巨噬细胞RAW264.7不同转染方法的比较

目的:采用不同的转染方法介导siRNA片段转染小鼠巨噬细胞,对不同细胞转染方法进行比较。方法:分别采用脂质体转染、罗氏转染试剂转染、电穿孔法和慢病毒介导siRNA片段转染小鼠巨噬细胞,然后通过流式细胞仪分析不同转染方法的转染效率,并测定对细胞活性的影响以及目的基因的表达水平。结果:慢病毒介导siRNA转染小鼠巨噬细胞效率最高,可达34.75±5.30%,且RNA干扰效果最好;其次为罗氏转染试剂转染和电穿孔法,但电穿孔法细胞活力最低;脂质体转染效率最低,仅为12.17±1.53%,但细胞活力最好。结论:通过对4种小鼠巨噬细胞转染方法的比较,明确了4种转染方法的优缺点,为小鼠巨噬细胞转染提供了实验依据。     

增强型绿色荧光蛋白基因电穿孔转染骨髓间充质干细胞的研究

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养方法,探讨电穿孔法介导外源基因转染骨髓间充质干细胞的可行性及转染效率.方法 Ficoll-PaqueTMPlus淋巴细胞分离液分离大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)并进行原代培养和传代扩增,免疫组化的方法对其初步鉴定.用荧光显微镜、细胞计数法和流式细胞仪分析转染效率.结果电穿孔法可较高效转染rMSCs,转染率为(32.8%±3)%.该条件下电转染后的MSCs其生长曲线与转染前的细胞比较无明显变化.结论优化条件的电穿孔法具有较高的介导外源基因表达于rMSCs的效率,且对rMSCs的生物学行为没有明显影响.     

脂质体法和电穿孔法在转染Cos-7,Vero和Namalwa细胞中的比较

用脂质体法和电穿孔法分别转染Cos-7,Vero和Namalwa细胞。发现脂质体法在转染效率和操作方便方面比电穿孔法优越,而电穿孔法对细胞种类的适应性方面比脂质体法广。电穿孔法能转染Cos-7、Namalwa和Vero细胞,而用脂质体法只能转染Cos-7和Vero细胞。     

脂质体法和电穿孔法转染哺乳动物细胞研究

用脂质体法和电穿孔法分别转染Cos-7,Vero和Namalwa细胞.发现脂质体法在转染效率和操作方便方面比电穿孔法优越,而电穿孔法对细胞种类的适用性方面似乎比脂质体法广. 结果表明,电穿孔法能转染Cos-7,Namalwa和Vero细胞,而用脂质体法只能转染Cos-7和Vero细胞.     

正交设计优化电转染CHO细胞的方法

目的:探讨细胞电穿孔转染的优化方法。方法:按照L9(34)正交表安排各因素水平的细胞电敏感性实验,以台盼蓝染色计数确定细胞存活率,最接近50%存活率为最优方案,根据最优方案将CHO-dhfr-细胞与DNA混匀电穿孔转染以验证正交设计结果。结果:CHO-dhfr-细胞电转染的优化参数为低离子强度Tris-Cl缓冲液、750 V/cm、50μF、电击2次、间隔1 min,各因素对转染的影响大小依次为缓冲液、电场强度、脉冲次数、电容。结论:确定了电穿孔法转染CHO-dhfr-细胞的方法,为进一步应用该细胞株表达重组蛋白打下了基础。     

小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较

本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色荧光蛋白（GFP）的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中,转染48 h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率.结果显示,脂质体转染效率最高仅为8.64%,不能满足对精原干细胞进一步实验的要求;电穿孔法效率最高达到25.27%,但转化后细胞大量死亡;腺病毒转染细胞的效率达到了32.4%;慢病毒转染效率最高,达到74.25%. 因此,慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法.     

运用高效率电融合技术建立抗-hCG杂交瘤细胞株

应用本实验室研制的细胞电穿孔融合仪和平行不锈钢丝多电极小池,以及独立开发的杂交瘤细胞电融合标准程序,对绒毛膜促性腺激素(hCG)免疫的一只Balb c小鼠B淋巴细胞和NSl骨髓瘤细胞进行了电融合.实验以1/5的B细胞进行电融合,共铺96孔培养板536孔,产生317孔杂交瘤细胞克隆,检测出稳定的强阳性克隆22孔;以4/5的B细胞进行了对     

细胞电融合技术及最新进展

细胞电融合（cell electrofusion）是一种发展迅速的细胞工程技术,在细胞融合研究领域得到了最广泛的应用。细胞电融合利用细胞在相对电极之间的介电电泳,诱导细胞按特定方向排列,通过电极间产生的较高场强的电脉冲使相互接触的细胞发生电穿孔,进而发生电融合。融合后的细胞得到了不同细胞的遗传物质,具有新的遗传或生物特性。目前,细胞电融合技术对生物医学、农业等相关领域的研究具有非常重要的意义。本文介绍了细胞电融合技术及其最新研究动态,并简单介绍了本实验室在该领域的研究进展。     

电穿孔转染重组杆状病毒到昆虫细胞的研究

目前转染细胞时常用阳离子脂质体如Cellfectin,这种方法成本高,效果不稳定,而用电穿孔转染外源基因到昆虫细胞的文献报道极为少见.构建重组杆状病毒基因组GFP/BAC,用电穿孔法和脂质体法转染到昆虫细胞Sf9中,比较两种方法的转染效率.研究发现,两者转染效率分别为86.14%和86.53%.两种转染方法的子代重组杆状病毒能够继续转染Sf9细胞,荧光强度无明显差异.电穿孔转染效率与脂质体转染接近,但电穿孔法操作简便,周期较短,成本很低.     

基于微电极阵列的微生物电融合

利用自主研制的梳状交叉微电极阵列细胞电融合芯片系统,研究微生物电融合。在酶解浓度1．5％、酶解温度33℃、酶解时间3h、酶解pH值6．0、0．8mol／L山梨醇的渗透压条件下,获得生成率和再生率分别为95．2％和8．9％的微生物细胞原生质体。在脉冲峰值电压50V、持续时间80μs、8个脉冲、间隔1s的电融合条件下,该原生质体通过电融合获得一株菌株其乳化性能从62％提高到85％。