miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响

目的：探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法：将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a＋miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物（hsa-miR-15a mimics）上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果：通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高（P〈0.05）;实验组的细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论：上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。     

miR-15a 和miR-16-1 模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607 凋亡 和增殖的影响

目的:探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法:将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a+miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物(hsa-miR-15a mimics)上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果:通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高(P<0.05);实验组的细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论:上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。     

microRNA-194模拟物对成骨肉瘤细胞系SOSP_9607生物学特性的影响

目的：观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物（hsa-miR-194mimics）转染成骨肉瘤细胞系SOSP_9607,增强SOSP_9607细胞内miR-194的活性。结果：与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。实验组凋亡率（10.1±0.22）%与阴性对照组凋亡率（3.3±0.19）%相比明显增高（P〈0.01）。与对照组比较,实验组细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少（P〈0.01）。结论：通过转染miR-194模拟物增强SOSP_9607细胞中miR-194的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。     

miRNA-194 对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607 转移的作用研究

目的:通过建立表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系,研究和探测miRNA-194对于骨肉瘤细胞转移特性的影响和作用。为进一步研究miRNA-194作为生物治疗的新靶点提供理论依据。方法:使用慢病毒技术,对骨肉瘤细胞进行转染和筛选,获得表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系并进行分组。通过Transwell实验,划痕实验对miRNA-194在骨肉瘤中的作用进行探索。结果:1)慢病毒转染及筛选成功,获得表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系;2)transwell迁移及侵袭实验中,miRNA-194过表达组的迁移(28.60±4.36)及侵袭(21.25±6.42)能力都显著的小于其余各组,相应的,miRNA-194沉默表达组(132.60±15.64;115.76±11.38)则高于其余各组。划痕实验结果显示,miRNA能够显著的抑制骨肉瘤细胞SOSP-9607的划痕愈合能力(P0.01)。结论:miR-194能够对骨肉瘤细胞SOSP-9607的转移起到明确的抑制作用。MiRNA-194有望成为骨肉瘤转移与治疗的新靶点。     

miR-221对甲状腺乳头癌生物学特性的影响

目的:探讨miR-221对甲状腺乳头癌生物学特性的影响。方法:培养人甲状腺乳头癌细胞株BCPAP、K1、TPC-1和正常甲状腺细胞株Nthy-ori 3-1。将实验分为四组:A:miR-221模拟物组;B组:miR-221抑制物组;C:无关序列组;D:空白对照组。RT-q PCR的方法检测miR-221在各个细胞中的表达以及转染后各组细胞的表达;MTT实验检测转染后各组细胞的增殖;划痕实验检测转染后各组细胞的迁移能力;流式细胞仪检测转染后各组细胞的凋亡情况。结果:RT-qPCR检测miR-221在三个细胞株的表达情况显示,miR-221甲状腺乳头癌细胞株TPC-1的表达最高,因此选择TPC-1作为后续的研究;miR-221在转染后各组细胞的表达量显示,转染miR221模拟物的miR221的表达显著高于空白对照组,转染miR221抑制物的miR221的表达显著低于空白对照组(P0.001);MTT实验结果显示,转染miR-221模拟物组细胞的增殖速度最快,转染miR-221抑制物组细胞的增殖速度最慢,miR-221模拟物组和miR-221抑制物组细胞从第三天开始与空白对照组有显著差异(P0.01),无关对照组与空白对照组无显著差异(P0.05);划痕实验结果显示,转染miR-221模拟物组细胞的迁移数显著高于空白对照组,转染miR-221抑制物组细胞的迁移数显著低于空白对照组(P0.01),无关对照组与空白对照组无显著差异(P0.05);流式细胞仪结果显示,转染miR-221模拟物组细胞凋亡率显著低于空白对照组(P0.01),转染miR-221抑制组细胞凋亡率显著高于空白对照组(P0.001),转染无关对照对细胞凋亡无影响(P0.05)。结论:过表达miR-221可促进细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡。抑制miR-221表达可降低细胞增殖、迁移,增加细胞凋亡。     

