survivin在非小细胞肺癌中的表达及其与bc1-2、p63表达的关系

目的:探讨survivin在非小细胞肺癌组织(non small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,及其与bc 1 2、p63蛋白表达的相关性。方法:应用二步法免疫组织化法,检测survivin、bc 1-2、p63蛋白在60例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达。结果:肺癌组织中的survivin蛋白阳性率(56．67%)明显高于正常肺组织15%),有显著性差异;(p＜0．05)Ⅲ期surviving蛋白阳性表达率72．73%(16/22)明显高于Ⅰ Ⅱ期survivin47．37%(18/38)。有显著差异;(p＜0．05)survivin蛋白表达与患者年龄、病理类型、组织分化程度,淋巴结转移情况无关(P＞0．05)NSCLC组织bc 1-2蛋白表达阳性、阴性组中,survivin蛋白阳性表达率分别为66．67% (18/27)和48．48%(16/33),两者比较,差异有显著性(P＜0．05);p63蛋白表达阳性、阴性组中,survivin蛋白阳性表达率分别为53．33%(16/30)和60%(18/30),两者比较,差异有显著性(P＜0．05)survivin,蛋白与bc 1-2蛋白的表达呈正相关。survivin蛋白与p63蛋白的表达呈正相关。结论:survivin在NSCLC组织中表达上调,通过抑制细胞凋亡,在NSCLC的发生和发展中起到重要作用。survivin,bc 1-2与p63它们分别在肺癌发生发展过程中不同途径上抑制肺癌细胞的凋亡,对肺癌早期诊断有一定的意义。对3种蛋白进行联合检测,更有利于肺癌的早期诊断和判断肺癌的分化程度、临床分期、淋巴结是否转移及病人的预后。survivin与bc1-2及survivin与p63可能起协同作用,并可能会成为NSCLC基因治疗的新靶点。     

survivin和caspase-3在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的：研究survivin和caspase-3蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况,分析二者的作用机制及相关性。方法：采用免疫组化KIT染色法,检测survivin和caspase-3在60例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达情况。结果：肺癌组织中的survivin阳性表达率（61．67％）明显高于正常肺组织（5％）;Ⅲ期的survivin阳性表达率（76．92％）明显高于Ⅰ＋Ⅱ期（50％）;均有显著性差异（P〈0．05）;而与年龄,病理类型,组织分化程度,淋巴结转移情况无关。肺癌组织中caspase-3阳性表达率（43．33％）明显低于正常组织（85％）;高＋中分化组的caspase-3阳性表达率（58．06％）明显高于低分化的（27．59％）;鳞癌组织中的caspase-3阳性表达率（56．25％）高于腺癌组织（28．57％）;均有显著性差异（P〈0．05）;而与年龄,TNM分期,淋巴结转移情况无关。结论：survivin在非小细胞肺癌中表达上调,而caspase-3却下降,且二者的表达呈负相关,提示survivin可能参与肺癌的发生发展,且抑制caspase-3的激活而抑制凋亡;caspase-3的失活可能导致肿瘤细胞的增殖。     

Survivin在肺鳞癌、腺癌中的表达及其与Ki67和p53表达的关系

目的探讨survivin在肺鳞癌、腺癌中的表达和意义及其与Ki67、p53表达的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测survivin、Ki67和p53在112例肺鳞癌、腺癌中的表达情况。结果Survivin、Ki67和p53的阳性率分别为59．8％（67／112）、46．4％（52／112）和51．8％（58／112）,survivin的表达与肺癌的低分化（P=0．009）和淋巴结转移正相关（P=0．014）;Ki67和p53的表达分别与肺鳞癌、腺癌的低分化程度负相关（P〈0．05）。Survivin与Ki67和p53在肺鳞癌、腺癌中的表达分别正相关（P〈0．01）。结论Survivin的表达与肺鳞癌、腺癌的低分化和淋巴结转移正相关;Ki67和p53的表达分别与肺鳞癌和腺癌的低分化程度相关,survivin、Ki67和p53三者的协同表达可能是促进肺癌的恶性进展的重要因素。     

