高产黄酮苷银杏悬浮培养细胞系选育和继代培养稳定性研究

银杏叶中主要有效成分黄酮苷和萜内酯,具有多种药理作用,银杏叶提取物(EGB)及其加工品具有广阔的市场前景[1,2].为满足市场需要,Carrier等[3]在90年代初就开始细胞培养生产黄酮苷和萜内酯的研究.细胞大规模培养生产黄酮苷的关键技术之一是选育性状稳定、生产能力强的细胞系.     

银杏叶提取物及其活性成分改善认知功能作用的研究进展

银杏叶提取物是目前临床上最常用的中药提取物之一,具有广泛的药理作用,其主要的活性成分包括银杏黄酮、银杏内酯以及白果内酯。早年研究发现,银杏叶提取物具有保护中枢神经系统的作用并且能显著改善疾病所导致的认知功能障碍,包括阿尔茨海默症、血管性痴呆以及糖尿病脑病。本文就银杏叶提取物及其活性成分通过对信号通路的影响、对凋亡相关蛋白的影响、抗氧化作用来改善认知功能的可能分子机制及其体外对神经细胞的保护作用进行综述。     

银杏黄酮苷和萜类内酯含量的季节变化

以银杏（Ginkgo biloba L.)2年生实生苗和大树为试材,分析根、茎和叶中银杏黄酮苷及萜类内酯含量的季节变化规律。银杏叶中萜类内酯含量从春季起逐渐增加,至夏末秋初达最高值,随后逐渐减少;根和茎中萜类内酯含量的季节变化与叶中相类似,但在冬季休眠期维持较高含量,进入春季伴随叶的萌发生长降低到全年的最低点。银杏茎中萜类内酯含量最低,相当于叶含量的1／3和根含量的1／2。叶中白果内酯含量在总萜类内酯中所占比例较高,而在根和茎中所占比例则较低。随着树龄增加,银杏叶萜类内酯含量下降,这可能与萜类内酯合成能力下降有关。银杏黄酮苷含量在春季幼叶中最高,夏季和秋季相对较低且变化不明显;长枝叶中槲皮素较多,而短枝叶中山柰黄素较多。对不同季节和不同部位的不同成分含量的相关机理进行了讨论。     

银杏叶黄酮含量对银杏叶提取物大孔树脂纯化工艺条件的影响研究

为考察银杏叶中黄酮含量对银杏叶提取物质量、得率及黄酮提取率的影响,为银杏叶提取物的生产提供原料标准和对应的工艺参数,本文选取黄酮含量分别为1.0%、0.8%和0.6%的三批银杏叶,在保证提取物质量满足中国药典要求的前提下,探究银杏叶质量的变化对提取物大孔树脂纯化工艺条件的影响。采用统计回归方法分别建立了银杏叶提取物的黄酮含量、提取物得率及黄酮提取率与纯化乙醇浓度和体积之间的关系。研究发现银杏叶提取物中黄酮含量与乙醇浓度及洗脱液体积正相关;提取物得率与洗脱液体积负相关、与乙醇浓度的关系随银杏叶中黄酮含量而变化;低黄酮含量银杏叶的提取物质量对工艺参数最为敏感;提取物中内酯含量与银杏叶中黄酮含量呈正相关关系并与提取物中黄酮含量、洗脱液体积呈负相关关系。为保证提取物质量、工艺条件和得率的稳定,建议通过不同质量原料混合的方式使银杏叶中黄酮含量维持在1%,采用2倍量15%乙醇进行洗脱,可获得黄酮含量大于24%、内酯含量6%,得率2.6%、黄酮提取率大于66%的银杏叶提取物。     

