IGS基因及RAPD标记分析在加特隐球酵母基因分类中的应用

根据ITS1-5.8S-ITS2区域的特异核酸序列变化,加特隐球酵母Cryptococcus gattii(≡新型隐球酵母加特变种Cryptococcu neoformans var.gattii)可分为6种基因型。本研究通过检测加特隐球酵母的IGS基因,发现其IGS序列有着更丰富的变异和信息位点。通过结合加特隐球酵母RAPD(随机扩增的多态性DNA)图谱比较研究,与IGS和ITS的序列分析结果大体一致,说明新近发现的加特隐球酵母ITS8型确实有别于以前报道过的其他加特隐球酵母ITS基因型。研究证明IGS1及IGS2基因片段分析可以作为加特隐球酵母基因分类鉴定中有效的辅助鉴别的分子生物学方法,联合多种基因分类鉴定的方法可以更有效地揭示新型隐球酵母加特变种种内不同基因亚型间的遗传进化关系。     

渤海海水中酵母菌的种类

本文报道了渤海海水中酵母菌种类的调查结果,从31个站位中,共分离鉴定了228株酵母菌,这些酵母菌分别属于8属40种:红酵母属(Rhodotorula)5个种,隐球酵母属(Cryptococcus)8个种,德巴利酵母属(Debaryomyces)2个种,毕赤酵母属(Pichia)8个种,酵母属(Saccharomyces)2个种,短梗霉属(Aureobasidium)1个种,球孢酵母属(Torulaspora)1个种,假丝酵母属(candida)13个种。40个种中,有13种是中国新记录,即:黑隐球酵母(Cryptococcus ater),大型隐球酵母(Cr.magnus),多型德巴利酵母(Debaryomyces polymorphus),克鲁维酵母(Saccharomyces kluyveri),伯顿毕赤酵母(Pichia burtonii),卡森毕赤酵母(P.carsonii),埃切毕赤酵母(P.etchellsii),季也蒙毕赤酵母(P.guilliermondii),海梅尔毕赤酵母(P.heimii),嗜土毕赤酵母(P.philogaea),奥默毕赤酵母(P.ohmeri),棘胫小蠹毕赤酵母(P.scolyti),和戴尔有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii),在这13种中,除埃切毕赤酵母和奥默毕赤酵母外,其余11种在海水里也是首次报道。     

新型隐球酵母U6启动子的鉴定、克隆及功能验证

【目的】鉴定及克隆新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)中PolⅢ型的U6启动子(Cn U6启动子),并验证CnU6启动子能否有效转录shRNA及CRISPR/Cas9系统中gRNA。【方法】结合Gen Bank数据库已公布的新型隐球酵母基因组信息和本实验室RNA-seq文库数据,利用生物信息学技术分析得到新型隐球酵母中具有高转录水平的U6RNA序列。使用重叠PCR和Easy Geno方法将预测的CnU6启动子分别克隆到sh RNA及gRNA的上游区域,通过观察shRNA对靶基因的RNAi效果及gRNA引导Cas9核酸酶对靶位点的切割结果,确定CnU6启动子能否转录短RNA。【结果】CnU6启动子能够转录形成shRNA对靶基因进行沉默,并且能转录形成g RNA引导Cas9核酸酶对靶点进行切割。【结论】新型隐球酵母的CnU6启动子被成功鉴定及克隆,它能有效驱动shRNA和gRNA的转录。     

真菌的多向耐药性ABC转运蛋白

真菌的多向耐药性ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporters)是导致多药耐药性和抗真菌药物治疗效果明显下降的主要原因。文章对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和主要致病真菌白色假丝酵母(Candida albicans)、新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)和烟曲霉(Aspergillus fumigatus)中的多向耐药性ABC转运蛋白的种类、药物外排机制以及基因表达调控网络的研究进展作一综述,为深入了解真菌的多向耐药性机制以及探讨克服多向耐药性的策略和提高药效提供参考。     

真菌miRNA的发现

microRNAs (miRNAs)在植物和动物中大量存在,但是否在真菌中存在一直是个未解之谜.本研究组在担子菌新型隐球酵母Cryptococcus neoformans中发现了miRNA.两个miRNA,miR1和miR2,长度分别是22nt和18nt,前体是70nt,和动物miRNA相近.通过报告基因,证实miRl/2具有沉默功能.真菌miRNA的发现为研究其进化、功能等提供有用知识.     

