癌基因mdm2及其产物

ｍｄｍ２（ｍｕｒｉｎｅ ｄｏｕｂｌｅ ｍｉｎｕｔｅ２）基因定位于人染色体１２ｑ１３－１４,转录产物为－５．５ｋｂｍＲ－ＮＡ,在人体正常组织中有广泛表达,其编码区为１４７６ｂｐ,ＭＤＭ２蛋白定位在细胞核中,半寿期很短,利用单抗或多抗发现和有５种与ｍｄｍ２相关,但分子量不同的蛋白,ＭＤＭ２蛋白在体内外都能与突变型或野生型Ｐ５３蛋白结合,抑制Ｐ５３蛋白介导的反式活化作用。ｍｄｍ２可作为一种癌基因使Ｐ５３     

p53的两种结合蛋白：53BP1和53BP2

ｐ５３基因是一种广谱的肿瘤抑制基因,其产物ｐ５３为一多功能的转录调节因子,可以发挥调节细胞生长、细胞凋亡和ＤＮＡ修复的作用。在人类肿瘤已发现多种ｐ５３基因的点突变,但突变不是ｐ５３蛋白质丧失功能的唯一途径。胞内蛋白可能影响其活性和功能。５３ＢＰ１和５３ＢＰ２是ｐ５３在胞浆中的两种结合蛋白。本文阐述了有关这两种蛋白质的研究进展。     

肿瘤抑制基因研究新进展：多种瘤抑制基因MTS分子生…

人类第９号染色体短臂不到４０ｋｂ的座位发现了多种瘤抑制基因。它们分别编码两种蛋白：前叫做Ｐ１６蛋白,抑制依赖细胞周期素激酶。后比Ｐ１６小２０多个残基,功能推测与Ｐ１６相近。ＭＴＳ１基因与Ｐ５３相比,它在７５％的各种癌细胞中发生缺失;而Ｐ５３基因的缺失率在各种癌细胞中为５０％。Ｐ１６蛋白是到目前为止发现的第一个直接控制细胞增殖周期的细胞固有蛋白,而Ｐ５３控制细胞增殖周期要通过Ｐ２１间接发挥抑制作     

人乳腺癌MCF-7细胞系凋亡过程中bcl-2基因的结合蛋白

 Ｍ Ｃ Ｆ ７ 是 ｐ５３ 为野生型的人乳腺癌细胞系．为探讨该细胞系凋亡过程中 ｂｃｌ ２ 基因的下调机制,以 ５ 氟尿嘧啶（５ Ｆｕ）诱导凋亡,用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增出人 ｂｃｌ ２（ｈｂｃｌ ２）基因调控区长度为 ５５８ｂｐ 的片段,经亚克隆后的序列分析证实其准确性．用此 Ｐ Ｃ Ｒ 产物作为探针与 ５ Ｆｕ 刺激 １２ ｈ 后的 Ｍ Ｃ Ｆ ７ 核内蛋白质粗提物进行 Ｓｏｕｔｈｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹及凝胶阻滞（ Ｅ Ｍ Ｓ Ａ）分析．以未用 ５ Ｆｕ 刺激者为对照．结果显示,细胞核内一分子量为 ５３ ｋ Ｄ 的结合蛋白与 ｂｃｌ ２ 调控区的结合信号明显增强,而一种２０ ｋ Ｄ 的 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白与该区的结合信号明显减弱．这些结果提示ｐ５３ 蛋白有可能是ｂｃｌ ２ 的负转录因子,２０ ｋ Ｄ 的 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白有可能是ｂｃｌ ２ 的正转录因子．     

BMP—2和BMP—4基因结构及调控的研究进展

ＢＭＰ－４基因组包括５个外显子,不同组织来源的ＢＭＰ－４ＣＤＮＡ采用不同的启动子,ＢＭＰ－４基因上有ＣＯＵＰ－ＴＦ１的调节作用位点。ＢＭＰ－２基因组有２个外显子,不同组织来源的ＢＭＰ－２ＣＤＮＡ亦采用不同的启动子,ＢＭＰ－２基因上有Ｐ５３的作用位点。     

小鼠成纤维细胞凋亡过程中P53与bcl-2表达的时序性

为探讨细胞凋亡过程中,ｂｃｌ－２与Ｐ５３,这两种凋亡关键性基因的相互关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠正常与恶性转化的成纤维细胞的凋亡,观察了这两种基因在凋亡过程中表达变化的时序．经流式细胞计检测,这两种细胞在５－Ｆｕ作用２４ｈ均出现了凋亡峰,细胞存活率随之下降,ＤＮＡ电泳显现梯状断裂．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示,在５－Ｆｕ作用６ｈ后两种细胞Ｐ５３ｍＲＮＡ水平已明显增高,而ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平则在作用１２ｈ方明显降低．Ｐ５３上调与ｂｃｌ－２下调的明显时序性,说明Ｐ５３具备作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的条件．由此,为进一步了解凋亡过程的ｂｃｌ－２基因下调机理提供了线索     

p53基因及其功能研究进展

p53基因是一种肿瘤抑制基因,野生型p53对细胞周期和细胞凋亡起重要作用。其编码的蛋白P53相对分子质量为53×103,可刺激Cipt基因产生相对分子质量为21×103的蛋白,该蛋白可以抑制促使细胞通过细胞周期进入有丝分裂的酶的活性,进而抑制细胞生长表达而调控细胞生长,对于预防和治疗胆管癌、肝癌、胃癌等疾病有重要作用。我们在此简要阐述国内外对p53基因及其编码产物的结构、作用机制、检测、功能等方面的研究进展。     

