抑癌基因LIMD1

抑癌基因LIMD1在肿瘤发生及演进中的作用逐渐受到重视,两者的因果关系较为密切,如与肺癌、乳腺癌、头颈部恶性肿瘤及儿童急性淋巴细胞白血病等相关。本文就LIMD1的发现、结构、生物学功能及在肿瘤中的作用机制等做一综述。     

SDF-1／CXCR4的研究进展

基质细胞衍生因子-1(stromal cell—derived factorl,SDF-1)是α趋化因子家族的—个新成员,其受体CX—CR4广泛地表达在许多组织和器官上。SDF—1／CXCR4与造血干／祖细胞的动员和归巢密切相关,并且是白血病细胞迁移、播散的重要因子。近来研究发现,SDF—1／CXCR4参与调节造血干／祖细胞的增殖及其白血病细胞抗凋亡过程;能够通过免疫调节发挥抗感染、抗肿瘤作用。因此,对SDF—1／CXCR4的深入研究将有助于阐述造血机制和肿瘤细胞生长机制,为临床移植和抗肿瘤治疗提供新的途径。     

抑癌基因PTEN／MMAC1的cDNA克隆及其表达质粒的构建

为了获得了PTEN/MMAC1的cDNA并构建其酵母双杂交系统中的诱饵质粒和逆转录病毒表达质粒。利用RTPCR方法,从293细胞中扩增出一约12.kb的DNA片段,与pGEMT Easy连接,作全自动测序确证,重组入pLexA载体,构建成pLexA-PTEN/MMAC1,并用醋酸锂法转化酶母菌EGY48（p8op-LacZ）,在选择性培养基上观察pLexA-PTEN/MMAC1在EGY48(p8op-LacZ）中的表达情况;同时,PTEN/MMAC1的cDNA也重组入pLXSN构建pLXSN-PTEN/MMAC1。结果PCR获得1.2kb的DNA序列与献报道的PTEN/MMAC1的cDNA一致,转化的酵母菌在选择性培养上培养3d后,长出约1mm大小的白色菌落;pLXSN-PTEN/MMAC1可酶切出1.2kb的PTEN/MMAC1片段。结果表明获得了PTEN/MMAC1的cDNA,pLexA-PTEN/MMAC1可作为酵母双杂交系统中的诱饵质粒,而pLXSN-PTEN/MMAC1的构建为进一步研究其抑癌作用打下了基础。     

SIRT1与肝细胞癌

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界上最常见的癌症之一.然而,就目前现状而言,HCC的治疗效果还很有限.作为一个依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的去乙酰化酶, SIRT1(silent mating type information regulation 2 homolog 1 )参与了代谢、应激反应、衰老以及肿瘤的演进等许多重要的生物学进程.临床研究显示,SIRT1在HCC患者中异常高表达,并可预测其不良预后;进一步的研究表明,SIRT1在HCC演进中发挥了关键作用,且作用范围广泛,分子机制复杂.这提示,SIRT1有望成为新的HCC治疗靶点和诊断、预后标志物.本文拟对SIRT1在HCC的演进和预后中的具体作用及其潜在分子机制作一总结,并就SIRT1作为肝癌治疗靶点和诊断、预后标志物的可行性做出探讨.     

甲型H1N1／2009流感病毒的种属跨越机制

在世界范围流行的甲型H1N1／2009流感病毒具有下述3个重要特征：可寄生于人体,易感人群很多,患者年龄偏低．本研究确定了病毒蛋白中的一块关键区域．该区域对病毒所寄生的物种的种属范围起决定性作用,并且是全球性流感病毒的一个标志性区域．正是该区域氨基酸的特性导致了上述3个特点．具体来说,对宿主的免疫系统而言,病毒蛋白质结构的变化会形成新的标靶结构,并且可以进一步导致宿主范围的变化．基于多肽链发生致病性结构转换的概率,本研究确定了甲型流感病毒中对控制宿主范围起决定性作用的氨基酸的位置．研究发现甲型H1N1／2009流感病毒中处于这些位点的多肽链在本质上可以在寄生于人的毒株中表达,而之前仅在宿主为禽、猪的毒株中被发现．其与另一氨基酸短串的协同构象改变对于甲型H1N1／2009流感病毒的种属跨越具有重要作用．人体对这些关键位点的免疫缺陷导致了甲型H1N1／2009流感病毒宿主人群多和青年人易致病的特点．     

