同工酶及其方法论

在生物的遗传育种、种群结构分析、分类及进化等研究领域中同工酶是一种十分有效的标志物,分析同工酶对于了解生理生化特征、个体发生、基因调控机制均有重要意义.(一)同工酶研究的发展史1950年Meister从牛心中分离提取了乳酸脱氢酶(LDH),首次发现了LDH的不均     

梅花鹿血清乳酸脱氢酶同工酶酶谱观察

在国内外,乳酸脱氢酶(LDH)同工酶已被用于家畜及野生动物品种间亲缘关系鉴定、杂交优势预测和疾病诊断等,但对于梅花鹿Cervus nippon的LDH同工酶未见报道。为此,我们进行了梅花鹿的血清LDH同工酶测定,目的在于为梅花鹿的进一步利用和疾病诊断等提供科学依据。材料及方法一、材料材料采自四川省中药材公司灌县鹿场,为8月龄至2.5岁的健康鹿,从中随机抽取♂3头、♀7头供试验。二、方法用氯化琥珀胆碱(8—10mg/kg肌注)保定动物。约10—15分钟后,鹿处于肌松状态时,从颈静脉采血10ml,待血清白然析出后分离(3000rpm,5分钟),立即按《生物化学及…     

乳酸脱氢酶(LDH）同工酶在小白鼠胚胎发育过程中的变化

同工酶是一组能催化同一种生化反应但分 子组成不同的酶。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, 简称LDH）是参与糖酵解的酶。Market 等曾提纯组织LDH,并进行淀粉凝胶电泳 的分析,确定LDH有5类同工酶,从阳极到 阴极显示出LDH LDH LDH3, LDH,及 LDH,的5条区带,并指出LDH 同工酶电泳 图在不同组织和不同的发育阶段是不同的。     

乳酸脱氢酶(LDH)同工酶在小白鼠胚胎发育过程中的变化

同工酶是一组能催化同一种生化反应但分子组成不同的酶。乳酸脱氢酶(lactate dehydro-genase,简称LDH)是参与糖酵解的酶。Mar-ket等曾提纯组织LDH,并进行淀粉凝胶电泳的分析,确定LDH有5类同工酶,从阳极到阴极显示出LDH_1、LDH_2、LDH_3、LDH_4及     

鱼眼晶体酯酶同工酶电泳分析

关于鱼类同工酶,国内外已有研究。近年来对鱼眼同工酶的研究更引起人们的重视。藤尾,芳久以LDH同工酶为指标研究鱼类遗传基因进化时,指出鰤鱼及秋刀鱼的眼睛具有特异的E_4同工酶。朱兰菲等测定了20种鲤科鱼的心脏、脑、肌肉及晶状体LDH同工酶,证明晶状体的酶带清晰、稳定,能代表各种鱼的LDH表型。 酯酶是一种广谱底物的水解酶.其催化反应是,以萘乙酸酯为底物的同工酶属于羧基酯酶类,一般为单链或二聚体蛋白质。由于酯酶同工酶是直接的基因产物,故可作为遗传、生化指标。有关鱼晶状体酯酶同工酶的研究,目前国内尚少报道,本试验所进行的鱼晶状体聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,旨在探讨不同科属鱼类晶状体酯酶同工酶有无差异,为鱼类分类生物化学指标提供参考。     

华南虎,金钱豹,云豹血清蛋白和LDH同工酶的电泳研究

当前有关大型猛兽的血清蛋白和同工酶的分析研究在国内外尚未见报道,我们应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对华南虎(Panthera tigris amoyensis)、金钱豹(Panthera pardus)、云豹(Neofelisnebulosa)3种动物的血清蛋白和LDH同工酶进行了分析比较,为开展对这3种动物研究工作提供生化指标。     

岳鲤及其双亲(荷包红鲤♀、湘江野鲤♂)LDH同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳,结合CS910双波长扫描分析了岳鲤及其双亲(荷包红鲤♀、湘江野鲤♂)6种组织的乳酸脱氢酶同工酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)。结果表明:岳鲤及其双亲的LDH同工酶均存在组织特异性;亲本之间LDH同工酶的差异主要表现在肝脏;亲本各组织的大多数LDH同工酶在F_1代得到表现;亲本及F_1代的LDH同工酶可能由基因位点AA′BB′共同控制。本文还讨论了LDH同工酶分析和杂交结果预测的关系。     

