我国水稻条纹叶枯病病原性质的研究

病样经提纯后,在电镜下获得3nm丝状和8nm分枝丝状结构,病毒样在蔗糖密度梯度离心后产生三条沉降带。经过电泳分析表明:病毒外壳蛋白为单一组分,分子量约为3.69×10~4dalton;病毒核酸有三种大小不同的组分,分子量为0.9,1.0,1.4×100dalton(混合样)。用提纯的抗原制备抗血清。提纯病毒抗原与所制备抗血清、与我国过去研究制备的抗血清及与日本制备的条纹叶枯病单克隆抗体都有血清学反应。     

反向炭凝法检测水稻普通矮缩病毒带毒体

本文探讨了水稻普通矮缩病毒(RDV)抗血清制备免疫抗体的方法及其对带毒体的检测。用化学纯活性炭为载体,制备RDV抗血清免疫炭抗体,抗血清需要纯化处理,具有结合抗原活性的抗体碎片[F(ab)2]优于免疫丙球蛋白(IgG)。F(ab)2浓度以每毫升约1毫克左右为宜,致敏条件以22—30℃碾磨结合30分钟为优。     

脆弱类杆菌的免疫原性研究及其应用

脆弱类杆菌ATCC 25285和CDC14462分别经甲醛、超声破碎和热酚等处理,制得全菌抗原(WCA)、外膜抗原(OMA)和脂多糖抗原(LPS),其免疫血清的凝集效价以WCA抗血清最高,OMA抗血清次之,LPS抗血清最低。三种抗血清以间接免疫荧光抗体技术(IFA)检定35株脆弱类杆菌,仍以WCA抗血清检出率最高。WCA免疫原性强,免疫产生抗体效价高,能检出更多的同种菌株,且制备简便,值得选用。     

2种β2-受体激动剂抗血清的比较研究

目的:通过比较分析,为β2-受体激动剂的快速免疫学检测方法及最佳免疫抗血清的选择提供依据。方法:分别以偶氮化法和碳二亚胺法将β2-受体激动剂克伦特罗(CL)和沙丁胺醇(Sal)连接到牛血清白蛋白和卵清蛋白上,免疫家兔;4次免疫后,采血制备抗CL和抗Sal的抗血清;用间接ELISA检测抗血清效价,用间接抑制ELISA检测抗血清交叉反应。结果:为抗CL抗血清的效价为1∶2560,抗Sal抗血清的效价为1∶5120。抗CL抗血清对Sal有0.088%的交叉反应,而抗Sal抗血清对CL有200%的交叉反应;就对CL的抑制而言,抗Sal血清比抗CL血清更敏感。结论:在检测β2-受体激动剂CL时,Sal完全抗原可能是制备抗血清的最佳抗原。     

脱落酸人工抗原合成及多克隆抗体制备

目的:为了对植物细胞中的脱落酸(ABA)进行定量和定位分析,研究了脱落酸人工抗原的合成以及多克隆抗体的制备。方法:用重氮化法将ABA分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)联结,得到ABA的免疫抗原和包被抗原,并采用紫外全波长扫描和SDS-PAGE对合成的抗原进行了鉴定。以经过鉴定的抗原免疫白兔,制备出ABA的多克隆抗体;采用间接酶联免疫法(ELISA)对抗血清进行效价检测,通过离子交换层析法获得纯化的抗体。结果:ABA与BSA的平均偶联比为5.3∶1,抗血清效价为1∶16000。结论:人工抗原和多克隆抗体制备成功,为采用ELISA和免疫胶体金技术(ICG)检测ABA提供了有效工具。     

双链核糖核酸病毒的研究 Ⅱ.家蚕细胞质多角体病毒免疫学的研究

按前报用分子筛凝胶柱层析纯化家蚕细胞质多角体病毒(Cytoplasmic polyhedrosis virus,以下简称CPV)作为抗原制备了兔抗血清。对接种CPV后不同时间的家蚕中肠组织内CPV的增殖过程进行了观察,表明利用免疫对流电泳在CPV感染后的12～20小时(即病毒在病蚕中肠组织内增殖初期)就可检出。家蚕CPV的抗血清与其他几种昆虫的CPV有免疫交叉反应,但当家蚕CPV的抗血清经双链多聚核苷酸(肌苷酸/胞嘧啶核苷酸,即poly I/poly C)吸收后,则与其他几种昆虫CPV的交叉反应即行消失。     

