黄酮对肺癌A549增殖抑制作用具有明显的优势,且西藏沙棘总黄酮可明显抑制肺癌A549细胞的侵袭迁移能力,并可能与下调细胞中的TGF-β抑制MMP9表达并阻止肺癌EMT有关。     

人肝内胆管癌细胞PRL-3 的表达与侵袭转移研究

目的:探讨PRL-3在人肝内胆管癌侵袭转移中的作用.方法:利用小RNA技术干扰肝内胆管癌细胞株PRL-3表达,并采用细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验评价PRL-3对肝内胆管癌细胞侵袭转移能力的影响.结果:RT-PCR和Western blot结果均显示转染PRL-3特异性siRNA-2组PRL-3表达明显降低(P＜0.05).PRL-3 siRNA-2组在划痕培养24h后划痕区域宽度占初始划痕区域宽度的百分比为(62.12±6.28)％,阴性对照组为(23.88±2.55)％,空白对照HCCC-9810组为(21.20±6.07)％.PRL-3siRNA-2组细胞的划痕两端距离相比明显较宽,分别与阴性对照组细胞和空白对照HCCC-9810组细胞相比均有统计学意义(P＜0.05),后两者无显著性差异(P＞0.05).Transwell体外侵袭实验结果显示,PRL-3 SiRNA-2组细胞侵袭能力明显减弱,穿膜细胞数为(19.40±2.30)个/HP,明显少于阴性对照组(64.00±2.73)个/HP和正常HCCC-9810组(67.20±3.l1)个/HP,差异有显著性(P＜0.05);正常HCCC-9810组和阴性对照组无明显差异(P＞0.05).结论:PRL-3特异性siRNA能够抑制肝内胆管癌细胞HC-CC-9810中内源性PRL-3的表达,并可以明显抑制肝内胆管癌细胞的迁移侵袭能力.     

环状RNA Circ_0001073在恶性黑素瘤中的表达及其对A375细胞恶性表型的影响

目的:通过检测环状RNA Circ_0001073在恶性黑素瘤细胞与正常表皮黑素细胞中的表达差异,及其对恶性黑素瘤A375细胞恶性表型的影响,阐明Circ_001073在恶性黑素瘤细胞中的表达及功能。方法:采用聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-QPCR)方法检测正常表皮黑素细胞和恶性黑素瘤细胞中Circ_0001073的表达水平;应用小干扰RNAs沉默恶性黑素瘤A375细胞中Circ_0001073表达,5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)实验检测沉默Circ_0001073对A375细胞增殖的影响,平板克隆实验检测沉默Circ_0001073对A375细胞克隆形成的影响,细胞划痕实验评估沉默Circ_0001073对A375细胞迁移能力的影响,Transwell实验评估沉默Circ_0001073对A375细胞侵袭能力的影响。结果:qRT-PCR结果显示Circ_0001073在恶性黑素瘤细胞中的表达低于正常表皮黑素HEMa-LP细胞(P0.05)。应用Circ_0001073si RNA转染A375细胞后,Circ_0001073的表达水平较转染Circ_0001073 NC的细胞显著降低(P0.05)。EdU实验结果显示:沉默A375细胞中Circ_0001073的表达后,A375细胞增殖能力显著增强(P0.05);平板克隆实验结果显示:沉默A375细胞中Circ_0001073的表达后,A375细胞克隆形成能力显著增强(P0.05);细胞划痕实验结果显示:沉默A375细胞中Circ_0001073的表达后,细胞迁移能力显著增强(P0.05);Transwell实验结果显示:沉默A375细胞中Circ_0001073的表达后,细胞侵袭能力显著增强(P0.05)。结论:Circ_0001073在恶性黑素瘤细胞中低表达,并可抑制A375细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭。     

白皮杉醇对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭的影响

本研究旨在考察白皮杉醇(piceatannol, PIC)对子宫内膜癌细胞HEC-1A的初步抗肿瘤作用。分别通过CCK-8实验、平板克隆形成实验、流式细胞术、划痕损伤修复实验和Transwell小室实验检测不同浓度的PIC对HEC-1A细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白和侵袭迁移相关蛋白的表达水平。结果显示，与空白组相比，PIC能显著抑制HEC-1A细胞增殖、克隆形成能力、诱导其凋亡并减少细胞迁移距离和侵袭细胞数(P<0.01),下调p-Akt、p-Erk1/2、p-p38MAPK、β-catenin、CD44和Slug蛋白的表达水平，上调E-cadherin蛋白的表达水平(P<0.01)。综上所述，PIC呈浓度依赖性抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、迁移与侵袭，其机制可能与抑制AKT/ERK/MAPK信号通路和影响Wnt/β-catenin信号通路和上皮-间质转化标志物的改变有关。     