几种罗非鱼乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶同工酶的电泳研究

用淀粉凝胶垂直平板电泳比较分析了三种口孵类型罗非鱼的6种组织的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶谱及其相对迁移特性,发现这两种同工酶在各个种内表现出组织的分布特异性,而在各个种间又具有明显的差异。利用LDH同工酶的F基因和MDH同工酶的A、B、C、D基因作为遗传标志,能够将亲缘关系相近的这三种罗非鱼区别开来,从而为形态分类学提供了新的生化证据,并且对于以育种为目的的亲本选择,具有一定的实用意义。     

乳酸脱氢酶同工酶基因在冬眠黄鼠中的表达

本文报道了用改良z.I. Ogita的小型薄层板聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析达乌尔黄鼠10种组织的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶,发现了15条亚带。并用尿素抑制与热变性实验初步确定这些亚带分属于5种LDH同工酶。同时测定了LDH同工酶总活性和5种LDH的相对比例,观察和分析了黄鼠在冬眠期及其冬眠前后LDH同工酶的变化。这些变化可能反映了异温动物(冬眠动物)的LDH同工酶基因的表达有不同于恒温动物的某些特点。     

贵州北部四种两栖类乳酸脱氢酶同工酶的比较研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,研究了贵州北部的四种两栖类动物:细痣疣螈、棘指角蟾、绿臭蛙和小弧斑姬蛙的心、肝、肾等组织的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶,发现LDH具有明显的种族特异性和组织特异性,不同种的动物和同种动物的不同组织都有各自的LDH同工酶谱型,可以用它们作为识别物种的附加指标。本文初步探讨了生化分类学与系统分类学的关系。     

牛皮蝇、纹皮蝇的EST和LDH同工酶的比较研究

本文首次对我国西北地区的牛皮蝇Hypoderma bovis L. 2、3龄幼虫和蛹期与纹皮蝇Hypoderma lineatum(De Villers)的相应阶段的乳酸脱氢酶(LDH)、酯酶(EST)两种同工酶作了聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明两种皮蝇的EST同工酶在酶带数目和相对迁移率(Rf)上均有较大差别;而LDH同工酶仅在2龄幼虫期纹皮蝇比牛皮蝇多显带2条。本文认为EST同工酶对皮蝇属的种和种下分化鉴定有十分重要的意义,而LDH同工酶也可作为鉴定皮蝇属虫种的参考依据。     

金鱼(Carassius auratus L.)同工酶的发生遗传学研究 Ⅱ.金鱼胚胎发育不同时期乳酸脱氢酶同工酶分析

采用垂直平板淀粉胶电泳方法,对西吉彩鲫、红高头金鱼胚胎发育不同时期乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行分析比较。研究结果表明,在游动期以前,各个发育阶段的LDH同工酶谱带基本相似。而在游动期以后,随着肝组织的形成,LDH同工酶谱带开始增加,出现了偏向负极的显示肝组织特征的谱带。这表明,细胞分化期间,LDH同工酶的特异性在一种或多种细胞类群中存在。组织和器官的分化与某些基因的活动有关。西吉彩鲫、红高头金鱼在胚胎发育时期LDH同工酶谱带差异不明显,从整个发育时期LDH同工酶发展趋势上看十分相似。这也为金鱼起源于野生的红、黄色金鲫提供了直接的根据。     

中国林蛙早期胚胎发育过程同工酶的研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对中国林蛙（Rana chensinensis)早期胚胎发育过程中（受精后0－512h)乳酸脱氢酶（LDH）同工酶和酯酶（EST）同工酶进行了研究,结果表明：1．LDH同工酶在受精卵及早期胚胎发育过程中一直存在,并且在胚胎发育的不同时期差异显著,LDH1同工酶在胚胎发育的各个阶段都占绝对优势,而DH5活性从尾芽期开始增强,LDH2,LDH3,LDH4 3种同工酶的活性较;低同时也发现LDH1,LDH3,LDH4同工酶各亚带也发育阶段的特异性,2．EST同工酶在开口期才开始出现。     

东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶的研究

目的研究乳酸脱氢同工酶在3种东方田鼠不同器官的分布.方法以大鼠和小鼠作对照,用聚丙烯酰胺凝胶电泳对3个不同地区的东方田鼠(Microtusfortis)血清、红细胞、肝脏、肾脏、肺中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行分析.结果东方田鼠血浆中只有LDH5,血清中湖南洞庭湖地区、宁夏青铜峡地区的东方田鼠也只有LDH5,而东北地区的东方田鼠则含有LDH1和LDH5,3个地区的东方田鼠肾脏和肺中都有5种LDH同工酶,肝脏中除东北地区的东方田鼠含5种LDH同工酶外,其余两种东方田鼠均以LDH5为主(LDH5占95%以上).结论东北地区东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶谱与其他两地的东方田鼠不相同.     