银杏内酯的研究进展

银杏内酯是从裸子类植物银杏中提取的化合物,属于二萜类内酯,主要分为银杏内酯A、B、C、J、K、L和M (ginkgolide A, B, C, J, K, L, M)及属于倍半萜内酯的白果内酯(bilobalide, BB),具有拮抗血小板活化因子受体的功能。其中银杏内酯B (ginkgolide B, GB)是生理活性最强的。目前银杏内酯主要从银杏叶和根的提取,少量可由生物合成提供。因其丰富的药理作用和微弱的副作用而被广泛用于抗氧化、保护心脑血管系统、保护神经系统等方面。近年来在治疗癌症方面的研究也取得了重大进展,发现银杏内酯可以抑制多种肿瘤,有望将其大量运用于癌症治疗。     

不同产地及株龄果用银杏叶中总银杏酸含量的比较

银杏(Ginkgo biloba L.)是中国特有的集叶用、果用、材用、防护和观赏于一体的多功能树种。银杏叶和果实具有独特的药理效应,广泛应用于食品、保健品、化妆品和药品中,已逐渐成为全球植物药制剂与保健食品的前列品种。银杏叶为银杏的干燥叶,其提取物制剂在临床上用于治疗冠心病[1]、高血压[2]、脑梗死[3]、痴呆[4-5]、哮喘[6]、乙型肝炎[7]和糖尿病[8]等疾病。银杏叶主要含黄酮类和萜内酯类成分,还含有银杏酸     

D140大孔吸附树脂银杏黄酮提取纯化性能研究

对国内外部分大孔吸附树脂的银杏黄酮吸附性能进行了比较筛选实验。其中D140型大孔吸附树脂具有较佳的吸附能力,应用该树脂研究了银杏黄酮的树脂法提取纯化工艺,研究结果表明,银杏黄酮提取液的预处理,提取液的pH,提取液过柱流速,洗脱剂种类及用量,洗脱物后处理等因素均对银杏提取物的收率、纯度等产生影响,采用D140树脂提取银杏黄酮的平均收率为3.54％,纯度为24.54％。已用于工业化生产。     

吸附剂吸附─—解吸法提取银杏苦内酯

吸附剂吸附─—解吸法提取银杏苦内酯丁建国（如皋东方天然物制品厂）银杏苦内酯是从银杏叶中发现的一类具有特殊结构的二萜内酯。目前,已从银杏叶中分离出的银杏苦内酯有ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅＡ、Ｂ、Ｃ、Ｍ、Ｊ等。研究显示,ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅＢ是一种具有高度专属...     

银杏叶丙酮提取物对动物脂肪酸合酶的抑制

银杏叶丙酮提取物(AEGL)对动物脂肪酸合酶(FAS)有强抑制作用。选定的萃取条件是室温下用60%丙酮搅拌萃取30~60min。该萃取液IC50值为4.66μg/mL,抑制能力明显强于已知的FAS抑制剂,有效物的初步分离显示,对FAS有抑制作用的成分可能存在于黄酮组分中。酶学动力学研究表明,抑制包含可逆抑制和不可逆抑制两部分。推测酮酰还原功能域(KR)的NADPH结合部位是其作用部位之一。标准银杏叶提取物EGb761对FAS的可逆抑制和不可逆抑制都明显比银杏叶的60%丙酮萃取液弱,后者对NADPH呈现比较明显的竞争性,不同于EGb761,这表明银杏叶还具有新的应用开发领域。     

贵州传统发酵豆制品中水解银杏黄酮苷的微生物β-葡萄糖苷酶筛选

[目的]微生物β-葡萄糖苷酶法水解银杏黄酮苷具有重要意义,不过目前这方面的研究极少。因此,本文目的是筛选到水解银杏黄酮苷的酶活高的微生物β-葡萄糖苷酶,并分析其底物选择性机制。[方法]以银杏叶提取物作为唯一碳源富集培养,从贵州传统发酵豆豉中筛选产对银杏黄酮苷水解酶活高的β-葡萄糖苷酶的菌株,并对该菌株进行鉴定。然后比较此β-葡萄糖苷酶对不同底物的选择性,同时测定此酶水解银杏黄酮苷反应的米氏常数Km及最大反应速率Vmax。最后,对不同的底物进行分子对接,分析其底物特异性机制。[结果]结果表明,筛选到的菌株GUXN01所产β-葡萄糖苷酶水解银杏黄酮苷的酶活最高,被鉴定为枯草芽孢杆菌。此β-葡糖糖苷酶对β构型的糖类以及苷类等具有广泛的底物特异性和不同的选择性,尤其对银杏黄酮苷具有很好的亲和性。分子对接研究表明枯草芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶对银杏黄酮苷和其他糖苷类具有不同亲和性和选择性的原因主要是酶结构和底物分子结构的相互作用力的差异导致的。[结论]这些发现为GUXN01所产的β-葡萄糖苷酶应用于水解银杏黄酮苷类生产相应苷元奠定了良好的基础。     

