日本沼虾精子的形态和超微结构研究

应用电子显微镜技术结合细胞化学方法对日本沼虾精子进行子形态和超微结构研究。结果显示,日本沼虾精子琪似外翻的伞状,无鞭毛,不运动的精子主要由前端棘突,中间帽状体和后主体部分组成,精子的核属非浓缩型,内布许多絮状物质,外无核膜包被,呈Ｆｅｕｌｇｅｎ阳性反应,位于后主体部内;中间帽状体的细胞质内含有一对中心粒和１５－２０根放射状排列的纤丝,纤丝在帽状体凸面中央汇聚并延伸成精子的棘突,棘突和放射状纤丝皆具     

秀丽白虾精子的形态及超微结构

运用电子显微镜技术和细胞化学方法对秀丽虾精子进行了形态和超微结构研究,结是要发现,秀丽白虾精荚中有形似外翻状的成熟精子,精子主体部凸面伸长约6－7um的单个棘突,主体部基部为非电子致密的均匀核,核膜呈半解体状态,帽状体中有约20根放射状纤丝和大量内含电子致密基质的膜泡,棘突和帽状构成顶体复合体,成熟精子中未发现中心体。     

粗糙沼虾精子的超微结构研究

利用电镜及细胞化学方法,研究了粗糙沼虾（Ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍ ａｓｐｅｒｕｌｕｍ）精子的形态和超微结构。结果表明：精子无鞭毛、不运动,由后主体部、中间帽状体和前端棘突组成。主体部呈浅状,内有非浓缩的核,核内含有许多泡囊造近帽状体的核部,分布着许多膜本,膜层体与帽状体紧密相连。棘突具有间隔约３１ｎｍ的珏纹。环纹由直径为４～６ｎｍ的丝状体组成并与环纹相垂直。精子无明显的顶体区。     

长毛对虾精子发生的研究：Ⅰ.精子的形态结构

利用电子显微镜技术结合细胞化学染色方法,研究长毛对虾精子形态结构,结果显示:长毛对虾精子由圆球状球体部和钉子状棘突部组成;精子全长约7μm;棘突及与之相联的球体表面平滑无突起,而与棘突相对的球体底面有指状突起。透射和冷冻蚀刻电镜显示:长毛对虾精子棘突包括顶体锥和顶体帽两部分;顶体锥向外突出形成精子的棘突,顶体帽覆盖在球体部的胞质及核区上方。成熟精子胞质极度退化,仅靠顶体帽边缘可见1—2个线粒体。球体的中央区域为近球形,呈Feul-gen阳性反应,为精子的核区。其结构松散,电子密度低,属非浓缩型,内布许多絮状物质,外由许多长短不一的膜性结构不规则排列成不连续的核膜结构。研究结果认为:长毛对虾精子属不动无鞭毛精子类型,其棘突部并非鞭毛结构而是顶体的位置。     

罗氏沼虾精子棘状部的结构生化组成和功能

作者探讨了罗氏沼虾精子棘状部的组成,生化成分和受精时所起的作用。棘状部主要由具周期性横纹的纤丝组成,在近尖端横切面的中央有絮状颗粒存在。棘状部Ｆｅｕｌｇｅｎ反应呈阴性,不含核物质,而ＨｇＢｐＢ反应呈强阳性,蛋白质含量很高。     

日本沼虾雄性生殖系统的研究：Ⅲ.输精管内精荚的结构与形成

于光镜和电镜下研究日本沼虾输精管内精荚的结构与形成。结果显示：粗荚呈索状,由精子群、精荚基质、粘液团和荚壁组成;精荚基质与粘液团内均含有交织的纤丝,其中散布着絮状泡和同心圆形泡,精荚壁呈“Ｃ”型,单层,由致密纤丝、絮状泡和沟形的网状结构组成,包裹精子群和粘液团;前、中、后输精管的上皮细胞均具合成、分泌精荚形成物质的功能。     

日本沼虾生精细胞核的形态变化及其在真虾部Caridea生殖进化中的地位

应用透射电镜（ＴＥＭ）技术研究了日本沼虾精子发生过程中细胞核的形态变异。生精细胞的核经历了由圆形或椭圆形变为浅碟状的一系列变化过程;其核膜由原来的完整变为不完整,成熟精子仅在精子尾部具有核膜;核内染色质由松散逐渐聚合分化,在成熟精子核内形成了泡状和丝状两种形态的核物质。精子具备泡状和丝状两种核物质是日本沼虾的重要特征之一。精核的形态可以作为十足类甲壳动物的重要分类依据;研究精子发生过程中细胞核的形     

