我国禾谷类病毒病的病原问题 Ⅹ.应用酶联免疫吸附测定法检测小麦丛矮病传毒昆虫带毒率

使用酶联免疫吸附测定法(ELl8A)检测小麦丛矮病传毒昆虫带毒率。酶用碱性磷酸酯酶,抗原用分离净化的小麦丛矮病毒的核衣壳及其降解物,抗体取抗血清丙种球蛋白部分,交联剂用戊二醛。检测191头灰飞虱的结果与生物接种测定的符合率约为86%。讨论了提高灵敏度的潜力及大田检测的前景。     

我国禾谷类病毒病的病原问题——Ⅶ.小麦丛矮病抗原的分离提纯以及应用抗血清检测植株和传毒昆虫带毒率的方法

应用聚乙二醇沉淀与差速离心相结合的方法,获得小麦丛矮病病毒的核衣壳及其降解物的净化制剂,以之作为抗原,制得抗血清。用血凝反应及毛细管环状沉淀反应可检测植株、传毒昆虫灰飞虱是否带毒。用血凝反应检测单只灰飞虱的结果,和生物接种测定法比较,其符合率平均约为89%。为小麦丛矮病的预测预报和早期诊断,提供了一种快速测定方法。     

我国禾谷类病毒病的病原问题——Ⅶ.小麦丛矮病抗原的分离提纯以及应用抗血清检测植株和传毒昆虫带毒率的方法

应用聚乙二醇沉淀与差速离心相结合的方法,获得小麦丛矮病病毒的核衣壳及其降解物的净化制剂,以之作为抗原,制得抗血清。用血凝反应及毛细管环状沉淀反应可检测植株、传毒昆虫灰飞虱是否带毒。用血凝反应检测单只灰飞虱的结果,和生物接种测定法比较,其符合率平均约为89%。为小麦丛矮病的预测预报和早期诊断,提供了一种快速测定方法。     

新疆小麦花叶病、丛矮病的病原体

在北疆发现有小麦花叶病和小麦丛矮病。花叶病的病原体是一种软棒状病毒,直径约为18nm,长600～1300nm;病叶超薄切片中有风车状包含体,属马铃薯Y 病毒组的成员。丛矮病的病原体是一种弹状病毒,和河北省和北京市的相似。小麦花叶病的分布面积广,为害大,和小麦丛矮病、大麦条纹花叶病、小麦条点花叶病一起威胁着新疆小麦的生产,应密切注意,早加防范。     

新疆小麦花叶病、丛矮病的病原体

在北疆发现有小麦花叶病和小麦丛矮病。花叶病的病原体是一种软棒状病毒,直径约为18nm,长600～1300nm;病叶超薄切片中有风车状包含体,属马铃薯Y病毒组的成员。丛矮病的病原体是一种弹状病毒,和河北省和北京市的相似。小麦花叶病的分布面积广,为害大,和小麦丛矮病、大麦条纹花叶病、小麦条点花叶病一起威胁着新疆小麦的生产,应密切注意,早加防范。     

小麦丛矮病毒核衣壳的分离及其核酸、蛋白质组成的研究

结合有机溶剂沉淀、聚乙二醇沉淀及差速离心和等电点沉淀等方法可以获得小麦丛矮病毒核衣壳的纯化制剂。应用多种分离方法可以把核酸或蛋白质从核衣壳分离出来。碱水解及S_1核糖核酸酶酶解实验证明小麦丛矮病毒的基因组为单链RNA,双向纸电泳及层析方法测定其碱基组成比例为A=30.3,G=16.3,C=16.7,U=36.6。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离到6～7个蛋白组分,其中相应于一般弹状病毒的核衣壳组分为L,分子量140,000,N分子量46,000,NS分子量40,000。     