银杏根中黄酮类化合物的研究

采用丙酮浸泡、回流从银杏根中提取得到黄酮,以紫外分光光度法测定提取物中总黄酮含量为6．93％,以HPLC法测定其中槲皮素含量为0．064％;结果表明：银杏根黄酮存在槲皮素甙,不含山奈酚、异鼠李素等物质。     

银杏叶黄酮甙浸提工艺的研究

对黄酮含量偏低的银杏叶子进行浸提研究,确定浸提剂为50％～60％乙醇水溶液,液固比为8:1～6:1,浸提温度为60～70℃,浸提时间3～1h,两次。黄酮的浸提率在85％以上;选用A-1和A-2型树脂混合吸附,得到银杏叶提取物产品,黄酮含量26％～31％,得率为1.6％～1.9％。该工艺已用于中试生产,成本较低。     

鄂西南不同核用银杏品种叶中主要黄酮苷元及碳、氮元素含量比较研究

为了比较鄂西南不同核用银杏品种叶中主要黄酮苷元含量,并进一步探讨影响其含量的因素,采用RPHPLC法对样品中黄酮苷元进行定量分析,同时采用德国elementar vario MICRO CUBE元素分析仪测定样品中碳、氮等元素含量。结果表明:不同银杏品种叶片中黄酮含量存在差异,三种主要黄酮苷元组成比例在各品种间差异更加显著,恩银15号及恩银23号具有较好苷元比例,可以作为叶用银杏发展的优先考虑品种。进一步分析表明,叶片总黄酮含量与叶中氮含量之间显著正相关,提示合理施氮有助于改善三种苷元的比例关系,从而使其比例达到最佳。通过比较鄂西南不同银杏品种银杏叶中有效成分的含量,为提高银杏叶质量,优化银杏叶资源提供了理论依据。     

高效液相色谱分析银杏萜内酯的含量

用高效液相色谱法测定银杏叶及提取物中银杏内酯Ａ、Ｂ、Ｃ和白果内酯的含量。采用Ｃ１８分离柱,示差检测器,甲醇：水（３３：６７）为流动相,方法回收率平均达９７％以上,变异系数（ＣＶ）为２．１％。     

银杏双黄酮和银杏内酯B与人体肠道菌群体外互作研究

【目的】银杏提取物在防治心血管系统和神经系统疾病方面发挥重要功能。鉴于肠道菌群已被认定为一个新兴的药物作用靶标,研究银杏双黄酮和银杏内酯与人体肠道菌群之间的相互作用具有非常重要的意义,这将为进一步理解银杏提取物的功能和作用机制奠定基础。【方法】本研究使用人体肠道菌群体外批量发酵、细菌总量测定、细菌16S rDNA高通量测序、气相色谱和液相色谱检测等方法,对银杏双黄酮和银杏内酯B单独或复合在体外与人体肠道菌群的相互作用进行研究。【结果】银杏双黄酮和银杏内酯B单独添加对人体肠道菌群总量、肠道菌群结构组成和短链脂肪酸产量没有显著影响。但有意思的是,复合添加银杏双黄酮和银杏内酯B后,Coriobacteriaceae科和Cupriavidus属细菌的比例显著升高,Gemella菌细菌比例显著降低。功能基因预测分析发现,编码K00076、K12143、K07716和K00220的基因在复合添加银杏双黄酮和银杏内酯B后显著富集。K00076和K00220是氧化还原酶,催化CH-OH供体基团的电子转移,可能参与银杏双黄酮和银杏内酯B的代谢和修饰。HPLC检测发现,人体肠道菌群体外对银杏双黄酮和银杏内脂B的降解修饰率分别为70%和35%左右。【结论】体外复合添加银杏双黄酮和银杏内酯B可显著改变肠道某些细菌的丰度。同时,体外研究表明肠道菌群具有代谢修饰银杏双黄酮和银杏内酯B的功能。     