MiR-18b-5p对人滋养细胞系HTR-8细胞迁移功能的影响

目的:通过研究子痫前期胎盘组织中低表达的miR-18b-5p(微小RNA18b-5p)对人滋养细胞系HTR-8迁移能力的影响,进一步探讨miR-18b-5p在子痫前期发病过程中的作用。方法:将化学合成的miR-18b-5p inhibitor、miR-18b-5p inhibitor NC,采用瞬时转染的方法将miR-18b-5p inhibitor转入人滋养细胞系HTR-8中设为实验组;miR-18b-5p inhibitor NC转入HTR-8细胞中设为阴性对照组;空白转染组为空白对照组。应用Realtime RT-PCR技术检测各组miR-18b-5p在mRNA水平的表达,同时采用微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell实验)检测实验组与对照组细胞迁移能力的变化。结果:Realtime RT-PCR结果显示:转染miR-18b-5p inhibitor后miR-18b-5p的表达量分别与阴性对照组和空白对照组相比明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。Transwell实验结果显示miR-18b-5p inhibitor组与两对照组相比细胞的迁移能力明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:在HTR-8细胞中降调节miR-18b-5p可以显著的降低细胞的迁移能力,推测病理性低表达的miR-18b-5p有可能通过降低滋养细胞的迁移能力,使妊娠早期细胞滋养细胞从固体绒毛顶端迁出减少,导致覆盖合体滋养细胞进而形成具有增殖能力的细胞簇减少,最终造成滋养层浅表植入,从而引起子痫前期的发生。     

miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的: 探讨miR-335 靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(rho associated coiled-coil forming protein kinase 1,ROCK1)对卵巢癌细胞系SKOV3增殖的调控作用。方法:(1)选取卵巢癌细胞系SKOV3及人正常卵巢上皮细胞系IOSE80,采用RT-PCR检测各组细胞中miR-335表达;采用Western blot检测各组细胞中ROCK1蛋白表达;(2)选取卵巢癌细胞系SKOV3,分别转染miR-335 mimic及mimic control,采用RT-PCR检测细胞中miR-335表达;(3)选取卵巢癌细胞系SKOV3,将SKOV3荧光素酶报告载体与miR-335 mimic共转染,采用荧光素酶活性实验验证miR-335对SKOV3的靶向作用;(4)选取卵巢癌细胞系SKOV3,分为3组,即SKOV3组(转染mimic control)、miR-335 mimic组(转染miR-335 mimic)及miR-335 mimic+ROCK1组(共转染miR-335 mimic+ROCK1),采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用Western blot检测各组细胞中ROCK1蛋白表达,采用RT-PCR检测细胞中Cyclin D1表达。结果: (1)RT-PCR结果显示,卵巢癌细胞SKOV3中miR-335表达显著低于人正常卵巢上皮细胞IOSE80(P < 0.05);Western blot结果显示,卵巢癌细胞SKOV3中ROCK1蛋白表达显著高于人正常卵巢上皮细胞IOSE80(P < 0.05);(2)RT-PCR结果显示,转染miR-335 mimic可使卵巢癌细胞SKOV3中miR-335表达上调,与转染mimic control相比较差异具有统计学意义(P < 0.05);(3)双荧光素酶活性检测结果显示,miR-335 mimic可显著抑制野生型ROCK1-Wt报告载体的荧光素酶活性,但对突变型ROCK1-Mut报告载体的荧光素酶活性并无显著抑制作用;(4)转染miR-335mimic后,卵巢癌细胞SKOV3增殖活性及Cyclin D1表达较阴性对照组显著降低(P < 0.05);而转染miR-335 mimic+ROCK1后,卵巢癌细胞SKOV3增殖活性及Cyclin D1表达较单纯转染miR-335 mimic组显著提高(P < 0.05),但仍显著低于阴性对照组(P < 0.05)。Western blot检测结果显示,转染miR-335mimic后,卵巢癌细胞SKOV3中ROCK1蛋白表达较阴性对照组显著降低(P < 0.05);而转染miR-335 mimic+ROCK1后,ROCK1蛋白表达较单纯转染miR-335mimic组显著增高(P < 0.05),且显著高于阴性对照组(P < 0.05)。结论: miR-335可通过靶向ROCK1抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖。     