小麦丛矮病毒NS蛋白基因的克隆及序列分析

利用与Ｎ蛋白ｍＲＮＡ３＇末端顺序相同的２０寡聚核苷酸引物,通过点杂交、限制性内切酶分析从小麦丛矮病毒（ＷＲＳＶ）ｃＤＮＡ文库中筛选到编码Ｎ蛋白基因下游顺序的ｃＤＮＡ克隆。序列分析表明,该ｃＤＮＡ片段含有一编码的４０ｋＤ蛋白的开放读框。将该读框的全长ｃＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后,克隆到ｐＧＥＸ－３Ｘ上,在大肠杆菌ＤＥ３中用ＩＰＴＧ诱导表达,经蛋白质印迹鉴定,该基因为小麦丛矮病毒ＮＳ蛋白基因。     

小麦丛矮病毒核衣壳的分离及其核酸、蛋白质组成的研究

结合有机溶剂沉淀、聚乙二醇沉淀及差速离心和等电点沉淀等方法可以获得小麦丛矮病毒核衣壳的纯化制剂。应用多种分离方法可以把核酸或蛋白质从核衣壳分离出来。碱水解及S_1核糖核酸酶酶解实验证明小麦丛矮病毒的基因组为单链RNA,双向纸电泳及层析方法测定其碱基组成比例为A=30.3,G=16.3,C=16.7,U=36.6。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离到6～7个蛋白组分,其中相应于一般弹状病毒的核衣壳组分为L,分子量140,000,N分子量46,000,NS分子量40,000。     

小麦丛矮病毒的研究

小麦丛矮病是我国北方麦区的一个重要病害。已报道[1-4]叫它是由灰飞虱传染的,在小麦病株和带毒灰飞虱Laodepha striatellus Fallen 的超薄切片中都观寮到弹状璃毒颗粒。为了确定病原,我们用微量注射器把从小麦病株中提取的病毒注人灰飞虱,然后放在健康小麦上取食,可使小麦产生典型的丛矮病状。证明小麦丛矮病的病原是种弹状病毒,称谓小麦从矮病毒(WRSV)。还用注射方法测定了WRSV的体外抗性。用10种禾谷类作物和17种禾本科杂草测定了wRSV的寄主范围。试验证明WRSV可侵染属于6个族的17种植物。在免疫的植物中Aegilops ventricosa 可与小麦杂交,是抗病育种中有用的原始材料。在温室条件下测定了43个小麦品种对WRSV的抗病性,41个严重感病,两个春麦品种中3和中4是抗病的。     

小麦丛矮病毒NS蛋白的磷酸化

小麦丛矮病毒是在中国发现的一种植物弹状病毒 ,病毒基因组是由一条单链负链RNA组成并编码 5种病毒结构蛋白质 :表面糖蛋白G、膜基质蛋白M、核衣壳蛋白N、大蛋白L和所谓非结构蛋白NS。后来的研究证明 ,在弹状病毒的模式病毒———水泡性口膜炎病毒中 ,NS蛋白也是一种结构蛋白 ,而且在成熟的病毒粒子中以各种磷酸化形式存在 ,并且证明NS的磷酸化和去磷酸化对病毒基因组的转录和复制的调控起重要的作用。用体外磷酸化方法证明 ,结合于小麦丛矮病毒的核衣壳上的NS蛋白可以被磷酸化 ;同时也证明 ,从大肠杆菌中表达的小麦丛矮病毒的NS蛋白 ,只有在病毒核衣壳存在下才可以体外被磷酸化 ;从而证明 ,小麦丛矮病毒或植物弹状病毒的NS蛋白也是一种磷酸化蛋白质 ,在成熟病毒粒子中可能存在磷酸化和非磷酸化两种形式。病毒的L蛋白除以前报道的具有RNA聚合酶活力外 ,也具有蛋白激酶的活力。     