miR-221对甲状腺乳头癌生物学特性的影响

目的:探讨miR-221对甲状腺乳头癌生物学特性的影响。方法:培养人甲状腺乳头癌细胞株BCPAP、K1、TPC-1和正常甲状腺细胞株Nthy-ori 3-1。将实验分为四组:A:miR-221模拟物组;B组:miR-221抑制物组;C:无关序列组;D:空白对照组。RT-q PCR的方法检测miR-221在各个细胞中的表达以及转染后各组细胞的表达;MTT实验检测转染后各组细胞的增殖;划痕实验检测转染后各组细胞的迁移能力;流式细胞仪检测转染后各组细胞的凋亡情况。结果:RT-qPCR检测miR-221在三个细胞株的表达情况显示,miR-221甲状腺乳头癌细胞株TPC-1的表达最高,因此选择TPC-1作为后续的研究;miR-221在转染后各组细胞的表达量显示,转染miR221模拟物的miR221的表达显著高于空白对照组,转染miR221抑制物的miR221的表达显著低于空白对照组(P0.001);MTT实验结果显示,转染miR-221模拟物组细胞的增殖速度最快,转染miR-221抑制物组细胞的增殖速度最慢,miR-221模拟物组和miR-221抑制物组细胞从第三天开始与空白对照组有显著差异(P0.01),无关对照组与空白对照组无显著差异(P0.05);划痕实验结果显示,转染miR-221模拟物组细胞的迁移数显著高于空白对照组,转染miR-221抑制物组细胞的迁移数显著低于空白对照组(P0.01),无关对照组与空白对照组无显著差异(P0.05);流式细胞仪结果显示,转染miR-221模拟物组细胞凋亡率显著低于空白对照组(P0.01),转染miR-221抑制组细胞凋亡率显著高于空白对照组(P0.001),转染无关对照对细胞凋亡无影响(P0.05)。结论:过表达miR-221可促进细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡。抑制miR-221表达可降低细胞增殖、迁移,增加细胞凋亡。     

FHL2对人鼻咽癌5-8F细胞恶性生物学行为影响及相关机制

采用定量Real-time PCR(q RT-PCR)、Western blot法检测NP-69和5-8F细胞中FHL2表达情况及转染后5-8F各组细胞中FHL2、c-myc、β-catenin的m RNA与蛋白质水平;利用CCK-8法、细胞平板克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验分别检测转染后5-8F各组细胞增殖、迁移及侵袭能力。实验结果显示,鼻咽癌细胞株5-8F的FHL2蛋白质水平高于NP-69,转染si RNA的5-8F细胞中FHL2表达水平显著低于无关序列组和空白对照组(P0.01)。下调FHL2基因表达后5-8F细胞增殖、侵袭、迁移能力均受到抑制(P0.05),且转染组5-8F细胞中c-myc、β-catenin的m RNA及相应蛋白质水平均有下降(P0.01)。综上所述,在5-8F细胞中FHL2高表达。FHL2基因敲低后可以抑制5-8F细胞增殖、侵袭、迁移能力,并可能通过Wnt信号通路影响鼻咽癌5-8F细胞的恶性生物学行为。     

TGF-β1促进人子宫颈癌细胞Siha的侵袭、迁移及其机制研究

探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人子宫颈癌细胞Siha侵袭、迁移能力的影响及其可能的分子机制。用5 ng/m L TGF-β1作用Siha细胞72 h,通过倒置显微镜、CCK-8实验、单细胞克隆形成实验、细胞黏附实验和Transwell小室实验分别观察TGF-β1作用前后Siha细胞形态、增殖能力、克隆形成能力、黏附能力、迁移及侵袭能力的改变;Western blot检测TGF-β1作用前后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、VEGF、CFTR、P50、P65、E-cadherin及Vimentin蛋白表达的变化。结果表明,5 ng/m L TGF-β1作用Siha细胞72 h后,Siha细胞出现上皮细胞向间质细胞形态转变、黏附能力减弱、迁移和侵袭能力增强,伴随MMP-2、MMP-9、VEGF、CFTR、P50、P65和Vimentin表达上调,E-cadherin表达下调。该研究表明,TGF-β1可能通过诱导Siha细胞发生上皮–间质转化及上调MMP-2、MMP-9和VEGF的表达,促进Siha细胞的侵袭转移。     