mirRNA-17-5p抑制物对骨肉瘤细胞系SOSP_9607增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-17-5p抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖和凋亡的影响.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,进一步计算抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡.将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组.实验组采用miR-17-5p抑制物(hsa-miR-17-5p inhibitors)抑制SOSP_9607细胞内miR-17-5p的活性.结果:与对照组相比,实验组显著抑制SOSP_9607细胞的增殖,有明显的剂量依赖性(P<0.01).随着浓度从50 nmol/L逐渐增加至200 nmol/L,抑制率逐渐增高(P<0.01).实验组凋亡率(9.6±1.8)%与阴性对照组凋亡率(3.5±0.4)%相比明显增高(P<0.01).结论:miR-17-5p抑制物通过抑制SOSP_9607细胞中miR-17-5p的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡发挥重要作用.     

氧化槐果碱通过调控lncRNA DUXAP8/miR-519b-3p轴影响宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的实验研究

为了探讨氧化槐果碱(OSC)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制,本研究将HeLa细胞分为对照组(Con组)、OSC组、转染DUXAP8小干扰RNA(si-DUXAP8)组、转染小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、OSC+DUXAP8过表达载体(pcDNA-DUXAP8)组和OSC+空载体(pcDNA)组,然后用MTT法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9蛋白水平,RT-qPCR检测细胞中DUXAP8和miR-519b-3p水平;双荧光素酶报告基因实验验证DUXAP8和miR-519b-3p调控关系。结果显示,与Con组比较,OSC组HeLa细胞抑制率、凋亡率、Bax和p21蛋白水平、miR-519b-3p水平升高(P0.05),细胞迁移数、侵袭数、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9的蛋白水平和DUXAP8水平降低(P0.05),且呈剂量依赖性(P0.05);与si-NC组比较,si-DUXAP8组HeLa细胞抑制率、凋亡率和Bax、p21蛋白水平升高(P0.05),细胞迁移和侵袭数及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9的蛋白水平降低(P0.05);DUXAP8在HeLa细胞中靶向负调控miR-519b-3p表达;与OSC+pcDNA组比较,OSC+pcDNA-DUXAP8组HeLa细胞抑制率、凋亡率和Bax、p21的蛋白水平降低(P0.05),细胞迁移和侵袭数及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9的蛋白水平升高(P0.05)。这提示氧化槐果可能通过调DUXAP8/miR-519b-3p轴抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

沉默BCAT1对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究BCAT1在肺癌细胞A549的增殖、迁移及侵袭能力中的作用。方法:通过小干扰RNA(si RNA)沉默A549细胞中BCAT1的表达,细胞分为对照组(Con)、BCAT1基因沉默组(si RNA-BCAT1)和si RNA阴性对照组(si RNA-NC)。利用Western blot检测si RNA对BCAT1的沉默效果;划痕愈合实验检测沉默BCAT1后A549细胞迁移能力的改变;Transwell小室侵袭实验检测沉默BCAT1后A549细胞侵袭能力的变化;MTT实验检测沉默BCAT1对A549细胞增殖能力的影响。结果:与Con组相比,si RNA-BCAT1组的BCAT1蛋白表达明显降低(P0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P0.05),能够穿膜的细胞数明显减少(P0.05),而Con组和si RNA-BCAT1组细胞的增殖能力比较差异无明显统计学意义(P0.05)。结论:沉默BCAT1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,而对其增殖能力无影响。     

microRNA-194模拟物对成骨肉瘤细胞系SOSP_9607生物学 特性的影响

目的:观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP₉607细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP₉607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物（hsa-miR-194mimics）转染成骨肉瘤细胞系SOSP₉607,增强SOSP₉607细胞内miR-194的活性。结果:与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。实验组凋亡率（10.1±0.22）%与阴性对照组凋亡率（3.3±0.19）%相比明显增高（P<0.01）。与对照组比较,实验组细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少（P<0.01）。结论:通过转染miR-194模拟物增强SOSP₉607细胞中miR-194的活性对SOSP₉607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。     