子宫内膜癌组织中survivin蛋白和VEGF表达的意义及相关性分析

目的：探讨子宫内膜癌组织中survivin（存活素）蛋白和VEGF（血管内皮生长因子）表达及其意义。方法：运用免疫组织化学S-P法,检测20例正常子宫内膜组织、20例不典型增生子宫内膜和63例子宫内膜癌组织中survivin蛋白和VEGF的表达,并结合临床病理特点进行分析。结果：survivin蛋白、VEGF的阳性表达率在正常子宫内膜组织、不典型增生子宫内膜、子宫内膜癌中逐渐升高,三者之间有显著性差异（x2=-24．97,P〈0．01;x2=18．65,P〈0．01）。在子宫内膜癌中,survivin蛋白的表达与组织学分级和手术-病理分期密切相关（X2=9．20,P〈0．05;X2=20．60,P〈0．01）;VEGF的表达与组织学分级无关（X2=4．93,P〉0．05）,而与手术-病理分期分期密切相关（x2=-38．10,P〈0．01）。survivin表达与VEGF表达呈显著正相关（r=0．257;p〈0．05）。结论：survivin、VEGF分别通过抑制细胞凋亡、诱导新生血管的形成而影响子宫内膜癌的发生和发展,其在子宫内膜癌的发生中可能存在协同作用。     

P 7IkZP i、EF Z- 1在胃癌中的表达及其相关性研究

目的：研究p27^kip1蛋白、转录因子E2F-1在胃癌中的表达及其与胃癌病理参数乏问的关系,并探讨二者相关性。方法：应用免疫组化S-P法,对90例胃癌患者的癌组织、34例癌旁正常胃黏膜进行检测,分析p27^kip1、E2F-1蛋白表达及其与胃癌病理参数之间的关系。结果：p27^kip1在正常胃组织、胃癌组织中的阳性率分别为55．9％（19／34）、31．1％（28／90）,二者差异有统计学意义（p〈0．05）。其阳性表达率与胃癌组织的浸润深度（p〈0．05）、组织学分型（p〈0．01）、分化程度（p〈0．01）、淋巴结转移（p〈0．05）均相关;E2F-1在正常胃组织、胃癌组织中的阳性率分别为17．6％（6／34）、36．7％（33／90）,二者差异有统计学意义（p〈0．05）,其阳性表达率与胃癌的组织学分型相关。而与胃癌的浸润深度（p〉0．05）、分化程度（p〉0．05）、淋巴结转移无关（p〉0．05）。结论：p27^kip1在胃癌组织中的表达明显低于在正常组织,相反,E2F-1蛋白在胃癌组织中的表达却明显增强;p27^kip1蛋白表达与胃癌的浸润深度、组织学分型、分化程度、淋巴结转移等病理参数相关;E2F-1表达与胃癌的组织学分型相关;p27^kip1、E2F-1在胃癌中的表迭呈负相关。     

非小细胞肺癌中基质金属蛋白酶13和其抑制剂1表达及与预后的关系研究

目的研究非小细胞肺癌MMP-13、TIMP-1蛋白表达,探讨其与淋巴结转移及预后的关系。方法应用免疫组织化学检测99例非小细胞肺癌组织以及32例正常肺组织中MMP-13、TIMP-1蛋白的表达。结果①MMP-13、TIMP-1蛋白在非小细胞肺癌组织的阳性率分别为51．5％（51／99）和59．6％（59／99）,较正常肺组织中阳性率0%（0／32）和15．6％（5／32）显著增高（P〈0．05）。MMP-13、TIMP-1蛋白表达在不同性别、年龄、组织学类型之间无显著性差异,而与淋巴结转移以及临床分期显著相关（P〈0．01）。MMP-13蛋白表达与临床分期以及淋巴结转移呈正相关（P〈0．01）;TIMP-1蛋白表达与临床分期以及淋巴结转移呈负相关（P〈0．01）。②Kaplan-Meier法显示MMP-13、TIMP-1蛋白与非小细胞肺癌预后相关,Cox多因素模型分析显示MMP-13蛋白表达可以作为非小细胞肺癌独立的预后因子,其过表达提示预后不良;而TIMP-1不能作为独立的预后因子。结论MMP-13是影响预后的独立指标;TIMP-1是影响预后有意义的指标。     