TRPC3对上皮性卵巢癌细胞株迁移和侵袭的影响

目的:探讨瞬时受体电位通道C3(TRPC3)对人卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法:采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法分别检测卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2和HEY-T30中TRPC3蛋白和m RNA的表达水平。通过Transwell迁移实验(不含Matrigel胶的Transwell小室)和Transwell侵袭实验分别检测卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2和HEY-T30的迁移、侵袭能力。结果:在SKOV3、ES-2和HEY-T30三种卵巢癌细胞株中,ES-2中TRPC3的蛋白和m RNA表达均显著高于其他两株(P0.05)。Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验显示卵巢癌细胞株ES-2的迁移、侵袭能力均显著高于其他两种细胞株(P0.05)。结论:瞬时受体电位通道C3(TRPC3)在ES-2人卵巢癌细胞中高表达,并可能促进人卵巢癌细胞的迁移、侵袭。     

siRNA沉默KLF4表达促进HeLa细胞迁移与增殖

目的:研究Krüppel样因子4(KLF4)的表达下调对HeLa细胞迁移与增殖的影响。方法:设计合成针对KLF4的si RNA和阴性对照si RNA,并转染至HeLa细胞中。使用含有10 ng/m L TGF-β1和10%胎牛血清的DMEM培养液诱导HeLa细胞发生上皮间质转化,对照组使用不含TGF-β1的培养液。通过Transwell迁移实验和划痕实验观察HeLa细胞迁移变化;通过细胞增殖实验和流式细胞术观察HeLa细胞增殖状况和细胞周期分布。结果:转染了si RNA的HeLa细胞经TGF-β1诱导后,其细胞迁移能力较其他各组显著提高;与转染了阴性对照si RNA和空白对照的细胞相比,转染si RNA的HeLa细胞增殖能力明显提高;TGF-β1可以使HeLa细胞周期发生G1期阻滞,但是采用si RNA干扰KLF4的表达对此过程无明显影响。结论:使用si RNA下调KLF4的表达可以促进HeLa细胞的迁移与增殖。     

RPA1低表达对辐射抵抗人鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭迁移及细胞周期的影响*

目的: 探讨复制蛋白A1(RPA1)沉默对人鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭、迁移及细胞周期的影响。方法: 采用shRNA技术构建RPA1低表达的CNE-2R细胞模型并通过RT-PCR和Western blot实验验证。选用空白对照组(CNE-2R)、阴性对照组(NC-shRNA)、RPA1低表达组(RPA1-shRNA)3组细胞完成后续实验,通过CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖能力、Transwell实验检测侵袭能力、划痕实验检测迁移能力,流式细胞术检测细胞周期;Western blot实验检测Chk2、p-Chk2、Cdc25c和p-cdc25c蛋白的表达。结果: 与CNE-2R和NC-shRNA组比较,RPA1-shRNA组细胞的RPA1mRNA和蛋白质均显著降低(P＜0.01和＜0.05);RPA1-shRNA组组细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著下降(P均＜ 0.05),细胞周期被阻滞在G2/M期(P＜0.01);RPA1-shRNA组细胞Chk2、Cdc25c的表达低于CNE-2R和NC-shRNA组细胞(P＜0.05), 而p-Chk2、p-cdc25c的表达高于其它两组(P ＜0.05)。结论: RPA1低表达抑制辐射抵抗人鼻咽癌CNE-2R细胞的增殖、迁移以及使细胞周期阻滞于G2/M期。     

稳定干扰ITGB1抑制人乳腺癌BT549细胞迁移和侵袭

在人乳腺癌细胞系BT549中稳定干扰整合素β1(integrinβ1,ITGB1),研究其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。构建靶向干扰ITGB1基因的sh RNA慢病毒,感染BT549细胞,通过筛选成功获得稳定干扰ITGB1蛋白的BT-549细胞系,实验设空白对照组(Blank)、病毒感染阴性对照组(shNC)、ITGB1-shRNA慢病毒感染组(shITGB1);Real-time PCR和Western blotting法检测稳定干扰后ITGB1 mRNA和蛋白的表达情况;Western blotting法检测稳定干扰ITGB1后上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志蛋白(E-cadherin,Vimentin,N-cadherin,Fibronectin)的表达情况;利用划痕试实验和Transwell侵袭试实验分别检测稳定干扰ITGB1后细胞的迁移及侵袭能力。Real-time PCR和Western blotting结果显示,shITGB1组细胞ITGB1 mRNA和蛋白的表达水平显著低于Blank组和shNC组细胞(p0.01,p0.01)。Western blotting结果显示,稳定干扰ITGB1可部分逆转乳腺癌细胞BT549的EMT化;稳定干扰ITGB1后,上皮标志蛋白E-cadherin表达显著上调(p0.01),间质标志蛋白Vimentin(p0.05)、N-cadherin(p0.01)和Fibronectin(p0.01)的表达显著降低。划痕和Transwell侵袭试验实验结果显示,稳定干扰ITGB1后可显著降低乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力(p0.05,p0.05)。在乳腺癌BT549细胞中稳定干扰ITGB1后,通过逆转EMT化抑制细胞迁移和侵袭。