抑癌基因OVCA1的研究进展

随着肿瘤分子生物学技术及学科的发展,人们认识到癌症是一种基因疾病,肿瘤的发生发展是多种基因参与的复杂过程,包括癌基因的异常激活和肿瘤抑制基因失活。新近分离鉴定的重要的肿瘤抑制基因——卵巢癌基因1(OVCA1)在多种肿瘤中存在高频率的缺失和突变,对多种癌细胞增殖有明显的抑制作用,可能作用于肿瘤发生的早期阶段,在哺乳动物中高度保守,提示在细胞中具有重要作用;OVCA1可能具有调控细胞周期、翻译、DNA损伤及胚胎发育等生物功能,具体作用机制尚不明确;体外研究显示,OVCA1的缺失表达导致肿瘤发生可能与周期蛋白D1上调表达、P16下调表达相关,与p53基因突变可能存在相互作用;OVCA1的缺失表达与卵巢癌发生发展及预后密切相关,与宫颈癌及人乳头瘤病毒感染、乳腺癌等恶性肿瘤的关系尚在研究中。我们简要综述了OVCA1基因的国内外研究进展,为卵巢癌等恶性肿瘤进行基因水平的诊治提供理论依据。     

LKB1抑癌机制研究进展

人LKB1(Liver Kinase B1,或Serine-Threonine Kinase 11,STK11)基因的胚系失活突变可导致癌症易感病皮杰氏综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS),该病患者多发错构瘤息肉且患癌症风险增加。LKB1基因的体细胞突变还广泛地存在于众多类型的恶性肿瘤中,如肺癌、结肠癌和乳腺癌等,因此,LKB1被普遍认为是抑癌基因。LKB1基因的编码产物LKB1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,调节多种细胞生理病理过程。虽然LKB1的抑癌机制尚不完全清楚,但现有的研究表明,对细胞生长增殖、能量代谢和细胞极性等的调控是其抑制肿瘤发生和发展的重要方面。本文就目前已知的LKB1的抑癌机制作一综述。     

Notch-1信号通路与甲状腺乳头状癌的关系

研究Notch-1信号通路中Notch-1、NICD、Hes1、c-Myc与人甲状腺乳头状癌的关系,探讨Notch-1信号通路在甲状腺乳头状癌中的分子机制。对照人甲状腺乳头状癌及正常甲状腺组织标本各35例,采用Real Time PCR检测Notch-1、Hes1、c-Myc的mRNA表达情况,采用免疫组织化学、Western blot方法检测组织标本中Notch-1、NICD、Hes1、c-Myc蛋白的表达情况。Notch-1、Hes1在甲状腺乳头状癌中的mRNA表达水平明显降低,c-Myc mRNA的表达在甲状腺乳头状癌中升高,Notch-1、NICD、Hes1蛋白在人甲状腺乳头状癌中的表达低于正常甲状腺组织（P〈0.05）,c-Myc蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达高于正常甲状腺组织（P〈0.05）。甲状腺乳头状癌组织标本中,Notch-1信号通路中Notch-1、NICD、Hes1在基因转录和蛋白质表达水平上均明显下调,而c-Myc的基因转录和蛋白质表达水平均升高,提示Notch-1信号通路在甲状腺乳头状癌的发生发展中起抑癌作用,c-Myc基因表达升高与Notch-1信号通路可能无关。     

血小板／T细胞活化抗原1（PTA1，CD226）

血小板／T细胞活化抗原1（PTA1）是表达于活化T细胞,NK细胞,活化内皮细胞以及巨核血小板谱系的1种新的白细胞分化抗原,参与NK细胞,杀伤性T细胞,内皮细胞以及血小板的功能。新近的研究表明PTA1胞膜外区第1个结构域（D1）与PTA1分子的功能有关,D2结构域及部分D1结构域可能被另一膜相关分子所掩盖,人血清和PBMC培养细胞上清液中存在可溶性PTA1分子（sPTA1),sPTA1的产生与肿瘤等某些临床疾病有关;PTA1分子参与了活化内皮细胞和活化T细胞的粘附,PTA1分子在人和灵长类动物间保守存在,PTA1的配体主要分布于Colo205,Jurkat,C32,WM115,BC4,RD和HS－913T等细胞系。     