秀丽白虾精子发生的研究

利用透射电镜观察秀丽白虾的精子发生，并根据染色质及细胞形态的变化将精子发生的全过程划分为五个时期，即精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子。在精子发生过程中，细胞器经历了由少到多，到最后解体特化的过程。晚期精细胞中出现单个中心粒，但在成熟精子中消失。棘突由片层复合体衍生物汇集并延伸而成。染色质在精原细胞中为部分异固缩，在精母细胞中高度凝聚为染色体，在精细胞及精子中为均匀非致密态。减数分裂同步率较高。成熟精子中帽状体和棘突构成顶体复合体。     

秀丽白虾精子发生的研究

利用透射电镜观察秀丽白虾的精子发生,并根据染色质及细胞形态的变化将精子发生的全过程划分为五个时期,即精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子。在精子发生过程中,细胞器经历了由少到多,到最后解体特化的过程。晚期精细胞中出现单个中心粒,但在成熟精子中消失。棘突由片层复合体衍生物汇集并延伸而成。染色质在精原细胞中为部分异固缩,在精母细胞中高度凝聚为染色体,在精细胞及精子中为均匀非致密态。减数分裂同步率较高。成熟精子中帽状体和棘突构成顶体复合体。     

日本沼虾肌抑素前体肽在枯草芽孢杆菌的表达及其对生长效果的影响

为研究日本沼虾肌抑素前体肽(MSTNpp)对生长的作用机理, 实验采用枯草芽孢杆菌表达日本沼虾肌抑素前体肽蛋白, 按照枯草芽孢杆菌的偏爱密码子, 对MSTNpp基因序列进行优化合成BsMSTNpp, 构建得到重组表达质粒pGJ105-BsMSTNpp。经枯草芽孢杆菌转化、发酵及Western blot鉴定, 结果显示重组MSTNpp蛋白分子量约为36.0 kD。重组MSTNpp表达量随发酵时间延长逐渐升高, 100h表达量相对于24h提高了10倍。为验证表达产物的生物活性, 选择平均体重为(1.52±0.11) g, 平均体长为(4.55±0.21) cm的健康日本沼虾, 随机分为4组, 每组3个重复, 每个重复200尾, 在日本沼虾基础饲料中添加0.5‰和1‰重组枯草芽孢杆菌菌剂(109 CFU/g), 作为实验组1和实验组2; 投喂日本沼虾基础饲料, 作为对照组1, 在日本沼虾基础饲料中添加1‰空白枯草芽孢杆菌, 作为对照组2; 试验周期30d。结果显示, 实验组1、实验组2日本沼虾特定生长率显著高于对照组1(P<0.05), 和对照组2间不存在显著性差异; 实验组1、实验组2的肌酸激酶(Creatine kinase, CK)活性显著高于对照组(P<0.05)。结果表明, 重组表达MSTNpp枯草芽孢杆菌能有效提高日本沼虾CK酶活性, 推测MSTNpp通过促进肌细胞增殖和分化提高肌肉组织生长, 从而进一步影响日本沼虾生长速度。实验结果可以为进一步研究肌抑素前体肽应用于日本沼虾养殖提供技术支撑。     

三种沼虾的COI基因序列变异及其分类地位探讨(英文)

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和日本沼虾(M.nipponense)经在我国得到广泛的养殖,产生巨大的经济效益.祁连沼虾(M. qilianensis)是自然分布在我国甘肃省的土著虾种,因其外部形态符合沼虾属的特征,而被前人归入沼虾属.为了从分子生物学的角度理解罗氏沼虾、日本沼虾与祁连沼虾的遗传差异,为合理开发和利用沼虾资源提供理论基础,作者对这3种沼虾的线粒体COI基因序列进行研究.从甘肃、浙江等地分别采集这三种沼虾的样本各10尾,共30尾,其中祁连沼虾是野生样本,而罗氏沼虾和日本沼虾都是养殖样本.通过PCR方法扩增线粒体COI基因,并测序.通过比对,获得一致序列649 bp.在30个样本中共检测到169个变异位点,占总变异的26.04%;共检测到7种单倍型.3种沼虾的核苷酸多态性分别为:罗氏沼虾0.411%、日本沼虾0.092%、祁连沼虾0.031%.野生的祁连沼虾遗传多样性远远低于养殖的罗氏沼虾和日本沼虾.三种沼虾单倍型之间的Kimura双参数遗传距离在19.87%～23.84%,三者之间的遗传距离较大,提示三者均为有效种.为进一步确定这三种沼虾在长臂虾科的分类地位, 我们从NCBI数据库中下载了长臂虾科的其它种类的COI序列进行系统发生分析.用NJ法构建的分子系统树显示:日本沼虾和罗氏沼虾与沼虾属的其它种类聚成一枝,而祁连沼虾与同亚科的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)和长角长臂虾(Palaemon debilis)较沼虾属另10种虾的遗传距离近,即祁连沼虾与白虾属及长臂虾属聚成另一枝.凶此,COI序列的结果不支持祁连沼虾归入沼虾属.但其分类地位应该综合多方面证据重新进行分析确定.     

