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发根农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转化烟草的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
用冻融法和三亲交配法将具有几丁质酶基因、β—1,3—葡聚糖酶基因和卡那霉素抗性标记基因的质牲pBLGC导入具有Ri质粒的发根农杆菌中。用叶盘法转化烟草的三个品种,经Kan抗性筛选获得126株再生植株,对119株再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测,其中几丁质酶基因至阳性的植株有72株,β—1,3—葡聚糖酶基因至阳性的有47株,具有几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因的植株有36株。对转化的24株转基因经PCR-Southern杂交,结果均至阳性。实验结果表明,外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关,几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因分别或共同整合到植物基因组中。 相似文献
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利用微束激光穿刺法将抗真菌基因导入棉花的研究初报 总被引:4,自引:1,他引:3
以棉花感受态萌动种胚作为外源基因转化的受体,用激光微束穿刺法将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花,所构建的植物表达载体pB IBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶)基因。激光转化处理的种胚经卡那霉素筛选,已经获得抗性小植株。研究了微束激光转化法用于棉花感受态萌动胚转化预培养的时间、高渗液对材料的处理等。研究表明:用微束激光转化处理种胚是一种操作简便、重复性好的转化方法,用该法可将外源基因导入植物感受态萌动胚,避开植株离体再生的困难。 相似文献
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将菜豆几丁酶基因导入苹果砧木的研究 总被引:17,自引:1,他引:16
以苹果砧木八楞海棠(Malusmicromalus)为实验材料,用微束激光穿刺法将菜豆几丁酶基因导入苹果叶片,成功地获得了转基因植株。实验结果表明,以苗龄26天的小苗上部刚展开的叶片再生频率可达100%。经高渗缓冲液预处理后用激光微束穿刺导入外源DNA可得到较高的转化频率。在150个再生叶片中经卡那霉素筛选得到25株绿苗,经PCR扩增检测,3株呈阳性结果,表明外源几丁酶基因已整合到苹果的基因组DNA中。 相似文献
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转双价水解酶基因番茄植株对枯萎病抗性的提高 总被引:9,自引:0,他引:9
利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,首次将莱豆几丁质酶和烟草β-1,3-葡聚糖酶双价水解酶基因导入番茄品种A53(Lycopersicon esculentum cv.A53)中,获得批量转基因再生植株。对外源基因的PCR和Southern杂交结果表明,外源基因已经整合到番茄基因组中,其拷贝数1-8个不等。Northern杂交和卡那霉素喷施表明目的基因和标记基因均已得到表达,抗病性鉴定初步表明转基因植株对枯萎病的抗性显著提高。 相似文献
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导入β—1,3—葡聚糖酶及几丁质酶基因的转基因可育油菜及其?… 总被引:31,自引:0,他引:31
利用农杆菌转化法,将组成型表达β-1,3-葡聚糖酶及必丁质酶基因的双价值植物表达载体pBLGC转化优质甘蓝型油菜品种H165,并得到了抗卡那毒素(Kanamycin,Kan)的再生植株。我们对所得到的抗Kan的再生苗进行了初步分子生物学检测,结果表明,在K15(Kan 15mg/L)培养基上的绿苗中有30%为PCR阳性植株,而在K25(Kan 10mg/L)培养基上的绿苗有53%的阳性率。对部分P 相似文献
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利用激光微束穿刺法将外源基因导入小麦的研究 总被引:21,自引:1,他引:20
用激光微束穿刺法将携带有新霉素磷酸转移酶(NPT-Ⅱ)基因的质粒pJIT101导入京花1号小麦幼胚细胞。方法是将小麦幼胚细胞进行高渗缓冲液预处理,用微米级的激光微束处理,然后在卡那霉素培养基上筛选出具抗性的愈伤组织及绿色小植株。第一年,从150个小麦幼胚中,在卡那霉素培养基上筛选出4株绿苗,取两株进行NPT-Ⅱ酶活性分析,测到了NPT-Ⅱ酶的活性。第二年重复实验,从245个小麦幼胚中,经筛选获得1株绿苗,进行了叶片DNAPCR扩增检测,转化的绿色小苗扩增出所导入的NPT-Ⅱ基因编码的片段。结果表明,外源NPT-Ⅱ基因已导入了小麦,并实现了整合表达。 相似文献