Livin蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的：研究livin蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与非小细胞肺癌的生物学特性及临床预后的关系。方法：通过免疫组化的方法检测和比较88例非小细胞肺癌组织和20例癌旁正常肺组织中livin蛋白的表达,并分析其与非小细胞肺癌的临床病理特征和预后的相关性。结果：非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织中livin蛋白的阳性表达率分别为54．55％和5％,差异有显著统计学差异（P〈0．05）。非小细胞肺癌组织中livin蛋白的表达水平与淋巴结转移、TNM分期显著相关（P〈O．05）,但与患者的性别、年龄、分化程度及病理学类型无关（P〉0．05）。Livin高表达的非小细胞肺癌患者生存时间显著短于livin低表达的患者（P〈0．05）。结论：Livin蛋白在非小细胞肺癌的发生及发展中起重要作用并与患者的预后相关,可能作为非小细胞肺癌新的防治靶点。     

Caspase-3在肝癌组织中的表达及其与HBV感染的关系

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3）和生存素（survivin）在原发性肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其与乙肝病毒（HBV）感染的关系。方法用免疫组化SP法检测21例肝癌组织和10例癌旁组织Caspase-3和survivin的表达．并分析两者表达与HBV感染的关系。结果在肝癌和癌旁组织Caspase-3表达的阳性率分别为33．33％和66．67％（P〈0．05）．survivin在肝癌和癌旁组织表达的阳性率分别为85．71％和0（P〈0．01）。Caspase-3在HBsAg阳性和阴性组表达的阳性率分别为27．78％和66．67％（P〈0．05）;survivin在HBsAg阳性和阴性表达的阳性率分别为88．89％和100％（P〉0．05）。Caspase-3在高、中、低分化组表达的阳性率分别为66．67％、31．25％、33．33％．高分化组与中、低分化组比较差异有显著性（P〈O．05）;survivin在高、中、低分化组表达的阳性率分别为50％、87．5％、100％,高分化组与中、低分化组比较差异有显著性（P〈0．05）。Caspase-3和survivin在HCC的表达呈显著负相关。结论HBV感染能使肝癌组织Caspase-3的表达降低,与survivin共同抑制肝细胞的凋亡,三者在HCC的发生及发展过程中起一定作用。     

PTEN和MDM2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：研究PTEN和MDM2在非小细胞肺癌（NSCLC）发生发展中的临床意义。方法：采用免疫组化SP法检测56例非小细胞肺癌组织及20例正常肺组织中PTEN和MDM2蛋白的表达。结果：56例肺癌组织中PTEN表达率为48.21%（27/56）,20例正常肺组织中PTEN表达率为95%（19/20）,二者有统计学意义（p〈0.05）。PTEN表达率与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关（p〈0.05）。56例肺癌组织中MDM2表达率为53.57%（30/56）,20例正常肺组织MDM2表达率为10%（2/20）,二者有统计学意义（p〈0.05）,MDM2表达率与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关（p〈0.05）。在NSCLC中,PTEN和MDM2的表达呈负相关（p〈0.05）。结论：PTEN和MDM2的异常表达在非小细胞肺癌的发生发展过程中起着重要的作用。     

PTTG和VEGF在NSCLC中的表达及相关性研究

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中PTTG和VEGF蛋白的表达相关性及其与肺癌发展之间的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测57例NSCLC组织及6例良性病变肺组织中PTTG和VEGF蛋白的表达。结果: NSCLC组织PTTG和VEGF蛋白的阳性表达率分别为82．5%和77．2%,在良性病变肺组织中均未检测到两者的表达。上述两种组织之间的PTTG和VEGF蛋白表达均有显著性差异(P＜0．05)。PTTG和VEGF蛋白表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关(P＜0．05),与患者的性别、年龄、肿瘤大小、病灶部位、组织学类型及分化程度无关(P＞0．05)。癌组织中PTTG和VEGF蛋白的表达呈显著正相关(r=0．385,P=0．003)。结论:PTTG和VEGF在非小细胞肺癌中高表达,两基因表达成显著正相关,与非小细胞肺癌的发展及转移关系密切。     