Survivin和RhoA双基因沉默对卵巢癌细胞的增殖与侵袭影响

目的：探讨RNA干扰（RNAi）双向沉默Survivin和RhoA基因表达对人卵巢癌H08910PM细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法：构建Survivin和RhoA基因的串联microRNA干扰载体（Survivin-RhoA-microRNA）,通过脂质体介导转染人卵巢癌H08910PM细胞作为实验组,对照组为空载体转染组。转染48小时后,RT—PCR检测Survivin和RhoA的mRNA表达,Western．Blot检测Survivin和RhoA的蛋白质表达;利用MTT法、Transwell小室体外侵袭实验及流式细胞术检测转染后卵巢癌细胞的增殖、侵袭及凋亡情况。结果：Survivin—RhoA—microRNA明显抑制了H08910PM细胞中Survivin和RhoA基因mRNA和蛋白的表达：转染48小时后,实验组SurvivinmRNA和RhoAmRNA表达抑制率分别为68．82％、90．23％,Survivin和RhoA蛋白表达抑制率分别为63．91％、88．47％;MTT分析显示实验组细胞OD490的值为0．706±0．177,较对照组（1．172±0．241）明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;流式细胞术检测实验组细胞凋亡率为36．41±3．34％,较对照组（2．92±0．78％）明显升高（P〈0．01）;实验组细胞侵袭百分比为12．56±6．17％,较对照组（32．96±5．14％）明显降低（P〈0．05）。结论：成功构建Survivin和RhoA串联microRNA干扰载体（Survivin．RhoA．microRNA）。Survivin和RhoA双基因沉默显著抑制了卵巢癌H08910PM细胞的增殖和侵袭能力,并增加其凋亡率,两者具有协同作用,为双靶点治疗卵巢癌提供了新的思路和策略。     

长链非编码RNA SNHG14/miR-211对宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力的影响

摘要 目的：探讨长链非编码(Long chain non-coding,Lnc)RNA SNHG14/微小RNA(microRNA,miR)-211对宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力的影响。方法：宫颈癌细胞株SiHa设三组：空白组(不进行转染)、对照组(转染miR-NC)与miR-211组(转染miR-211 mimic), 噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,MTT] 检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞侵袭及转移,实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR, qPCR)检测LncRNA SNHG14与miR-211mRNA水平,Westem印迹法检测黏蛋白4(mucin 4, MUC4)蛋白水平。结果：转染后24 h与48 h,miR-211组的细胞增殖、侵袭、转移指数与LncRNA SNHG14与MUC4蛋白相对表达水平低于空白组和对照组(P<0.05),miR-211 mRNA表达水平高于空白组(P<0.05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论：过表达miR-211可抑制LncRNA SNHG14的表达,也能抑制MUC4表达,从而能抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及转移。     

miR-143在人膀胱癌细胞中的作用及机制

目的：microRNAs（miRNAs）的异常表达与多种疾病密切相关,并有可能用于肿瘤治疗。本研究探讨了miR一143在人膀胱癌细胞中的作用及机制,为膀胱癌的临床诊治提供参考。方法：采用体外培养的T24细胞株为研究对象,按照处理方式分为空白对照组（T24）、阴性对照组（NC）、miRNA-143转染组（miR-143）以及si—COX-2转染组（si—COX-2）。3H—thymidine法和Transwell趋化实验检测T24细胞增殖和迁移能力,免疫印迹法检测COX一2蛋白表达变化。结果：miR-143和si—COX-2转染T24细胞48h-72h后,细胞增值能力较正常T24细胞相比下降36％．49％（P〈0．01）,迁移能力下降81％。免疫印迹结果表明,si—COX-2或miR-143转染的T24细胞内源性COX-．2表达水平显著减少至正常T24细胞表达水平的O．39和0-31倍（P〈0．01）。结论：miR-143可降低膀胱癌T24细胞增值力和侵袭力,并抑制COX．2表达。miR-143可能通过COX-2通路发挥对膀胱癌T24细胞的增殖和侵袭的抑制作用。研究结果更加明确了microRNA在癌症中的功能,提示miR-143可作为膀胱癌的治疗候选药物。本研究为探索肿瘤生物标志物和治疗提供新的启示。     

hERG shRNA 表达载体构建及其稳定转染骨肉瘤细胞系MG-63、 SOSP-9607 的建立

目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel)shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607。方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达载体,并测序鉴定。使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹(Western blot)技术检测hERG蛋白的表达。结果:测序结果证实shRNA与载体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低。结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERG shRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607。