单人直视下改良建立大鼠原位肝移植模型的体会

目的:建立稳定大鼠原位肝移植模型,缩短术中无肝期时间,提高手术成功率及受体存活率。方法:在Kamada"二袖套法"的基础上改进,单人直视下建立大鼠原位肝移植模型,行60例SD大鼠原位肝移植手术。本研究简化供受体麻醉方式,供肝采用经门静脉(必要时配合腹主动脉补救方式)进行冷灌注,缩短修肝时间,提前预置牵引线,固定进针位置,改进植入肝脏肝上下腔静脉吻合、肝下下腔静脉及门静脉套管。观察并记录各组大鼠供体手术、修肝套管、无肝期、受体手术及肝移植手术总时间。术后检测1,7,30天受体大鼠肝功能(血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)及总胆红素(TB))并分析生存情况。结果:无肝期结束后,供体肝脏灌注良好,受体麻醉移除后较快苏醒。供体手术、修肝套管、无肝期、受体手术及肝移植手术总时间分别为(32.5±1.58)、(7.3±1.43)、(15.6±2.62)、(53.2±3.74)、(108.5±2.34)min。大鼠术后24 h(手术成功率)为95%,1周生存率分别为90%,1月生存率分别为86.7%。大鼠术后短时间内肝功能水平增高,24 h时ALT(228.5±54.5 IU/L),AST(439.3±86.3 IU/L),TB(6.2±0.7μM),1周后逐渐恢复正常。结论:改良后的方法可以简易麻醉流程,缩短无肝期,提高手术成功率及受体的生存率。     

大鼠肝移植肝上下腔静脉不同缝合方式及手术体会

目的:探讨肝上下腔静脉不同缝合方式对大鼠原位肝移植的影响。方法:选取雄性SD大鼠60对,以SD大鼠为供体和受体,随机分成A、B两组,每组30对。两组均采用改良Kamada"二袖套法"进行大鼠原位肝移植,A组采用双定点连续缝合方式吻合肝上下腔静脉,B组采用单定点连续缝合方式吻合。比较两组肝上下腔静脉吻合时长、无肝期时长以及术后并发症及存活率等情况。结果:A组供体取肝、修肝、无肝期、肝上下腔静脉(SHVC)吻合时长分别为28.5(27.0-31.1)min、9.5(9.0-10.6)min、20.6±1.3 min、8.5(8.0-9.0)min,B组分别为30.0(27.8-32.0)min、9.0(8.6-10.0)min、18.1±1.4 min、7.0(6.5-7.4)min,其中两组的无肝期、SHVC吻合时长具有统计学差异(P<0.05)。A组SHVC吻合口出血4/30例、其他并发症6/30例,B组吻合口出血1/30例、其他并发症5/30例,术后2天以及术后2周存活率以及术后并发症方面,两组均无显著差异(P>0.05)。结论:单定点连续缝合SHVC比双定点连续缝合更有效地缩短无肝期时长,并降低开放后吻合口漏血发生几率,两种吻合方式均能成功建立稳定可行的大鼠肝移植模型。     

大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立与评价

目的：建立大鼠肝脏移植急性排斥反应模型,并对所建模型进行评价。方法：采用改良Kamada“二袖套”法,以近交系大鼠Dark Agouti（DA）为供体、Lewis（LEW）为受体（A组）建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,通过观察手术情况、生存情况及肝功能和病理学检查对此模型进行评价,同时以LEW→LEW作为对照组（B组）。结果：手术成功率为91.3%;手术时间为（90.70±5.68）min;无肝期时间（9.96±1.19）min;平均存活时间A组为（12.44±3.43）d,B组超过100d;A组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血清总胆红素术后不断升高,在第10～14d最为明显,血清白蛋白在术后第3d开始逐渐降低,在相同时相点,与B组相比差异显著;A组移植肝脏病理检查有明显的排斥反应,而B组没有。结论：DA→LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥及免疫耐受的理想动物模型。     