癌蛋白YAP1的研究进展

Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)是Hippo信号通路(Hippo pathway)中的一个分子.早期研究人员发现,在Hippo信号通路正常的情况下,YAP1处于非激活状态;当Hippo信号通路中的某些分子出现突变时,YAP1处于超激活状态.此时,超激活状态下的YAP1可以促进细胞增殖、转移、生存(survival)以及维持干细胞活性.由于YAP1的超激活可以促进肿瘤的发生与发展,因此,YAP1被定义为一个癌蛋白.近期,研究者发现,YAP1的突变体与小细胞肺癌病人的存活率有一定关系,YAP1与链蛋白(catenin)、Kras相互作用,调节肿瘤细胞的转移侵袭能力,此外,部分micro RNA也与YAP1有相互作用.基于YAP1的功能,可以制定一些抗癌策略,寻找一些抗癌靶点.本文对当前YAP1的研究进行综述,为肿瘤治疗的基础及临床研究提供一些依据.     

人肝细胞癌中抑癌基因PTEN/MMAC1/TEP1的突变分析

PTEN／MMAC1／TEP1(PTEN)是新近分离到的抑癌基因,在多种肿瘤中存在突变。我们检测了34例人肝细胞癌中PTEN基因第5外显子和第8外显子的突变。采用聚合酶链方法以内含子引物扩增第5和第8外显子,继之以单链构象多态性和测序技术分析PTEN基因突变。有4例肝细胞癌SSCP显示异常条带并经测序证实存在突变。2例发生于第4内含子,突变位点相同;另两例发生于第8外显子,其中1例碱基颠换导致PTEN蛋白产物304位半胱氨酸突变为甘氨酸。     

Genetic alterations in the Catnb gene but not the H-ras gene in hepatocellular neoplasms and hepatoblastomas of B6C3F(1) mice following exposure to diethanolamine for 2 years

The present study characterized the immunohistochemical localization of beta-catenin protein in hepatocellular neoplasms and hepatoblastomas in B6C3F(1) mice exposed to diethanolamine (DEA) for 2 years and evaluated genetic alterations in the Catnb and H-ras genes which are known to play important roles in the pathogenesis of liver malignancies. Genomic DNA was isolated from paraffin sections of each liver tumor. Catnb exon 2 (corresponds to exon 3 in human) genetic alterations were identified in 18/18 (100%) hepatoblastomas from DEA exposed mice. Deletion mutations (15/18, 83%) were identified more frequently than point mutations (6/18, 33%) in hepatoblastomas. Eleven of 34 (32%) hepatocellular adenomas and carcinomas from DEA treated mice had mutations in exon 2 of the beta-catenin gene, while only 1 of 10 spontaneous neoplasms had a deletion mutation of codon 5-6. Common to all liver neoplasms (hepatocellular adenomas, carcinomas and hepatoblastomas) was membrane staining for the beta-catenin protein, while cytoplasmic and nuclear staining was observed only in hepatoblastomas. The lack of H-ras mutations in hepatocellular neoplasms and hepatoblastomas suggests that the ras signal transduction pathway is not involved in the development of liver tumors following DEA exposure which is different from that of spontaneous liver tumors that often contain H-ras mutations.     

Hypermethylation of the Ras association domain family 1A (RASSF1A) gene in gallbladder cancer