番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备

通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验。     

日本血吸虫循环抗原成分的分析

血吸虫宿主体内存在着多种成分组成的抗原谱。既往研究较多的,在电泳中出现于阳极端的多糖抗原只是其中之一,它定位于血吸虫成虫肠上皮细胞,Deelder等证明受染小鼠尿液中的三种循环抗原均为虫源性,其中两种为不耐热和不溶于三氯醋酸的未知成分。目前许多学者用三氯醋酸提取的循环抗原免疫动物,仅能查出循环抗原中的一种,这可能是过去检查循环抗原方法敏感性不高所致。究竟宿主体内有几种循环抗原及其组分,各自的理化特性和免疫源性如何?作者在Nash(1974),Houba(1976),杨士静(1981)等对多糖抗原研究的基础上,对活虫、活卵进入宿主血循环的…     

人免疫缺陷病毒早期蛋白Nef的表达、纯化及免疫原性研究

目的：通过原核细胞表达人免疫缺陷病毒（HIV）Nef抗原,制备特异抗血清,为Nef抗原检测提供技术方法。方法：以HIVBotswana毒株基因组为模板,用PCR法获得Nef蛋白编码基因,将其克隆到pET30a载体中,在大肠杆菌中表达Nef融合蛋白;用纯化的融合蛋白免疫BALB／c小鼠获得抗血清,用真核表达的Nef抗原对其特异性进行分析。结果：构建的Nef融合基因在大肠杆菌中获得表达,相对分子质量约为36x103,免疫BALB／c小鼠获得针对融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1：6400;免疫荧光和Westemblot检测表明,该抗血清能特异地与重组痘苗病毒表达的Nef抗原反应。结论：在大肠杆菌中表达了HIVNef融合蛋白,制备了Nef融合蛋白的高效价小鼠免疫血清,该血清能特异性识别HIVNef抗原,为HlVNef抗原检测提供了技术方法。     

黄瓜花叶病毒CP基因原核表达及抗血清的制备

把黄瓜花叶病毒 (CMV)西番莲分离物的外壳蛋白 (CP)基因 ,通过BamHI SacI位点定向插入pET 2 2b( )载体 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)中 ,经IPTG诱导下 37℃培养 6h ,SDS PAGE电泳示表达蛋白分子质量为 31 8kDa ,表达量占菌体总蛋白的 2 8 9%,表明该蛋白得到了高效表达。用冰冷的氯化钾溶液显色 ,用表达的特异蛋白质条带制备抗原 ,免疫家兔制备出病毒特异抗血清。采用ID ELISA测定抗血清效价为 1 0 -6;抗血清和CMV几个分离物均有特异反应 ,和TMV、菌体蛋白不发生非特异性反应 ;检测病毒灵敏度达 30ng ml,能够从稀释 31 2 5倍的感病植物汁液中检测出病毒     

牛IgA、IgM、IgG_1、IgG_2、重链特异性抗血清的制备

<正>通过选择对类和亚类具有选择性反应的特异性决定簇种类(而不是交叉反应决定族),可有效地制备免疫球蛋白类和亚类的特异性抗血清。牛IgG_1和IgG_2的完整分子在其重链和轻链上有共同抗原,用兔制备牛IgG_1和IgG_2抗血清,二者有交叉反应。同样,用兔制备的牛IgA、IgM和IgG抗血     

点免疫结合测定法检测谷氨酸产生菌噬菌体污染

点免疫结合测定法(简称DIBA法)是近几年建立的检测抗原抗体的新方法。关于用该法对照常规双扩法、对流免疫电泳法检测某些动、植物病毒从而表现出很高的灵敏度方面已有一些报道,但尚未见到有关用DIBA法检测噬菌体方面的有关材料。本文仅以谷氨酸产生菌T_(613)噬菌体为抗原,制备特异抗血清;并用DIBA法对照SPA法检测T_(613)菌噬菌体,发现在抗原抗体反应中DIBA法比SPA法具很高的灵敏度。现将结果报道如下。材料与方法一、材料 1、T_(613)菌噬菌体裂解液。 2、T_(613)菌噬菌体抗血清。 3、冻干酶联葡萄球菌A蛋白(HRP     

小鼠组蛋白去乙酰化酶2多肽抗血清的制备

目的利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断。方法根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blot及免疫组织化学方法鉴定。结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多肽抗原发生阳性反应,效价1∶4 000;Western blot结果显示抗血清可与多肽抗原及APP/PS1转基因小鼠的脑组织发生反应;免疫血清1∶100,1∶200,1∶400,1∶800四个稀释度均能与小鼠脑组织中的HDAC2反应。结论所制备的多肽抗血清可识别组织及血清中的HDAC2,可应用于相关领域的体内外研究。     