小麦丛矮病毒（WRSV）的近全长cDNA基因文库的构建

用大肠杆菌Poly（A）聚合酶,在纯化的小麦丛矮病毒的单链基因组RNA3＇末端加多聚腺苷酸,以此RNA作模板,12－18寡聚脱氧胸核着酸作引物,合成cNDA后,分别用限制性内切酶PstI和EcoRI对该cDNA酶切,同时再分别用PstI单酶和SmaI与EcoRI双酶对pUC载体酶切,经连接、转化感受态细胞、筛选和酶切鉴定后,共得到10种不同大小的非定向克隆,其大小之和约14kb,同时还得到定向克隆47个。已知N蛋白基因3＇端含有SacI酶切位点,故在用限制性内切酶SacI对10种插入片段进行分析后发现,仅有约6kb的插入片段含有SacI位点,再用合成的与WRSVNN蛋白mRNA3＇端顺序相同的引物对该克隆进行顺序分析证明,它含有WRSVN蛋白、G蛋白、M蛋白和部分L蛋白基因。对47个定向克隆进行顺序测定后,用DNA顺序分析软件将它与其它几种弹状病毒基因组的3＇前导（leader）和5＇拖尾（trailer）RNA进行比较后发现,有两个定向克隆分别含有它们的3＇前导或5＇拖尾的高保守区顺序,构建了一个近全长的小麦丛矮病毒（WRSV）cDNA文库。     

小麦丛矮病毒N蛋白的酶加工现象

经SDS-聚丙烯酰胺梯度电泳可以从提纯的小麦丛矮病毒中分离出五种结构蛋白。其中,在N蛋白区域又可分辨出分子量相差2KD的两条蛋白蒂,N_1=46K,N_2=44K。从电泳中分离得到的N_1及N_2蛋白经同位素~(125)I标记后的双向指纹图谱证明没有明显差异,为同一种蛋白质。又通过N末端分析证明N_1的末端为Ser.,N_2为His,初步断定N_1与N_2是前体与酶解产物之间的关系。实验还证明小麦丛矮病毒的核衣壳制剂具有专一酶解N_1至N_2的能力,首次证明了植物弹状病毒的核衣壳具有蛋白水解酶的活力。本文还提出了N蛋白的酶加工现象在弹状病毒的复制和转录的调控过程中可能起重要作用的设想。     

弹状病毒研究的新进展Ⅰ.病毒的基因结构

弹状病毒组是与人类疾病及工农业生产密切相关的一个重要病毒组,例如VSV（水泡性口膜炎病毒）引起的家畜口膜炎,RV（狂犬病毒）引起的狂犬病,IHNV（传染性造血器官坏死病毒）引起的鲑鱼造血器官坏死病,以及对我国农业生产有重大危害的小麦丛矮病毒引起的小麦丛矮病和由水稻黄矮病毒引起的水稻黄矮病等。弹状病毒可以从两个方面的特征区别于其它病毒：首先是形态特征,大多数弹状病毒有子弹状形态,少数为两个子弹状以底部相连的杆状形态;其次,弹状病毒基因组由一条不分节段的负链RNA构成。目前已知的弹状病毒超过100种。弹状病毒…     

国家自然科学基金委员会生命科学部2000年度资助高技术新概念新构思探索项目一览表(32项)

项　目　名　称　负责人　单位名称　用ＤＮＡ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ技术改造杀虫真菌分解寄主外壳的几丁酶　裴　炎　西南农业大学棉铃虫蜕皮调节转录因子基因克隆及表达载体构建　赵小凡　山东大学设计能够透过血脑屏障的生物活性蛋白　郑志兵　中国人民解放军军事医学科学院蛋白质分子拓扑研究　曾宗浩　中国科学院生物物理研究所小麦丛矮病毒基因组的全序列测定及其复制转录的调控研究　龚祖埙　中国科学院上海生物化学研究所Ｄｏｐｐｅｌ蛋白的生化特性及其与朊病毒的相互关系　秦克锋　中国人民解放军第四军医大学蛋白折叠时二硫键色谱…     