产菊粉酶酵母菌株的筛选及菌种鉴定

经过初筛、复筛,得到2株菊粉酶活力较高的酵母菌Y9和Y27,其发酵液酶活分别达到19.4 U/mL和14.1 U/mL,两者胞外菊粉酶分泌较少,主要分布在酵母菌菌体上。通过细胞形态、生理生化特征及Biolog微生物鉴定系统鉴定,将Y9确立为Cryptococcus albidus(浅白隐球酵母),Y27确立为Pichia guilliermondiiA(季也蒙毕赤氏酵母A)。     

新型隐球酵母非编码小RNAs的研究进展

新型隐球酵母是一种担子菌病原真菌,主要感染免疫功能缺陷的人群,例如HIV-1感染病人,最终会引起致命隐球菌性脑膜炎。非编码小RNAs一般指长度为20-30nt的小RNAs,具有调节功能。新型隐球酵母能够产生大量的小RNAs,但是其生成（biogenesis）过程以及生物学功能尚未完全阐述。本文就新型隐球酵母中小RNAs的特征和产生、以及在新型隐球酵母中的生物学作用和机制进行综述。     

罗伦隐球酵母胞外多糖的研究I．发酵条件

研究了罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)产生胞外多糖的适宜条件。培养基组成(g／L)：葡萄糖80.00,酵母膏1.25,KH2PO4 3.00,MgSO4·7H2O 0.05,CaCO3 10.00,pH6.0。在30℃,旋转式摇床(200r／min)上培养6天。胞外多糖产量最高可达17.38g／L,对底物的转化率为21.725％。     

石河子不同树龄蟠桃土壤中可培养酵母多样性分析及功能酵母的筛选

为了探究新疆本土蟠桃园可培养酵母菌多样性,并挖掘功能酵母资源,本研究以新疆石河子蟠桃园3年、8年、15年树龄的根际和非根际土壤以及桃树叶片为材料,经过传统的分离培养方法获得可培养的酵母菌菌株,并进行形态学、生理生化以及26S r DNA的D1/D2区序列分析,共获得可培养酵母菌129株,从属于12个属17个种,其中子囊菌酵母为优势菌群,占分离属的88%,分布于威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces),Vanrija属,Barnettozyma属和有孢圆酵母属(Torulaspora)等11个属的15个种。担子菌占分离属的12%,分布于隐球酵母属(Cryptococcus)的2个种。其中优势属威克汉姆酵母属,包括异常威克汉姆酵母(W. anomalus)和W. pijperi两个种,占总比例的33%,优势种异常威克汉姆酵母所占总株数比例为17%。从可培养酵母中共筛选出23株功能酵母,其中富硒酵母21株,优势种为白地霉(Galactomyces candidum),产蛋白酶酵母2株均属于隐球酵母属的Cryptococcus albidus。结果表明,新疆桃园中蕴含丰富的酵母菌资源,非根际土壤中的酵母多样性大于根际及叶片酵母多样性,且分离得到富硒酵母及产蛋白酶酵母。本研究挖掘了新疆本土可培养酵母菌资源,同时也为功能酵母的开发和利用提供理论指导。     

新型隐球酵母氯离子通道在阳离子内稳态中的趋异作用

新型隐球酵母Cryptococcus neoformans有两个变种（varieties）,即grubii和neoformans。目前研究最多的两个菌株H99（血清型A）和JEC21（血清型D）分别代表这两个变种,两者的毒性差别显著,为研究新型隐球酵母菌株间毒性的进化提供了良好模型。我们通过比较JEC21的clc1-突变体Tx1与早先鉴定的H99 clc1-菌株Mlac3发现,JEC21 CLC1同样决定铜离子的吸收。Tx1中丧失的漆酶活力可以通过外源Cu2+的加入得以恢复,而漆酶基因LAC1的转录与野生     