The tumor suppressor gene Ras association domain family 1A (RASSF1A) is highly methylated in a wide range of human sporadic tumors. The current study investigated the hypermethylation of RASSF1A, the expression of RASSF1A protein, and the correlation between these and the clinicopathological features of gallbladder (GB) cancer in Korean patients. Formalin-fixed, paraffin-embedded tumors and non-neoplastic GB tissues (22 carcinomas, 8 adenomas, 26 normal epithelia) were collected from patients who had undergone surgical resection. The methylation status of two regions of the RASSF1A CpG island was determined by methylation-specific PCR (MSP), and the expression of RASSF1A protein was examined by immunohistochemistry using tissue microarrays. The K-RAS mutation was analyzed by direct sequencing. Methylation of the RASSF1A promoter (region 1) was detected in 22.7% (5/22) of carcinomas, 12.5% (1/8) of adenomas, and 0% (0/26) of normal gallbladder epithelia (P = 0.025). Methylation of the first exon (region 2) was found in 36.4% (8/22) of carcinomas, 25.0% (2/8) of adenomas, and 8.0% (2/26) of normal gallbladder epithelia (P = 0.038). K-RAS mutations were present in 4.5% (1/22) of carcinomas and 25% (2/8) of adenomas. RASSF1A methylaton was not associated with clinicopathological factors or K-ras mutation. Reduction or loss of RASSF1A expression was observed in most methylated adenocarcinomas. Three RASSF1A-expressing human biliary tract cancer cell lines examined contained unmethylated promoters and exons 1. These results suggest that downregulation of RASSF1A expression by DNA hypermethylation may be involved in GB carcinogenesis.     

Isolation and characterization of the human genomic locus coding for the putative metastasis control gene nm23-H1

Nm23-H1 gene expression is inversely correlated with tumor metastatic potential in certain tumors, including melanomas, breast carcinomas, and hepatocellular carcinomas. Using nm23-H1 c-DNA primer and genomic polymerase chain reaction (PCR) amplification, we purified three PCR fragments (one of 4kb and two of 2 kb) covering the whole human genomic locus of the gene (8.460bp). We recombined the PCR products into pUC18 and produced a restriction map to perform subcloning. Complete sequencing of genomic PCR fragments, including the whole coding region of nm23-H1, revealed that the gene consists of five exons and four introns spanning 8.5kb. A sequence homology analysis between human nm23-H1 and the homolog gene of the rat (NDP-K) shows that exon-intron boundaries are well conserved between these two species.Accession number of the sequence: X75598     

猪POU1F1基因部分序列变异和同源性分析

对长白、杜洛克、约克夏、姜曲海、梅山和香猪等六个猪种的POU1F1基因第四、第五和第六外显子分别进行PCR扩增,并对含有第四、第六外显子的PCR产物和含有第五外显子的克隆产物进行测序。结果表明：六个猪种中,POU1F1基因的第四外显子存在碱基突变,为T→C。对该序列进行Nla Ⅲ 酶消化,产生两种不同的基因型(GG和HH);而第五和第六外显子则高度保守,未发现任何突变。将人POU1F1基因第四外显子、POU同源区核苷酸编码序列和氨基酸序列,分别与猪、小鼠、牛的POU1F1基因相应的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性比较,结果发现：人与猪、小鼠、牛的POU1F1基因第四外显子的核苷酸同源性分别高达93.9%、86.7%、92.1%,而由第四外显子编码的部分POU特异区的氨基酸序列则完全一致;人与猪、小鼠、牛POU同源区的核苷酸同源性分别为91.4%、85.1%、87.9%,氨基酸同源性分别为96.6%、94.8%、90.2%。这说明在哺乳动物中,其POU1F1蛋白的POU同源区和由第四外显子编码的POU特异区部分是高度保守的;猪可作为实验动物,建立人类相关疾病模型,为医学研究提供参考依据。     

肝细胞癌p53蛋白过表达的免疫组织化学研究

为探讨肿瘤抑制基因ｐ５３ 在肝癌细胞中的变化, 本实验对３８ 例人肝细胞癌组织ｐ５３ 蛋白的表达进行了免疫组织化学检测, 并与其临床和病理观察进行了比较研究。免疫组化检查显示, １５例肝癌组织ｐ５３蛋白免疫染色阳性, 其突变率为３９．５％ （１５／３８）。比较表明, 肝细胞癌ｐ５３ 蛋白的过度表达与病人的年龄、性别和肿瘤大小无关, 而与肝癌的转移和分化程度有关, 在高分化肝癌中其阳性率为９．１％ （１／１１）, 在中分化肝癌为２２．２％ （２／９）, 在低分化肝癌则高达６６．７％ （１２／１８）。因此, ｐ５３ 蛋白检测可作为肝癌预后判断的指标之一