大鼠腹腔异位心脏移植模型建立及改进

目的:建立一种快速有效的大鼠腹腔异位心脏移植模型。方法:采用SD大鼠作为受体,Wistar大鼠作为供体,行同种异位腹腔心脏移植,术后给以CsA5 mg/kg/d灌服,心脏移植手术方法采用改良的Ono术式,观察改良的腹腔异位心脏移植各步骤所需时间、术后成功率及主要并发症发生率。结果:共建立40只大鼠异位心脏移植模型,手术成功率92.5%。动脉吻合时间12.5±2.3min,静脉吻合时间12.3±1.5 min,供心缺血时间37±3.5 min,受体血管阻断时间34.2±2.6 min,总手术时间90.2±4.8 min,出现的主要并发症为出血和供心复跳失败(各占5%、2.5%)。结论:改进的大鼠腹部异位心脏移植技术是一种简便、快速、有效、成功率高的模型制作方法。     

大鼠腹腔内工作型心脏移植模型的改进

目的构建大鼠腹腔内工作型心脏移植模型,总结影响模型成功率的因素。方法 Brown Norway到Lewis大鼠心脏移植90例,其中预实验50例,正式实验40例。采用肺动脉和左房吻合、主动脉和受体腹主动脉吻合的方法建立工作型心脏移植,统计手术存活率和死亡原因,分析确保成功率的关键因素。结果术者通过练习,手术成功率稳定77.5%,供心冷缺血时间为(34±5)min,整个手术时间为(71±11)min。HE染色显示移植后发生了免疫反应,移植模型可靠。结论决定手术成功率的影响因素众多,其中主要因素有:合格的实验动物、供体心脏的保护、快速有效的血管缝合和术后动物护理。     

小鼠左肺原位移植模型的建立

目的通过显微外科技术建立小鼠原位肺移植模型,为肺移植研究提供动物模型。方法采用C57BL/6小鼠作为供、受体,行同基因小鼠原位左肺移植,使用Cuff套管法进行气管及血管吻合。术后7、14、21、28 d取移植肺及原肺,行HE染色,评价肺移植后效果。结果学习曲线后,共30例小鼠移植,手术成功率89%,小鼠成活率100%。供体手术时间:(35.2±9.81)min,受体手术时间:(24.6±7.42)min,冷缺血时间是:(46.6±8.92)min,热缺血时间是:(17.2±3.08)min。同基因移植物大体及病理无明显改变,病理显示与原肺无差别。结论本技术能够方便快捷建立小鼠肺移植模型,成功率高,可重复性强,符合原位肺移植临床生理,是研究肺移植发病机制和治疗的良好动物模型。     

大鼠原位肝移植急性排斥反应模型的建立

目的建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。方法采用改进的Limmer和Kamada的二袖套法建立大鼠肝移植模型。将大鼠分为2组：①实验组：急性排斥反应组（Wistar→SD）;②对照组：免疫耐受组（SD→SD）。结果免疫排斥组肝存活时间（7.4±1.7）d低于对照组（18.9±7.6）d,差异有统计学意义0.05（P〈0.05）。结论Wistar→SD大鼠之间的原位肝移植模型可产生中、重度的免疫排斥反应,是一种较理想的可作为研究急性排斥反应的动物模型。     