在应答DNA损伤时P53的翻译后修饰

肿瘤抑制基因p53在肿瘤发生中发挥着重要作用,翻译后修饰是调节P53蛋白水平及活性的主要方式之一。癌基因mdm2编码的Mdm2蛋白是p53的负性调节因子,它可通过调节p53的稳定性来调节P53蛋白的水平,在应答DNA损伤时,P53的翻译后修饰可抑制P53和Mdm2的相互作用,使其半衰期延长,P53水平升高,P53N－末端具有多个可磷酸化的位点,这些位点的磷酸化可抑制P53与Mdm2的相互作用,使P53水平和转录活性升高,而P53 C－末端位点的磷酸化可激活P53与特异序列DNA结合的潜能,且C－末端某些位点的乙酰化亦可激活P53ＤＮＡ结合的潜能,进而调节Ｐ５３的水平及活性。     

植物MADS盒基因的功能和调节机理

植物中的ＭＡＤＳ盒基因是一个序列特异的调节基因家族。它和它所编码的蛋白转录因子在植物的生长发育过程中起着重要的调节作用。文中综述了植物中的ＭＡＤＳ盒基因的分子生物黉主其作用机理,展望了ＭＡＤＳ盒基因研究的意义和前景。     

外源性P53基因的表达对NCI—H358细胞的生长的影响

目前已经证实,肺癌细胞有多种癌基因异常,这些异常在肺癌的发生和发展过程中可起着重要的作用,Ｐ５３基因是一种与细胞生长密切相关的基因。探讨逆转录病毒载体介导外源性Ｐ５３基因对肺癌细胞生长的影响,为肺癌的基因治疗提供实验依据。     

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中,ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因,研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型ｐ５３基因编码区３’端７０３ｂｐ的ｃＤ－ＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中,得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３,经热诱导表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达,它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备,而且也可用于对ｐ５３蛋白羧基端多肽功能的研究。     

细胞程序死亡与bcl－2基因

细胞程序死亡,是有别于细胞坏死的另一种重要的衰老,死亡形式,它在胚胎发育,肿瘤发生,免疫系统的克隆选择中起重要作用,ｂｃｌ－２是调控ＰＣＤ的基因,但不能抑帛有类型的ＰＣＤ,最近发现,ｂｃｌ－Ｘ基因编码大小不同的两种蛋白,分别具有刺激和抑的ＰＤＣＣＤ的功能,ｂｃｌ－２通过抑制ＰＣＤ可导致细胞癌变,因而ｂｃｌ－２被看作第三类癌基因。     

脑星形胶质瘤基因表达及其与临床病理的关系

采用原癌基因Ｂｃｌ－２、Ｐ２１及抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ蛋白４种抗体,用ＡＢＣ免疫组织化学方法对４０例脑星形胶质瘤组织作免疫组化染色．结果发现：Ｂｃｌ－２及Ｐ５３基因表达在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中阳性率有显著性差异,而且染色强度也有明显差异．Ｐ２１、Ｒｂ基因表达在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中呈上升趋势,但仅在Ⅰ～Ⅲ级、Ⅰ～Ⅳ级之间有明显差异．可以认为：Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｐ２１、Ｒｂ在胶质瘤的发生中发挥一定的作用,尤其是Ｂｃｌ－２、Ｐ５３基因,这些基因蛋白的表达与胶质瘤恶性程度有关．测定胶质瘤中的Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｐ２１、Ｒｂ蛋白对于胶质瘤的诊断、鉴别诊断以及判断肿瘤的恶性程度与预后均有一定意义．     

细胞凋亡相关基因研究进展

细胞凋亡研究已成为当今国内外研究的新热点,本就近年来有关与细胞凋亡相关的基因或因子研究的进展做一综述,着重阐述了ｂｃ１－２、ｍｙｃ、ｐ５３和ＡＰＯ－１／ＦａｓＴＧＦβ１等对细胞凋亡的影响和作用,以期有助于进一步提示细胞凋亡的分子机理。     

FMR1基因结构与功能

ＦＭＲ１基因无时空特异性地表达提示它具有管家基因尾性质,其正常表达对于每个细胞发挥正常的功能都是必不同少的,而与增殖过程和表型发生过程无关。ＦＭＲ１基因在某些组织的时空特异性表达又提示,它也是一种在发育过程起重要作用的调节基因,对于中枢神经系统、生殖系统及其它许多组织的正常发育是必不可少的,可能在细胞的迁移和分化过程中起重要的调探作用。ＦＭＲ１基因表达一种定位于胞浆中的ＲＮＡ结合蛋白ＦＭＲＰ。ＦＭ     

