两种不同保护剂冻干的仔猪副伤寒活疫苗质量比较

【目的】系统比较两种不同保护剂冻干的仔猪副伤寒活疫苗(耐热苗和常规苗)质量指标,为科学评价两种疫苗质量提供参考。【方法】制备耐热苗和常规苗各3批,分别进行物理性状、纯粹性、活菌计数、安全性、剩余水分、真空度和保存期等参数测定和比较,同时比较冻干前后的活菌存活率及耐老化性能。任选耐热苗与常规苗1批,按3×109 CFU分别口服与肌肉注射仔猪各5头,设相同条件下不免疫对照5头,30 d后静脉注射致死量猪霍乱沙门氏菌,临床观察30 d后评估疫苗的效力。【结果】耐热苗及常规苗的物理性状、纯粹性、活菌计数、安全性、剩余水分、真空度均符合现行《中国兽药典》的要求。3批耐热苗冻干菌存活率分别为88.2%、83.1%和86.4%,耐老化试验后的活菌存活率为83.6%、82.9%和88.8%;然而3批常规苗冻干菌存活率分别为52.3%、56.2%和61.4%,耐老化活菌存活率分别为58.5%、60.2%和54.7%。经37°C、7 d耐老化试验结果显示,耐热苗物理性状良好,而常规苗原有团块表面凹陷1/4-1/2。保存期结果表明耐热苗4°C有效期可达24个月,常规苗仅为9个月。仔猪免疫攻毒结果表明,耐热苗肌肉注射及口服免疫均达100%(5/5)保护;常规苗肌肉注射达80%(4/5)保护,口服达100%(5/5)保护,不免疫对照0保护(5/5死亡)。【结论】耐热苗具有较高的冻干菌存活率和良好的耐老化性能,4°C可长期保存且不影响其免疫效力。     

布鲁菌抗体检测试剂盒稳定性的研究

目的评估布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)的质量稳定性,在产品注册时提交模拟运输条件相关研究资料,即由2～8℃冷链运输条件变更为常温2～30℃(不超过6 d)运输。方法用连续3批次布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)试剂,对其进行模拟运输条件试验,同时进行热加速稳定性、开瓶稳定性以及实时稳定性试验,通过观察外观、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检出量和均一性,考察其试剂盒的稳定性。结果模拟运输试验结果显示,布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)在模拟运输2～30℃不超过8 d时,其外观、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检出量及均一性均符合《中华人民共和国药典》2015年版(三部)的检定标准,试剂盒质量稳定。热加速稳定性结果显示,在36～38℃放置不超过6 d时质量稳定;开瓶稳定性结果显示,开瓶后12周内质量稳定。连续3批次试剂实时稳定性在试剂盒效期后一个月检测结果仍合格。结论布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)具有良好的稳定性,运输条件由2～8℃冷链运输可变为2～30℃不超过6 d的常温运输;在2～8℃试剂盒可保存12个月,开瓶后在12周内质量稳定,产品于2018年1月份在国家药品监督管理局完成注册,运输条件的变更获得批准。     

麻疹减毒活疫苗国家参考品的制备及标定

为了制备麻疹减毒活疫苗国家参考品,选用国内麻疹疫苗生产株沪191制备麻疹疫苗参考品。生产过程中严格控制精密性、水分含量,对候选参考品进行鉴别试验、水分含量、病毒滴度及无菌检查等检验。检验合格后组织进行候选参考品病毒滴度协作标定,共有5个实验室参加了协作标定。协作标定完成后,对实验室内变异、实验室间变异及国际参考品在不同实验室间的变异进行了分析。此外还对疫苗进行了热稳定性和实时稳定性分析。结果显示经5个实验室协作标定后,麻疹减毒活疫苗国家参考品的滴度为4.96±0.26 lgCC ID50/m l,实验室内部变异在1.09%～4.64%之间,实验室间变异为2.62%。国际参考品在不同实验室间的变异为4.19%。稳定性考核数据表明制备的参考品具有较好的稳定性,符合作为麻疹减毒活疫苗国家参考品的要求,滴度为4.96±0.26 lgCC ID50/m l。     

鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂用国家参考品的研制

目的研制鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)抗原检测试剂用国家参考品。方法通过对5株鼠疫耶尔森菌和10株非鼠疫耶尔森菌的菌种检定、培养及灭活、抗原检测,组建鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂用国家参考品。对参考品进行样品均匀性以及稳定性评估,组织5家实验室协作标定。结果参考品由5份阳性、10份阴性、1份最低检出量以及1份重复性样品组成,均匀性和稳定性良好。协作标定结果显示:①5份阳性参考品阳性率100%;②10份阴性参考品阴性率100%;③最低检出量参考品的检出量不高于1.0×10~6个菌/mL;④重复性参考品检测反应结果应一致(酶联免疫法、上转发光免疫层析法等CV<5%)。结论建立的鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂用国家参考品填补了相关领域的空白,可用于相关试剂的质量控制。     

双歧酸奶定量干燥菌种的实验室研究

目的:对双歧酸奶定量干燥菌种的实验室研究进行初步探讨.方法:培养收获三种乳酸菌(双歧杆菌、乳杆菌、嗜热链球菌),并采用真空冷冻干燥技术进行处理,从而对干燥效果以及常温保存活性进行评价和分析.结果:三种乳酸菌的干燥菌粉活菌计数均大于1012个/g;凝乳试验显示次代菌种发酵时间明显低于第一代;混合发酵的凝乳中活菌计数均大于106个/ml,单一菌种发酵的凝乳中活菌计数超过1010个/ml;干燥菌种在37℃放置30 d后,活菌数仍可达108个/g以上.结论:双歧酸奶定量干燥菌种实验室研究结果令人满意,为开发双歧酸奶袋装式干燥菌种打下了基础.     