日本沼虾三群体线粒体16S rRNA基因片段序列的差异与系统进化

通过对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)3个群体线粒体DNA 16S rRNA基因片段进行扩增和测定,得到长度为495bp的片段,其碱基A、T、G和C的平均含量分别为28.6%、36.1%、22.7%和12.5%,AT含量明显高于GC含量。通过对日本沼虾16SrRNA基因片段遗传特征的研究发现其种内变异很小,在3个群体中只有5个位点发生转换。另外,利用其454bp的同源序列,以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为外群探讨了沼虾属日本沼虾、罗氏沼虾(M.rosenbergii)等8种沼虾的系统进化关系。用MEGA3.1软件中的NJ法构建的分子进化树,日本沼虾3个群体先聚在一起后与海南沼虾聚在一起;另外,罗氏沼虾与马氏沼虾、短腕沼虾与贪食沼虾亲缘关系较近先聚在一起,然后再与大臂沼虾和等齿沼虾聚在一起,最后才与外群中国明对虾聚在一起。     

日本沼虾输精管的结构及其在精荚形成中作用的研究

应用光镜和透射电镜技术研究了日本沼虾输精管的结构及其在精荚形成中的作用。结果表明,日本沼虾输精管从形态结构上可分为近端输精管、卷曲输精管、远端输精管和膨大的远端输精管四部分。各部分的管壁皆由分泌上皮、基膜、肌肉层和结缔组织构成,其中分泌上皮包括高度明显不同的低柱状上皮和高拄状上皮两部分。输精管各部分管腔内含有处于不同形成阶段的精荚。进入近端输精管内的精子被支撑在一种嗜酸性基质中。近端输精管的分泌物主要帮助形成精子团,同时形成精荚壁的极小部分。卷曲和远端输精管分泌形成精荚壁的绝大部分,其分泌物由细胞顶端通过外排作用和顶泌机制分泌产生。膨大的远端输精管具有贮存精荚的作用,其分泌上皮也通过外排作用和顶泌机制产生分泌物包裹在已基本形成的精荚外侧,管壁肌肉层在雌雄交配时将管腔内的精荚切割成适宜长度并排出体外。       

三种沼虾的COI基因序列变异及其分类地位探讨

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和日本沼虾(M. nipponense)已经在我国得到广泛的养殖,产生巨大的经济效益。祁连沼虾（M. qilianensis）是自然分布在我国甘肃省的土著虾种,因其外部形态符合沼虾属的特征,而被前人归入沼虾属。为了从分子生物学的角度理解罗氏沼虾、日本沼虾与祁连沼虾的遗传差异,为合理开发和利用沼虾资源提供理论基础,作者对这3种沼虾的线粒体COI基因序列进行研究。从甘肃、浙江等地分别采集这三种沼虾的样本各10尾,共30尾,其中祁连沼虾是野生样本,而罗氏沼虾和日本沼虾都是养殖样本。通过PCR方法扩增线粒体COI基因,并测序。通过比对,获得一致序列649 bp。在30个样本中共检测到169个变异位点,占总变异的26.04%;共检测到7种单倍型。 3种沼虾的核苷酸多态性分别为：罗氏沼虾0.411%、日本沼虾0.092%、祁连沼虾0.031%。野生的祁连沼虾遗传多样性远远低于养殖的罗氏沼虾和日本沼虾。三种沼虾单倍型之间的Kimura双参数遗传距离在19.87%~23.84%,三者之间的遗传距离较大,提示三者均为有效种。为进一步确定这三种沼虾在长臂虾科的分类地位, 我们从NCBI数据库中下载了长臂虾科的其它种类的COI序列进行系统发生分析。用NJ法构建的分子系统树显示：日本沼虾和罗氏沼虾与沼虾属的其它种类聚成一枝,而祁连沼虾与同亚科的脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）和长角长臂虾（Palaemon debilis）较沼虾属另10种虾的遗传距离近,即祁连沼虾与白虾属及长臂虾属聚成另一枝。因此,COI序列的结果不支持祁连沼虾归入沼虾属。但其分类地位应该综合多方面证据重新进行分析确定。     