高效液相色谱分析银杏萜内酯的含量

用高效液相色谱法测定银杏叶及提取物中银杏内酯中Ａ、Ｂ、Ｃ和白果内酯的含量。采用Ｃ１８分离柱,示差检测器,甲醇：水（３３：６７）为流动相,方法回收率平均达９７％以上,变异系数（ＣＶ）为２．１％。     

银杏落叶化学成分研究

采用硅胶与Sephadex LH-20柱色谱等手段从银杏落叶中分离得到22个化合物,通过理化性质和波谱数据分别鉴定为白果醇(1)、二十八烷酸(2)、棕榈酸(3)、三十七烷(4)、二十四烷(5)、4,10-二十九烷二醇(6)、β-谷甾醇(7)、胡萝卜苷(8)、银杏内酯A(9)、银杏内酯B(10)、银杏内酯C(11)、白果内酯(12)、对羟基苯甲酸(13)、莽草酸(14)、芫花素(15)、芹菜素(16)、银杏素(17)、异银杏素(18)、金松双黄酮(19)、白果黄素(20)、芦丁(21)和甘露醇(22),其中化合物2、4～6和22为首次从该种植物中分离得到,这些研究为银杏落叶及银杏资源的综合利用奠定了基础。     

银杏萜内酯的分布与矮壮素对其生物合成的调节

银杏萜内酯分为银杏内酯A、B、C、J、M(ginkgolide A、B、C、J、M)和白果内酯(bilobalide),主要存在于银杏叶与根内,近年的研究指出银杏萜内酯分别在银杏叶和根中生物合成[1],Cartayrade等人[2]通过叶片生根实验发现生根叶片的银杏萜内酯含量显著高于未生根叶,因而认为银杏萜内酯是在根部合成,然后运输到叶中积累,目前对此还缺乏进一步的研究报道.     

银杏叶黄酮提取方法比较

比较不同溶剂提取银杏（ＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａＬ．）叶黄酮类化合物的提取效率,从成本效益角度考虑,以７０％乙醇作为提取溶剂更为有利。在分级沉淀中,黄酮含量与蛋白质含量呈正相关,在乙醇提取液中黄酮和蛋白质含量最高;蛋白质的存在有助于提高黄酮的溶解度。乙醇提取液用饱和（ＮＨ４）２ＳＯ４浓缩两次,可使醇相中的黄酮沉淀析出。根据试验结果,提出了银杏叶黄酮的优化提取方法。     

银杏叶单组分双黄酮分离制备及抗氧化活性研究

从银杏叶中分离制备高纯度双黄酮对照品,探讨其抗氧化活性强弱。以60%乙醇-水提取的银杏叶浸膏为原料,反溶剂沉淀得到含量80.40%的双黄酮粗品,再以甲醇-水为流动相,半制备色谱梯度洗脱。结果得到了4种符合中药化学对照品要求的高纯度双黄酮,在最佳制备条件下,4种双黄酮纯度:阿曼托黄素(98.45%)、白果素(98.66%)、银杏黄素异构体(98.87%)、金松双黄酮(99.29%),其产率(mg/kg)分别为:22.5、23.8、192.5、71.8,考察了它们的抗氧化活性,并采用60%乙腈和有机酸水溶液对银杏黄素异构体进行了完全分离。建立的制备方法快速简便,所得单组分双黄酮纯度、产量高。本工作为单组分银杏双黄酮新药的研究与开发提供重要的技术支持。