抗眼镜蛇毒血清对中华眼镜蛇伤大鼠保护的时效性研究

目的观察中华眼镜蛇伤后不同时期应用抗蛇毒血清对机体保护作用的差异,为探索临床抗蛇毒血清使用的最佳有效时段提供依据。方法将SD大鼠随机分成6组(蛇毒组、40、60、80、100、120 min血清保护组),每组30只。动物经戊巴比妥腹麻,于单侧背部皮下及双侧小腿腓肠肌注射眼镜蛇毒以制备中华眼镜蛇毒挑战剂量(4×LD50)大鼠模型,分5个不同时段分别注射抗蛇毒血清,于注毒后连续观察3 h,统计各组平均存活时间、成活率及保护率。结果蛇毒组大鼠注入挑战剂量的眼镜蛇毒后,平均存活时间为(148.8±11.4)min,成活率仅为20%;其他血清保护组分别于注毒后40、60、80、100、120 min经腹腔注射精制抗眼镜蛇毒血清(125 u血清/mg蛇毒),40 min血清组保护率达80%;60 min血清组存活率及保护率分别达到70%、50%,平均存活时间为(172.8±7.2)min,与蛇毒组相比有明显差异(P<0.01);而801、00 min血清组保护率依次下降,分别为40%、30%,但仍较蛇毒组显著提高(P<0.01);120 min血清组存活时间及保护率与蛇毒组比较差异无显著性。结论利用中华眼镜蛇毒挑战剂量大鼠模型,通过不同时段施予同剂量抗血清,可显示出明显的机体保护时效性,该研究为探讨临床正确使用抗蛇毒血清提供了新的实验依据。     

欧前胡素通过ERK1/2信号保护心肌细胞低氧性损伤

目的:研究欧前胡素对低氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用和机制。方法:采用CO2-95%和N2-5%的细胞培养箱诱导H9c2大鼠心肌细胞建立心肌细胞低氧损伤模型,采用不同浓度的欧前胡素孵育细胞12、24 h,检测上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde MDA)的含量。采用MTT方法检测细胞的存活率,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡比例,蛋白质印迹法检测检ERK1/2蛋白的表达。结果:低氧处理H9c2心肌细胞12 h后,上清中LDH和MDA的含量分别为(523.28±90.29)U/L和(5.59±0.33)U/L,均明显高于对照组(P0.05),而SOD的含量[(12.23±1.38)U/mg]明显低于对照组(P0.05)。低、高浓度欧前胡素孵育12 h后,细胞存活率分别为(64.51±2.78)%和(73.22±3.56)%,低、高浓度欧前胡素孵育24 h后,细胞存活率分别为(80.21±4.67)%和(87.38±5.41)%,均较与模型组显著升高(P0.05)。高浓度欧前胡素孵育12 h和24 h后凋亡细胞比例分别为(39.67±4.11)%和(49.61±3.39)%,均较模型组显著降低(P0.05),10μmol/L的PD98059阻断ERK1/2信号通路后细胞存活率均较高浓度欧前胡素组显著降低,凋亡细胞比例较高浓度欧前胡素明显升高(P0.05)。高浓度欧前胡素孵育12 h和24 h后,ERK1/2蛋白相对表达量分别为(1.92±0.09)和(2.42±0.21),与模型组相比均显著增加(P0.05)。结论:欧前胡素可能通过活化ERK1/2信号通路保护低氧诱导的心肌细胞损伤。     

钴- 原卟啉对大鼠脑损伤区域血红素氧合酶-1 及损伤周边区脑含水量的影响

目的:研究探讨钴-原卟啉对大鼠脑损伤的保护作用。方法:用钴-原卟啉灌(50mg/kg)胃处理后,建立液压脑损伤模型,采用免疫组织化学SP三步法检测大鼠脑损伤区域血红素氧合酶-1(HO-1)的表达情况,用干湿重法测定损伤周边区脑含水量的变化。结果:正常组、假手术组大鼠HO-1均无表达;模型组脑损伤区域的HO-1阳性细胞数为(3.45±047);实验组12h、24h、3d和7dHO-1的阳性细胞数分别为:(10.9±1.35)、(10.62±1.88)、(12.4±1.57)和(10.99±2.42)。正常组、假手术组脑损伤周边区脑含水量分别为(78.7±0.4)%和(78.6±0.7)%;模型组脑含水量(89.3±0.3)%;实验组12h、24h、3d和7d脑含水量分别为:(83.1±0.3)%、(83.6±0.6)%、(83.9±0.4)%和(83.2±0.3)%。结论:钴-原卟啉(CoPP)能够诱导大鼠脑损伤区域HO-1的表达,减轻脑损伤周边区域的水肿程度,故钴-原卟啉对大鼠脑损伤具有保护作用。     