不同途径感染白斑综合征病毒 (WSSV) 对日本沼虾的致病性

日本沼虾肉质鲜美、经济价值高,但其对白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的易感性尚不明确。采用流行病学调查、感染试验和荧光定量PCR(qPCR)等方法,研究了日本沼虾Macrobrachium nipponense对WSSV的易感性、感染发病率以及WSSV在其体内的增殖情况。结果表明:日本沼虾是WSSV的自然宿主,上海市附近省份地区120个样本的自然携带率为8.33%。日本沼虾可以通过注射、摄食、浸泡途径感染WSSV,10 d内累计感染率均为100%,累计死亡率分别为100%、75%和0%。其中注射途径感染日本沼虾,感染后5 d肌肉病毒含量达到感染后1 d的1 000倍,8 d死亡率达100%。用注射WSSV感染日本沼虾死亡率来测量病毒致死日本沼虾的半数致死剂量(LD_(50)),2.71×10~5病毒粒子/μL能使日本沼虾死亡率达到50%以上。在养殖生产中,日本沼虾可以通过摄食感染WSSV的病虾或死虾而感染WSSV,也能通过浸泡在含WSSV的水体中而感染,并因此成为一种传播媒介,从而影响了WSSV的迅速传播与致病。     

长吻鮠精巢及精子结构的研究

长吻鮠精巢高度分支呈指状。后1/3紫红色,由上皮细胞组成,既不产生精子,也不贮存精子。精巢的内部结构为叶型,由体细胞和生殖细胞构成,小叶的基本单位是小囊。精子头短而圆,主要为核占据,无顶体,核凹窝十分发达,有中心粒帽;尾极长,具侧鳍,轴丝基部有发达的囊泡状结构和线粒体。     

长江口安氏白虾与日本沼虾营养成分比较

本文对长江口安氏白虾和日本沼虾的营养成分和营养品质进行了比较.结果表明:安氏白虾的水分和粗灰分含量显著低于日本沼虾 (P<0.05),而粗脂肪和粗蛋白含量显著高于日本沼虾(P<0.05);安氏白虾和日本沼虾的氨基酸组成基本一致,均含有17种氨基酸,必需氨基酸指数(EAAI)分别为52.77和52.67,其构成比例符合联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)的标准;安氏白虾脂肪酸中二十碳五烯酸(EPA)与二十二碳六烯酸(DHA)的总量明显高于日本沼虾,分别为28.32%±0.49%和14.89%±0.63%;矿物元素中常量和微量元素含量均较丰富,微量元素之间的比例较合理,其中,安氏白虾的常量元素含量较高,而日本沼虾的微量元素含量较高,而日本沼虾的微量元素含量较高,从以上结果可见,安氏白虾和日本沼虾均含有较丰富的各种营养成分,但从EPA和DHA的含量来看,脂肪酸的营养价值安氏白虾高于日本沼虾;从Fe、Cu、Zn和Se的含量来看,微量元素营养价值日本沼虾高于安氏白虾.     

东方扁虾精子的超微结构

利用电镜研究了东方扁虾（Ｔｈｅｎｕｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）精子的形态和结构。精子由核、膜复合物区和顶体区３部分组成。核内含非浓缩的染色质、微管及细纤维丝,外被核膜;５～６条辐射臂自核部位伸出,臂内充满微管。膜复合物区位于核与顶体之间,由许多膜片层结构及其衍生的囊泡共同组成。顶体区由顶体囊和围顶体物质组成,顶体结构复杂,由顶体帽、内顶体物质和外顶体物质等构成;围顶体物质呈细颗粒状,主要分布于顶体囊     

饵料淀粉水平对饥饿后日本沼虾生长代谢的影响

研究了饵料淀粉水平对饥饿后日本沼虾生长代谢的影响,探讨营养水平对日本沼虾补偿生长的作用.结果表明,在4 d饥饿后,饵料中20%、25%的淀粉水平能使日本沼虾达到完全补偿生长,机体代谢率高于对照组,而8 d的饥饿处理,各组日本沼虾的生长代谢均低于对照组,说明饥饿时间及恢复投喂后饵料淀粉水平对日本沼虾补偿生长有一定的影响.     

日本沼虾含硒谷胱甘肽过氧化物酶全长克隆及表达分析

为探讨日本沼虾(Macrobrachium nipponense)的免疫机制及含硒谷胱甘肽过氧化物酶(Se-GPx)在甲壳动物解毒和免疫应激反应中的作用,本文采用RACE法克隆了日本沼虾Se-GPx cDNA全长,其cDNA全长为908 bp,5′-UTR的长度为91 bp,3′-UTR长为256 bp,包括1个保守的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)和1个polyA尾,开放阅读框长度为561 bp,编码由186个氨基酸组成的多肽,其中,第39个氨基酸为TGA编码的硒代半胱氨酸。同源性和相似性分析显示日本沼虾的Se-GPx在甲壳动物中与罗氏沼虾相似度最高,在脊椎动物中与GPx1和GPx2家族的相似度比较高。日本沼虾Se-GPx基因在血细胞、肝胰腺、肌肉、卵巢、表皮以及大颚器官中都有表达,尤其在血细胞中表达量相对较高。用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后3h和6h,血细胞Se-GPx基因表达量显著升高。结果表明,日本沼虾Se-GPx作为一种重要的抗氧化酶,在维护组织正常功能方面及免疫应激反应中发挥重要作用。