高山被孢霉ATCC16266△^6—脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的表达

△^6－脂肪酸脱氢酶基因是形成γ－亚麻酸的关键酶。从含有高山被孢霉△^6－脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pT-MACL6中,酶切出1.4kb的目的片段,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMAD6,用醋酸昔方法转化到酿洒酵母的缺陷型菌株INCSc1中,在SC－Ura合成培养基中,选择得到酿酒酵母工程株YMAD6。在合适的培养基及培养条件下,加入外源底物亚油酸,经半乳糖诱导后,收集菌体。通过GC－MS对酵母工程株进行脂肪酸色谱分析,结果表明,产生了31.6％的γ－亚麻酸,边是迄今为止,国内外△^6－脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中表达量最高的报道。     

HIV—1辅受体配体的融合表达载体的构建及表达

应用PCR扩增RANTES－KDEL基因,鉴定后与真核表达载体pCMV-S/K连接,构建成HIV－1辅受体的配体,趋化因子RANTES和SDF－1的融合表达载体pCMV-R-K-S-K,酶切鉴定和测序证明成功构建了pCMV-R-K-S-K融合表达载体。脂质体介导pCMV-R-K-S-K转染HeLa细胞,间接免疫荧光证实了RANTES和SDF－1可高效表达于HeLa细胞。细胞表明构建的pCMV-R-K-S-K融合表达载体能在HeLa细胞中高效表达,可用于下一步的HIV－1感染实验。     

外源基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

随着杆状病毒载体和筛选方法的不断改进,通过Bac-to-Bac方法可以使杆状病毒最大重组率达到100%,缩短了构建重组载体的时间,极大提高了工作效率。另外,研究者开发了一些新的宿主域扩大的昆虫杆状病毒载体,能够在家蚕或蛹内进行高水平表达重组蛋白。昆虫杆状病毒表达系统具有完备的翻译后加工修饰功能和高效表达外源蛋白的能力等特点,是一种非常理想的真核表达系统。利用该表达系统现已成功表达了约千种外源蛋白。以重组杆状病毒为载体的昆虫表达系统、外源基因在该表达系统中的表达情况及在农业领域中的应用进行了介绍。     

巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略

毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达。该文综述了其自身的优点,表达载体和宿主菌的特点,以及高水平表达外源基因的策略。     

Stathmin SiRNA表达载体抑制stathmin的表达

目的:构建stathmin特异性SiRNA质粒表达载体,探讨其对鼻咽癌5-8F细胞stathmin的沉默作用.方法:合成用于stathmin基因特异性干扰表达的DNA片段,经退火形成双链DNA片段,片段克隆到质粒表达载体pGenesil 1.1上.载体导入JM109菌株进行筛选与扩增,采用酶切和测序对克隆表达载体进行鉴定.应用脂质体将鉴定后的重组表达质粒载体转入鼻咽癌5 -8F细胞,RT-PCR与Western Blot分析stathmin基因表达.结果:经酶切和测序鉴定,插入SiRNA质粒表达载体的stathmin特异性碱基序列和方向正确.重组质粒表达载体转染鼻咽癌细胞后,细胞转染效率达78.8 ±6.8％,stathmin基因在鼻咽癌中的表达明显下降.结论:构建的stathmin基因SiRNA质粒表达载体能抑制stathmin的表达.     

重组人肝素酶在毕赤酵母中的表达

目的:建立肝素酶表达系统,大量制备人肝素酶,用于肝素酶的深入研究,及其抑制剂筛选模型的建立。方法:采用RT-PCR方法从肝癌细胞HepG2中克隆肝素酶全长cDNA,转入毕赤酵母表达体系,经甲醇诱导表达。结果:四唑蓝活性检测结果表明,表达产物具有肝素酶活性;Western印迹证实表达产物可被肝素酶抗体识别。结论:表达产物中含具有肝素酶活性的重组人肝素酶。     

HIV-1辅受体配体的融合表达载体的构建及表达

应用PCR扩增RANTES-KDEL基因,鉴定后与真核表达载体pCMV-S/K连接,构建成HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的融合表达载体pCMV-R-K-S-K,酶切鉴定和测序证明成功构建了pCMV-R-K-S-K融合表达载体.脂质体介导pCMV-R-K-S-K转染HeLa细胞,间接免疫荧光证实RANTES和SDF-1可高效表达于HeLa细胞.结果表明构建的pCMV-R-K-S-K融合表达载体能在HeLa细胞中高效表达,可用于下一步的HIV-1感染实验.