田间应用拮抗酵母菌对甜樱桃果实采后病害的防治效果

研究了应用拮抗酵母菌丝孢酵母(Trichosporon pullulans(Lindner.)Diddens et Lodder)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)和粘红酵母(Rhodotorula glutinis(Fresenius)Harrison)后拮抗菌在果实表面的繁殖能力以及对不同贮藏条件下甜樱桃(Pranus avivum L.cv.Hongdeng)果实采后病害的防治效果.酵母菌的使用浓度为1×108CFU/mL.结果表明,田间3种拮抗菌都能够在果实表面增值,但是只有C.laurentii和R.glutinis能够持续稳定地生长.C.laurentii的抑病效果最好,它对田间环境和采后低温低氧及高CO2都具有很强的适应能力.     

田间应用拮抗酵母菌对甜樱桃果实采后病害的防治效果

研究了应用拮抗酵母菌丝孢酵母(Trichosporon pullulans(Lindner.)Diddens et Lodder)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)和粘红酵母(Rhodotorula glutinis(Fresenius)Harrison)后拮抗菌在果实表面的繁殖能力以及对不同贮藏条件下甜樱桃(Pranus avivum L.cv.Hongdeng)果实采后病害的防治效果。酵母菌的使用浓度为1×10~8CFU/mL。结果表明,田间3种拮抗菌都能够在果实表面增值,但是只有C.laurentii和R.glutinis能够持续稳定地生长。C.laurentii的抑病效果最好,它对田间环境和采后低温低氧及高CO_2都具有很强的适应能力。     

新型隐球酵母基因间来源的小RNA功能验证

摘要:【目的】验证内源基因间来源的20－25nt 的small RNA(sRNA)是否具有干扰功能。【方法】通过建立隐球酵母sRNA测序文库,得到约200个长度在20－25 nt的sRNAs,运用建立的验证新型隐球酵母sRNA功能报告系统,对其进行干扰功能验证。【结果】通过CLC-sRNA报告系统,对选取的sRNA进行了分子水平的功能验证,发现一个具有干扰功能的基因间来源的sRNA。【结论】新型隐球酵母sRNA来源具有多样性,对报告靶基因存在着干扰功能,其干扰的通路应当是经典RNAi通路,同时在无性传递过程中具有稳定性。     

三种拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的抑制效果

从苹果果实上分离获得的50余种酵母菌中筛选出了能够有效地抑制苹果青霉病(Penicilium expansum Link)的丝孢酵母(Trichosporon pullulans (Lindner.) Diddens and Lodder)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii (Kuffer.) Skinner)和粘红酵母(Rhodotorula glutinis (Fresen.) F. C. Harrison).其中,抑病效果最好的T. pullulans 是一种用于采后果实生物防治的新型拮抗菌.研究了这三种拮抗菌不同浓度处理和外加营养物质以及与钙配合使用对苹果青霉病的抑病效果.实验结果表明:酵母菌浓度越高,抑病作用越强;外源营养物质的加入削弱了酵母菌的拮抗效果;在C. laurentii的细胞悬浮液中加入0.18 mol/L 的CaCl2能显著提高其抑病能力,但增加CaCl2 对T. pullulans 和R. glutinis 的抑病效果却没有明显作用.     

三种拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的抑制效果

从苹果果实上分离获得的50余种酵母菌中筛选出了能够有效地抑制苹果青霉病（Peniclium expansum Link)的丝孢酵母（Trichosporon pullulans(Lindner.)Diddens and Lodder)。罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii(Kuffer.)skin-ner)和粘红酵母（Rhodotorula glutinis(Fresen.)F.C.Harrison)。其中,抑病效果最好的T.pullulans是一种用于采后果实生物防治的新型拮抗菌,研究了这三种拮抗菌不同浓度处理和外加营养物质以及与钙配合使用对苹果青霉病的抑病效果。实验结果表明;酵母菌浓度越高,抑病作用越强;外源营养物质的加入削弱了酵母菌的拮抗效果;在C.laurentii的细胞悬浮液中加入0.18mol/L的CaCl2能显著提高其抑病能力。但增加CaCl2对T.pullulans和R.glutinis的抑病效果却没有明显作用。     