A族链球菌核酸检测试剂国家参考品的研制

目的研制A族链球菌核酸检测试剂国家参考品。方法将10株A族链球菌株和10株非A族链球菌参考菌株分别在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。采用A族链球菌核酸检测试剂对阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性和最低检出限进行了适用性验证,并组织4家实验室开展了协作标定。结果建立了由10个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品组成的A族链球菌核酸检测试剂评价用国家参考品。经评估该参考品具有良好的均匀性及稳定性,协作标定结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性参考品均符合要求,最低检出限参考品菌液浓度两家实验室标定为1×10~4个/mL,两家实验室标定为1×10~3个/mL。结论研制的参考品可以用于A族链球菌核酸检测试剂的质量评价。     

麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响

目的了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围。方法用DMEM培养液将Vero细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验。结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85%以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果:137~169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异(P>0.05),170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异(P<0.01)。结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗最佳细胞代次。     

首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品的制备和标定

目的制备和标定百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品。方法按《中华人民共和国药典》2015版(三部)(简称《中国药典》)相关要求,制备候选百日咳杆菌鼠源抗血清参考品(简称候选参考品),以WHO百日咳杆菌鼠源抗血清标准品(编号97/642)为标准,组织3家单位进行协作标定,并采用热加速试验对候选参考品进行稳定性观察。结果共制备合格候选参考品300支,其外观、水分、分装精度均符合《中国药典》的相关要求;协作标定结果显示,室内和室间几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均低于20%;经统计学分析,最终确定候选参考品中含PT-Ig G、FHA-Ig G、PRN-Ig G分别为95 IU/m L、917 IU/m L、102 IU/m L,95%可信区间分别为91.7~103.7 IU/m L、900.2~944.5 IU/m L、99.4~106.1 IU/m L;每支安瓿分别含PT-Ig G 19 IU、FHA-Ig G 183 IU、PRN-Ig G21 IU;候选参考品于-20℃放置15个月及37℃放置7 d、14 d、21 d和28 d后,各种百日咳组分抗体的酶标单位值均变化不大,差异均无统计学意义(P0.05)。结论首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品均符合《中国药典》的各项要求,且一致性、稳定性良好,可用于百日咳组分疫苗小鼠效力血清学方法的质量控制评价。     

粪微生态制品保存方法

目的探索粪微生态制品体外保存方法,为粪微生态制品的保存及运输提供依据。方法将新鲜粪微生态制品按照加入甘油、蔗糖保护剂的不同以及制备冻干粉的方法分为6组,用10倍稀释法稀释粪菌液,微量点样法将各浓度的粪菌液涂于Wilkins-Chalgren培养基,30℃恒温箱中培养并计数。在保存2周、1个月、2个月、3个月时复苏部分微生态制品,用同样的方法培养并计数。结果粪微生态制品活菌数随时间递减,在2周内下降速度最快,递减105~107数量级。结论甘油、蔗糖这两种保护剂以及冻干粉的制备对粪微生态制品的保存差异不大,新鲜粪微生态制品仍为最佳选择。     

NMR of live systems

Continuous non-destructive in vivo biochemical measurements have been a desired but seemingly unattainable goal for many years. Now, however, the use of nuclear magnetic resonance (NMR) seems to be close to reaching that end. This review can be divided into two sections. The first introduces and discusses relevant NMR parameters such as chemical shift and relaxation times form the view of their application to biologic systems. The second part highlights recent achievements by showing the variety of chores NMR can perform. In particular, the topics of pH measurement, quantitation and identification of phosphorus and carbon metabolites, and enzyme kinetics are all discussed. Also mentioned are limitations of NMR such as low sensitivity. Finally, there is a discussion of the new NMR technologies such as whole body proton imaging and topical NMR.     

Genetic live vaccines mimic the antigenicity but not pathogenicity of live viruses.

The development of an effective HIV vaccine is both a pressing and a formidable problem. The most encouraging results to date have been achieved using live-attenuated immunodeficiency viruses. However, the frequency of pathogenic breakthroughs has been a deterrent to their development. We suggest that expression libraries generated from viral DNA can produce the immunologic advantages of live vaccines without risk of reversion to pathogenic viruses. The plasmid libraries could be deconvoluted into useful components or administered as complex mixtures. To explore this approach, we designed and tested several of these genetic live vaccines (GLVs) for HIV. We constructed libraries by cloning overlapping fragments of the proviral genome into mammalian expression plasmids, then used them to immunize mice. We found that inserting library fragments into a vector downstream of a secretory gene sequence led to augmented antibody responses, and insertion downstream of a ubiquitin sequence enhanced cytotoxic lymphocyte responses. Also, fragmentation of gag into subgenes broadened T-cell epitope recognition. We have fragmented the genome by sequence-directed and random methods to create libraries with different features. We propose that the characteristics of GLVs support their further investigation as an approach to protection against HIV and other viral pathogens.     

Microencapsulation of live probiotic bacteria

Scientific research regarding the use of live bacterial cells for therapeutic purposes has been rapidly growing over the years and has generated considerable interest to scientists and health professionals. Probiotics are defined as essential live microorganisms which, when administered in adequate amounts, confer a health benefit on the host. Due to considerable beneficial health effects, these microorganisms are increasingly incorporated into the dairy products; however, many reports demonstrated their poor survival and stability. Their survival in the gastrointestinal (GI) tract is also questionable. To overcome these problems, microencapsulation techniques are currently receiving considerable attention. This review describes the importance of live probiotic bacterial microencapsulation using an alginate microparticulate system and presents the potentiality of various coating polymers such as chitosan and polylysine for improving the stability of this microencapsulation.