阿加曲班对急性脑梗死大鼠脑组织细胞凋亡的影响

目的探讨阿加曲班对急性脑梗死大鼠脑组织细胞凋亡数量、caspase-3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法建立SD大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,将大鼠分为假手术组(Sham组,不插入MCAO拴线)、脑中动脉缺血模型组(MCAO组)和阿加曲班处理组(Argatroban组)。分别选取0、6和12 h共3个时间窗的样本进行检测,TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒检测大鼠脑部神经细胞凋亡,Western blot和ELISA法检测大鼠脑部caspase-3、Bax和Bcl-2水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果TUNEL法结果显示,与MCAO组比较,Sham组和Argatroban组在0、6、12 h的细胞凋亡指数均降低[0 h(14.91±4.11)﹪比(2.13±0.58)﹪、(4.22±1.01)﹪;6 h(24.75±3.88)﹪比(3.19±0.28)﹪、(12.14±1.90)﹪;12 h(48.22±2.69)﹪比(5.75±1.21)﹪、(28.45±7.84)﹪,P均<0.05]。ELISA结果显示:与Sham组比较,MCAO组0、6、12 h的大鼠脑组织细胞caspase-3、Bax表达均升高,而Bcl-2表达在6、12 h时升高(P均<0.05);与MCAO组比较,Argatroban组的脑组织细胞caspase-3、Bax表达均降低,而Bcl-2表达在6、12 h时升高[caspase-3表达:0 h(2.32±0.12)比(1.25±0.06)、6 h(5.91±0.60)比(3.26±0.22)、12 h(7.31±0.27)比(6.42±0.18)ng/ml;Bax表达:0 h(0.82±0.08)比(0.45±0.03)、6 h(1.00±0.05)比(0.66±0.04)、12 h(1.56±0.11)比(1.09±0.07)ng/ml;Bcl-2表达:6 h(1.07±0.08)比(1.56±0.05)ng/ml,12 h(0.67±0.08)比(1.45±0.06)ng/ml,P均<0.01]。Western blot结果显示,大鼠脑组织细胞caspase-3、Bax蛋白表达趋势与ELISA结果一致;而Bcl-2蛋白表达在Argatroban组高于Sham组和MCAO组,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论阿加曲班可通过减少急性脑梗死诱导的大鼠脑组织细胞凋亡、抑制caspase-3和Bax表达,并上调Bcl-2水平而产生神经保护作用。     

腹腔内贝伐珠单抗辅助卵巢癌术后化疗对患者血清AFP、VEGF、TGF-β1、MIF的影响

目的:研究腹腔内贝伐珠单抗辅助卵巢癌术后化疗对患者血清甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF-β1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的影响。方法:选取2019年1月至2021年2月的210例卵巢癌患者。按照随机数表法分为观察组(n=101)和对照组(n=109),对照组采用化疗治疗,观察组在对照组的基础上,采用腹腔内贝伐珠单抗辅助治疗。对比两组治疗效果,血清治疗前后AFP、VEGF、TGF-β1、MIF水平变化,不良反应,随访生存分析结果。结果:治疗后,观察组总有效率显著高于对照组[89.11%(90/101)vs66.05%(72/109)](P<0.05);血清AFP、VEGF、TGF-β1、MIF水平显著低于对照组[(5.19±1.37)ng/mLvs(10.21±2.38)ng/mL,(22.61±4.32)ng/Lvs(35.76±6.34)ng/L,(168.03±20.18)ng/Lvs(203.76±28.69)ng/L,(4.81±1.01)μg/Lvs(12.79±2.50)μg/L](P<0.05);两组不良反应对比无显著差异(P>0.05);平均生存时间、2年生存率显著高于对照组[(19.23±1.36)月vs(19.23±1.36)月,79.21%(80/101)vs28.44%(31/109)](P<0.05),局部复发与转移显著低于对照组[9.90%(10/101)vs13.76%(15/109)](P<0.05)。结论:腹腔内贝伐珠单抗辅助卵巢癌术后化疗可有效改善患者的临床症状,缓解疾病发展,降低血清AFP、VEGF、TGF-β1、MIF水平,提高患者生存预后。     