一株产柚苷酶的罗伦隐球酵母的鉴定及柚苷酶表达

【目的】对一株新分离的、产生柚苷酶的疑似酵母菌株Jmudeb008进行鉴定,确定其分类的种属关系,阐明葡萄糖对该菌株表达柚苷酶的影响。【方法】利用形态观察、核酸分析及生理生化实验对Jmudeb008进行种属鉴定;用含有0.5g/L柚皮苷及不同浓度葡萄糖的培养基培养Jmudeb008,通过检测培养过程柚皮苷、柚皮素及葡萄糖浓度的变化研究葡萄糖对Jmudeb008表达柚苷酶的影响。【结果】Jmudeb008的菌落形态及个体形态都与典型的酵母相似,其26SrDNAD1/D2区域和5.8SrDNA-ITS区域的序列与罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)的同源性为99%,葡萄糖发酵试验阴性,尿酶试验阳性,重氮基蓝B试验阳性、硝酸盐还原试验阴性符合该菌种特性,因此鉴定为罗伦隐球酵母。Jmudeb008在以柚皮苷为唯一碳源的培养基中或当培养基中葡萄糖消耗完以后会分泌柚苷酶,而有葡萄糖存在时不分泌柚苷酶。【结论】分离得到了能产柚苷酶的罗伦隐球酵母,该酵母产柚苷酶受葡萄糖分解代谢调节。     

新疆蟠桃叶附生酵母种群结构分析

通过Illumina MiSeq平台, 对石河子143团两个蟠桃园所采集的叶片样本附生酵母菌26S rDNA D1/D2区进行高通量测序, 并分析了其物种的组成、Alpha多样性以及菌种群落结构。结果显示,两个桃园中共检测到1470个OTU (Operational Taxonomic Units, 操作分类单元), 桃园1中含有个1217个OTU, 桃园2中含有609个OTU, 其中有356个为共有OTU。共鉴定出酵母菌2门22属, 属于担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota), 两个桃园共有的酵母属有线黑粉酵母属(Filobasidium), 接合酵母属(Zygosaccharomyces), 红酵母属(Rhodotorula), 隐球酵母属(Cryptococcus), Papiliotrema, 毕赤酵母属(Pichia), 假丝酵母属(Candida), Kwoniella, Cystobasidium, 两个桃园优势属均为线黑粉酵母属。研究结果表明石河子地区蟠桃叶表面附生酵母菌资源丰富, 值得进一步开发与利用。     

内切型菊粉酶生产菌株的筛选及诱变选育

采用透明圈法筛选得到了产菊粉酶的多株菌株,并得到了1株产内切型菊粉酶较高的隐球酵母属（Cryptococcus)菌株L1,以L1作为出发菌株经Co^60诱变后,得到1株产内切型菊粉酶最好菌株C10,其诱变后低聚果糖得率比诱变前提高了52．6％,酶活力提高了51．9％。     

隐球菌荚膜体内生长机制研究进展

隐球菌(Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii)最常侵犯人类或哺乳动物的中枢神经系统,引起致命的隐球菌性脑膜脑炎(Cryptococcal meningitis),已是目前临床上最重要的致病真菌之一[1]。近20 a来,生物医学很多领域都取得重要进展,而隐球菌病的发病率及病死率     

红富士苹果园酵母多样性研究

从北京顺义和山东泰安红富士苹果园采集果实、叶片、树皮和土壤等不同基物,分离酵母菌,利用26S rDNA的D1/D2区域序列分析并结合形态学特征和SSCP分析对这些菌株进行了分类学研究,探讨了苹果园酵母的物种多样性及其分布。北京苹果园共分离酵母菌129株,鉴定为13属21种,优势属为Pichia（4个种）,Cryptococcus（3个种）,Pseudozyma（3个种）,子囊菌占较大优势,分布于8属12种,占总种数的57.1%。山东苹果园共分离酵母291株,鉴定为13属26种,优势属为假丝酵母Candida（6个种）,毕赤酵母Pichia（4个种）和隐球酵母Cryptococcus（3个种）,并且子囊菌占较大优势,分布于7属17种,占总种数的65.4%。