鲇鱼不同组织同工酶的组织特异性的初步研究

采用聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳法(PAGE)对鲇鱼的9种组织的5种同工酶(LDH、MDH、ADH、SUDH和EST)进行了分析,结果表明:5种同工酶在各种组织均有不同的表达程度:在心、肝、卵巢和肌肉中的表达频率最高,在脑和眼中最低。LDH和MDH在各个组织中均为强表达,与以往研究结果比较,认为鲇鱼LDH同工酶不存在C位点。鲇鱼同工酶组织特异性较明显。     

不同产地大熊猫红细胞同工酶的比较研究

本文对饲养在国内几家动物园内的不同性别及不同产地的十六只大熊猫的红细胞乳酸脱氢酶(LDH),苹果酸脱氢酶(MDH),G-6-PD(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)以及葡萄糖磷酸异构酶(GPI或PGI)四种同工酶进行了淀粉凝胶电泳分析。确定了大熊猫红细胞上述四种同工酶的酶谱,从而在生化水平上对我国不同产地的大熊猫进行了初步研究和探讨。     

金鱼乳酸脱氢酶的同工酶的发生遗传学研究——Ⅰ.鲫鱼和红龙睛金鱼各组织器官乳酸脱氢酶的同工酶的比较

本研究以鲫鱼和红龙腈金鱼为材料,对肾脏、心脏、肝脏、脾脏、脑、眼、卵和肌肉等8种组织器官分别进行了乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的分析比较。结果表明,不同组织中LDH的同工酶谱带是不相同的,存在着组织特异性。但鲫鱼与红龙腈金鱼同一组织器官的LDH的同工酶谱带则基本相同,这在一定程度上为金鱼是由鲫鱼进化而来的推论提供了依据。     

大豆黄酮对衰老小鼠脑组织SOD、LDH同工酶的影响

利用SOD和LDH同工酶电泳分析,研究大豆黄酮对衰老小鼠的抗氧化作用。结果显示大豆黄酮没有改变SOD和LDH同工酶谱的特征,但对因衰老引起的小鼠脑组织LDH和SOD同工酶活性、各组分的相对活性和比活力的变化有不同程度的改善作用,即LDH同工酶中LDH-2、LDH-3的活性明显下降,LDH-1的活性下降最为明显,而LDH-4的活性有所下降,但不显著,LDH-5的活性几乎没有变化,SOD同工酶的SOD-1和SOD-2的活性有不同程度的升高。这表明大豆黄酮是通过抑制LDH同工酶H亚基的合成来降低LDH的活性,而对M亚基的合成没有影响,并且能够促进SOD同工酶SOD-1和SOD-2的合成,不影响其遗传稳定性。     

镉对蟾蜍的4种器官乳酸脱氢酶同工酶的影响

以腹腔注射法对蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)给镉,处理一周后,观察了4种镉中毒浓度(0．1、0．2、0．4、0．8mg／kg)条件下的蟾蜍心、肝、肾和睾丸中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的变化。结果表明：随着镉中毒浓度的升高,心脏LDH同工酶的活性明显升高,睾丸LDH同工酶的活性明显下降,肝中的LDH1、LDH2、LDH3、LDH5在0．4、0．8mg／kg浓度组酶活性明显增加,而LDH4则明显减弱,肾中LDH1的活性随镉浓度的升高而明显升高,其它各酶带活性出现先增强而后又逐渐减弱的现象。结果提示了镉对蟾蜍主要器官LDH同工酶的影响具有组织差异性。     

金鱼同工酶的发生遗传学研究——Ⅲ.金鱼同工酶基因座位的加倍与多倍性

以鲫鱼和金鱼为材料,用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶体系作为基因标志,从检测同工酶的多重组合形式来研究基因的加倍与演化。对彩鲫与金鱼G6PD和LDH同工酶的分析结果表明,它们均具有与四倍体鱼类相应的谱带。因而说明了金鱼的G6PD和LDH同工酶基因座位的加倍与染色体的多倍性有关,为金鱼是四倍体的假说提供了证据。而对MDH同工酶的分析却得到了与二倍体鱼类相同的谱带数。这可能与加倍基因发生突变而不表达有关。