小梁切除术中应用丝裂霉素C 对角膜内皮细胞的影响

目的:观察小梁切除术中应用丝裂霉素C(MMC)对角膜内皮细胞的影响。方法:收集2010年9月2011年5月在我院行小梁切除术的青光眼患者60例(78眼),随机分为术中应用丝裂霉素C的36例(46眼)患者为A组,术中不用丝裂霉素C的24例(32眼)为B组,分别观察术前、术后1个月和术后3个月两组眼压(IOP)、角膜内皮细胞的密度(CD)、平均细胞面积(AVG)及细胞面积变异系数(CV),分析其数量的改变及两组间的差异。结果:A组术前眼压为(35.4±13.7)mmHg,B组术前眼压为(32.5±13.5)mmHg差异无统计学意义(P>0.05),A组术后1个月及术后3个月眼压分别为(15.7±3.7)mmHg、(17.0±3.2)mmHg,均低于B组的(19.4±3.7)mmHg、(20.2±2.1)mmHg,差异有统计学意义(P<0.05)。A组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为(2475±484)个/mm2、(2199±373)个/mm2、(2164±332)个/mm2;平均细胞面积分别为(431.4±67.6)μm2、(480.6±66.8)μm2、(463.8±46.2)μm2;细胞面积变异系数分别为(31.1±7.4)%、(34.4±6.3)%、(31.2±7.5)%;术后1个月及术后3个月各参数与术前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为(2342±94)个/mm2、(2185±215)个/mm2、(2074±218)个/mm2;平均细胞面积分别为(453.9±94.8)μm2、(516.3±100.8)μm2、(499.81±106.4)μm2;细胞面积变异系数分别为(30.2±3.0)%、(32.7±2.9)%、(31.4±4.3)%;除术后3个月角膜内皮细胞与术前比较有意义(P<0.05)外,余参数术后1个月及术后3个月与术前比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后1个月A组的角膜内皮细胞丢失率为10.4%高于B组的6.1%,差异有统计学意义(P<0.05);术后3个月A组的角膜内皮细胞丢失率为11.1%高于B组的10.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:小梁切除术中用丝裂霉素C的降压效果比不用丝裂霉素C的效果好,但短期内前者角膜内皮细胞的丢失率高于后者。     

Myocardial NOS activity and connexin-43 expression in untreated and omega-3 fatty acids-treated spontaneously hypertensive and hereditary hypertriglyceridemic rats

The purpose of this study is to investigate myocardial nitric oxide synthase (NOS) activity and connexin-43 (Cx43) expression in young and old spontaneously hypertensive rats (SHR), adult hereditary hypertriglyceridemic (HTG) rats, and age-matched healthy rats without and with omega-3 PUFA supplementation for 2 months. Results showed that comparing to healthy rats the myocardial NOS activity was significantly increased in young SHR (8.2 ± 1.16 vs. 1.37 ± 0.67 pmol/min/mg) as well as old SHR (3.21 ± 0.75 vs. 2.22 ± 0.56 pmol/min/mg) and to much lesser extent in HTG rats, i.e., 1.87 ± 0.42 vs. 1.34 ± 0.1 pmol/min/mg. In parallel, there was a significant decline of total and phosphorylated forms of Cx43 in both groups of SHR while not in HTG rat hearts in which phosphorylated form of Cx43 was increased. Elevated NOS activity was suppressed (P < 0.05) in young and old SHR supplemented with omega-3 PUFA and it was associated with up-regulation of Cx43. In contrast to SHR, elevation of NOS activity in HTG rat hearts was not affected by treatment with omega-3 PUFA. However, increase of phosphorylated form of Cx43 was suppressed. In conclusion, there is an inverse relationship between myocardial NOS activity and Cx43 expression in SHR while not HTG rat hearts and omega-3 PUFA modulate both NOS activity and Cx43 expression. Whether over-expression of inducible NOS might account for down-regulation of myocardial Cx43 and whether its up-regulation is associated with an increase of endothelial NOS should be explored in further study.     