耐甲氧苯青霉素葡萄球菌mecA基因的检测

耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和表皮葡萄球菌（ＭＲＳＥ）引起的医院感染已成为当今世界范围内的严重问题。青霉素结合蛋白２ａ（ＰＢＰ２ａ）是引起葡萄球菌耐甲氧苯青霉素的主要原因,它是由耐药基因ｍｅｃＡ编码的。本文主要综述近年来国外关于ｍｅｃＡ基因检测方法的研究进展,尤其是多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用。     

金属硫蛋白 - 潜伏膜蛋白融合基因的体外转录调控

ＥＢ病毒（ＥＢＶ）是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒．已往的研究表明,潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）基因是ＥＢＶ最可能的致瘤基因．为制备ＬＭＰ基因转基因小鼠,探讨ＬＭＰ的体内致瘤作用,首先构建了含鼠金属硫蛋白－１（ＭＴ－１）基因调控区和ＬＭＰ基因编码区的ｐＢＲ３２２－ＭＴ－ＬＭＰ质粒,并用电击法将该质粒与ｐＫＪ１－Ｎｅｏ质粒共转染人胃癌细胞株ＭＧＣ,对ＭＴ－ＬＭＰ基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究．结果表明：（１）两质粒共转染效率为８６．７％;（２）ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析显示,完整的ＭＴ－ＬＭＰ基因已整合入转染的ＭＧＣ细胞基因组,且在不同的转染细胞克隆中,ＭＴ－ＬＭＰ基因整合的方式及拷贝数不同,拷贝数从１到１９不等;（３）ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析证实,ＭＴ－ＬＭＰ基因不仅在转染的ＭＧＣ中能够转录,而且在１０μｍｏｌ／Ｌ镉诱导下,ＭＴ－ＬＭＰ基因转录增强,平均增高约１．４倍．结果说明,在ＭＴ－１基因调控区指导下,ＬＭＰ基因不但有ｍＲＮＡ水平的表达,而且其表达受重金属镉的调控,上述结果为制备ＭＴ－ＬＭＰ转基因小鼠     

一种可诱导细胞凋亡的鸡贫血病毒蛋白

鸡贫血病毒（ＣＡＶ）是一种全球性的禽传染病的病原。为环状单链ＤＮＡ,大小为２．３ｋｂ,是圆环病毒科的成员。ＣＡＶ基因组包含了３个部分或完全重叠的基因。ＣＡＶ可通过细胞凋亡使胸腺细胞及人工培养的转化型单核细胞产生致命的细胞病变（ＣＰＥ）。在转化的（鸡）细胞中,ＶＰ３基因的编码产物凋亡素可以造成凋亡,而这种效应不依赖于ｐ５３,且不受凋亡抑制蛋白Ｂｃｌ－２及ＣｒｍＡ的抑制。令人注目的是,凋亡素能使人肿瘤     

肿瘤细胞多药抗性基因的表达调控

肿瘤细胞多药抗性的一个重要特征是Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的过度表达,从人、鼠中分离到编码Ｐｇｐ的ｍｄｒｌ基因,ｍｄｒｌ基因启动子含有ＡＰ１、ＳＰ１、热应激等多种反应元件,有三种核蛋白能与ｍｄｒｌ启动子结合。抗肿瘤药物、致癌剂、紫外线、热应激使ｍｄｒｌ基因活化,ｒａｓ,ｒａｆ,ｐ５３,ｍｙｃ等癌基因参与ｍｄｒｌ基因的表达调控。     

细胞凋亡过程中bcl-2基因的甲基化

为探讨凋亡过程中,ｂｃｌ－２基因下调与该基因甲基化状态的关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０,ＴＣ３Ｈ１０及人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７的凋亡,分别检测了这三种细胞凋亡过程中ｂｃｌ－２的表达变化,与其调控区及编码区的甲基化状况．我们曾观察到５－Ｆｕ作用２４～４８ｈ出现细胞存活率下降,ＤＮＡ梯状断裂及细胞周期凋亡峰显现等典型凋亡现象．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示,在５－Ｆｕ作用１２ｈ时ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平已明显降低．由此,我们用小鼠ｂｃｌ－２（ｍｂｃｌ－２）及人ｂｃｌ－２（ｈｂｃｌ－２）基因调控区ＰＣＲ扩增片段及ｂｃｌ－２编码区（ｃＤＮＡ）片段作为探针,与５－Ｆｕ作用１２ｈ的细胞ＤＮＡ的ＭｓｐⅠ／ＨｐａⅡ酶切产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,以未作用的细胞ＤＮＡ同样酶切杂交为对照．通过杂交带谱的变化,分析ｂｃｌ－２基因的甲基化状况．结果显示：ｍｂｃｌ－２及ｈｂｃｌ－２在５－Ｆｕ作用１２ｈ后调控区甲基化水平增高,但其编码区甲基化状态皆未出现可检出的变化．上述结果提示：ｂｃｌ－２基因调控区甲基化水平升高可能与该基因下调有关