大肠杆菌抗血清的简易制备

在生物学教学中 ,免疫概念的建立是一个一直困扰教师教学工作的问题。如何通过一个直观、简易的实验 ,使学生获得有关抗原、抗体、抗原抗体间的免疫反应这些比较抽象的免疫学的基本知识 ,值得大家来探讨。我们在实际教学工作中 ,通过制备大肠杆菌的抗血清 ,并以所制备的抗血清进行抗原抗体之间的免疫学的反应 ,获得了较好的教学效果。1　材料与方法1.1　抗原菌种及培养　本实验采用大肠杆菌 (E.coli)为抗原 ,以牛肉膏蛋白胨培养基 (牛肉膏 3g,蛋白胨 10 g,氯化钠 5 g,琼脂 15～ 2 0 g,水 10 0 0 m L,p H7.4～ 7.6 )培养大肠杆菌。将大肠杆…     

马铃薯种薯生产的研究III．马铃薯Y病毒抗血清制备和诊断方法

用0.1 M Tris-Hcl(内含0.05M EDTA)或0．5M PB作提取液,以含0．5M,尿素的0.01 M PB回溶病毒沉淀,以防止病毒凝聚。通过PEG沉淀和反复两次差速离心,提取了由马铃薯“男爵”分离的阿Y分离物。电镜照片表明为形态均一的弯曲眭线状粒体。产量约为2毫克／100克鲜鼋叶片。以PVY—I抗原免疫家兔,用Frd全佐剂进行肌肉注射的方法,制备出PvY-I抗血清,其妓价在2560—5l 20。抗血清和PVx、rMV分离物,以及正常烟草叶片汁液无明显反应。应用PVY_I抗血清冻干剂,用微量凝聚和微量沉淀的方法鉴定马铃薯幼芽和感Y痫毒叶片汁液中的Y病毒,表明具有一定可靠性。由制备的抗血清提取免疫球蛋白致敏乳胶,可测出提纯的PvY抗原最低含量为L．52—2．2微克／毫升,可测出感染烟草叶片汁液的最高稀释度为I：100。制备的抗血清冻干粉和微量凝聚的血清学方法已用于1978和l 979年内蒙古自冶区乌盟后旗无病毒原种场的种薯田间鉴定。     

棉铃虫核型多角体病毒的血清学研究

用提纯的棉铃虫核型多角体病毒(NPV)的多角体蛋白和病毒粒子免疫家兔制备抗血清,用免疫扩散和对流免疫电泳对四林棉铃虫NPV的多角体蛋白和病毒粒于进行了血清学比较研究。四株棉铃虫NPV分为两个包埋类型：单粒包埋型和多粒包埋型。soI．{3株和H．M株属前者,VHA 273株和XIA 10株属后者。同一株NPV的多角体蛋白或病毒粒子只与它们同源抗血清有反应。它们之间无交叉反应,表明同一株NPV的多角体蛋白和病毒粒子各具有特异的抗原。四株NPV的多角体蛋白不仅与同源的多角体蛋白抗血清有反应,而且也与异 源的多角体蛋白抗血清有交叉反应,说明四株NPV多角体蛋白具有共同的抗原。而四株病毒粒子与同源的病毒粒子抗血清有反应,在它们之间无交叉反应,表明四株NPv病毒粒子各具有自己特异的抗原。     

单克隆抗体亲和层析技术

亲和层析技术中用常规抗血清作配体时,由于抗血清成份复杂、亲和力多样化,特异性强的制剂又不易得,因而此层析技术的应用受到限制.单克隆抗体(McAb)技术的建立,为亲和层析技术的应用带来了突破.因为McAb作为亲和层析技术中的配体有以下几个优点:(1)可以利用粗制抗原制备分泌单一抗体的杂交瘤细胞株,在体外或体内大量生产McAb;(2)由于McAb是针对单一抗原决定簇的,该决定簇是某一抗原物质所特有或是多种抗原物质所共有时,可没有任何交叉反应或有完全的交叉反应.     

用IgG指示试纸同时检测多种马铃薯病毒病

用硝基纤维素膜(NCM)为载体制备的抗体IgG指示试纸,可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的感染。以pH10.0的1％甘氨酸溶液为PVX、PVY和PVS的研磨缓冲液,比已报道的缓冲液效果好。在提取病毒抗原时加入4％纤维素酶,可提高病毒得率及所制备的抗血清灵敏度。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的 纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法 采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果 7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论 建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

枣疯病类菌原体抗血清的制备及其应用的初步研究

以确证枣疯病类菌原体抗原性的有无为目的,采收病树新梢茎皮用差速离心法进行了抽提分离。将此类菌原体抽提物用作抗原,对家兔免疫注射,制备了枣疯病类菌原体抗血清。用血清学方法测定了免疫原的抗原性及抗体效价。结果表明,枣疯病类菌原体具有抗原性。但其特异性抗体效价不高,仅是1/32.实验还证明了ELISA技术可以用予枣疯病类菌原体抗血清的研究。