老年Stanford A 型主动脉夹层外科治疗*

目的:总结老年Stanford A型主动脉夹层外科治疗经验,探讨手术方式的选择,以提高手术疗效。方法:2008年9月至2011年5月对31例老年Stanford A型主动脉夹层行手术治疗,根据夹层破口位置、累及范围、主动脉根部病变情况采取相应术式,W-heat手术2例,David+全弓置换+支架象鼻术3例,Bentall+全弓置换+支架象鼻术9例,改良Wheat+全弓置换+支架象鼻术1例,升主动脉+全弓置换+支架象鼻术16例。同时行冠状动脉旁路移植术4例,心包剥脱术1例。结果:全组体外循环(221±43)min,平均心肌阻断(132±41)min,深低温停循环(47±12)min。术后并发症12例(38.7%),其中2例死亡,8例治愈(66.7%),2例术后出现肾功能衰竭家属放弃治疗。全组病人出院前复查主动脉CTA,见升主动脉、弓部人工血管血流通畅,支架位置正常,无明显移位。支架远端降主动脉假腔闭合率87.1%。随访2~35个月,术后近期死亡1例(3.2%),无再次手术者。结论:对老年StanfordA型主动脉夹层这一高危人群,术中根据其病变部位施行最佳的外科手术方式,可明显降低死亡率,改善患者预后。     

供体骨髓干细胞输注联合肝移植治疗终末期肝病的近期效果观察

目的评价供体骨髓干细胞输注联合肝移植治疗终末期肝病的近期效果。方法2008年3月至2009年1月本中心30例肝移植受者分为两组,实验组8例,行同期供体骨髓干细胞联合肝脏移植;对照组22例,仅行肝脏移植,不行骨髓干细胞输注。观察两组受者术后免疫抑制剂（甲基强的松龙、他克莫司）用量、肝功能（谷氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶等）变化、急性排斥反应和感染并发症发生情况,以及术后住院时间和费用。采用,检验、方差分析及确切概率法进行统计学分析。结果实验组术后甲基强的松龙总用量和出院时每日他克莫司用量显著低于对照组[甲基强的松龙分别为（1314±105）mg,（1884±256）mg,t=6．060,P=0．000;他克莫司分别为（3．73±0．35）mg／d,（4．93±0．62）mg／d,,=5．147,P=0．000]。术后第1天实验组血清谷氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶均显著低于对照组[谷氨酸转氨酶分别为（875．2±325．5）IU／L,（1350．4±482．7）IU／L,t=2．543,P=0．016,天冬氨酸转氨酶分别为（646．2±184．9）IU／L,（1021．8±325．4）IU／L,t=3．067,P=0．005]。术后第3天也低于对照组[谷氨酸转氨酶分别为（252．9±35．8）IU／L,（343．5±47．8）IU／L,f=4．866,P=0．000,天冬氨酸转氨酶分别为（227．8±38．0）IU／L,（310．8±61．7）IU／L,t=3．545,P=0．001]。结论同期供体骨髓干细胞联合肝脏移植可以降低术后免疫抑制剂用量,减轻术后早期肝脏损伤,不增加治疗风险,是一种安全有效的治疗方法。