禾谷类三种主要病毒病的电镜观察

在调查陕西、甘肃两省禾谷类三种病毒病：小麦线条花叶病毒病、小麦丛矮病毒病和玉米粗病毒病的发生危害基础上,采用超薄切片和电镜技术对发生在上述两省内的三种病毒进行了病毒粒子的直接观察。     

我国禾谷类病毒病的病原问题——Ⅺ.用酶联免疫吸附测定法检测水稻普矮病传毒昆虫带毒率

本文报道用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测水稻普通矮缩病传毒昆虫带毒率。用戊二醛二步法制备辣根过氧化物酶与抗血清丙种球蛋白的结合物,用ELISA法检测水稻普通矮缩病传毒昆虫——黑尾叶蝉388头,测定结果与常规生物接种测定比较,其符合率为92.7%。     

我国禾谷类病毒病的病原问题——Ⅺ.用酶联免疫吸附测定法检测水稻普矮病传毒昆虫带毒率

本文报道用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测水稻普通矮缩病传毒昆虫带毒率。用戊二醛二步法制备辣根过氧化物酶与抗血清丙种球蛋白的结合物,用ELISA法检测水稻普通矮缩病传毒昆虫——黑尾叶蝉388头,测定结果与常规生物接种测定比较,其符合率为92.7%。     

陕西小麦梭条斑花叶病(WSSMV)的鉴定研究

陕西关中渭河流域稻麦兼作两熟的小麦高产区的周至、长安和歧山等县,从1974年以来发生一种小麦条纹、丛矮症状的病害,为一种新病害,经初步研究为小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)所引起。一、症状观察在当地最感病品种官村1号上的症状表现是:返青后起身期开始发病,基部叶片现桔黄色斑驳,心叶由尖端退绿黄化,卷起,后沿叶脉显现绿色与淡绿色或黄绿相间并且长短不等的条纹花叶,有时为梭条状花叶(图1)。严重发病早期极其矮化并且大量分蘖,形成丛矮症状。而且花叶症状能随气温升高而逐渐减轻、隐蔽。内部症状是在病叶表皮及其毛状体组织细胞内可检测到非晶体的内含体,稍大于细胞核,近卵园形或不规则形。     

电子鼻技术在快速检测小麦矮腥黑穗病菌中的应用

由小麦矮腥黑穗病菌(TCK)引起的小麦矮腥黑穗病是我国重要的检疫性病害,为明确电子鼻技术在快速检测小麦矮腥黑穗病菌方面的可行性,利用电子鼻对含有TCK和小麦光腥黑穗病菌(TFL)不同冬孢子数(50g小麦种子中冬孢子数分别为0、100、101、102、103、104、105)的小麦进行了检测,采用主成分分析法(PCA)和线性判别法(LDA)进行数据分析。结果发现,这2种分析方法均可将不含TCK冬孢子的小麦和含TCK冬孢子的小麦区分开来,而且通过LDA分析,可将TCK冬孢子含量为100、101、102及103以上的处理区分开来。另外,通过PCA分析,可将TCK与TFL区分开来。此结果为电子鼻技术在快速检测小麦矮腥黑穗病菌中的应用奠定了基础。     

辽东半岛结缕草群落分类及生态的研究

本文用群丛表法和群落数量分类法以东半岛的结缕草群落进行分析,把该地结缕草群系划分四个群丛,分别是：结缕草群丛,结缕草＋矮丛苔草群丛,结缕草＋矮丛苔草－花木蓝灌草丛和结缕草＋矮丛苔草＋多年生杂类草群丛,并讨论了这些群丛的种类和生活型组成,群落结构和生物量垂分布等订特征。用主分量分析法（ＰＣＡ）对５８个样地进行排序,经分析得出：群落草本层受光率和土壤有机质含量是决定群落类型主自然生态因子。相关分析的结