健康体检人群幽门螺杆菌感染的影响因素分析及对糖脂代谢和血清PGⅠ、PGⅡ和G-17的影响

摘要 目的：分析健康体检人群幽门螺杆菌（Hp）感染的影响因素,并探讨Hp感染对糖脂代谢和血清胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）和胃泌素17（G-17）的影响。方法：选择2017年1月~2019年12月期间在我院进行Hp检查的117例健康体检者进行问卷调查,分析其Hp感染情况,并应用多因素Logistic回归分析健康体检人群Hp感染的影响因素。将体检者分为Hp阳性组和Hp阴性组,对比两组血糖、血脂指标以及血清PGⅠ、PGⅡ、G-17水平。结果：117例受试体检者中Hp阳性49例,阳性率为41.88%,其中男性感染率为50.85%（30/59）,显著高于女性感染率的32.76%（19/58）（x²=10.537,P=0.001）。不同年龄体检者Hp阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。不同学历体检者Hp阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,饮酒、经常喝生水、经常在外就餐、经常吃辛辣食物、有家人Hp感染史是健康体检人群Hp感染的危险因素（P＜0.05）。Hp阳性组的空腹血糖（FPG）、甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平均高于Hp阴性组,而高密度脂蛋白（HDL-C）水平则低于Hp阴性组（P＜0.05）。Hp阳性组的血清PGⅠ、PGⅡ、G-17水平均高于Hp阴性组（P＜0.05）。结论：饮酒、经常喝生水、经常在外就餐、经常吃辛辣食物、有家人Hp感染史是健康体检人群Hp感染的危险因素,糖脂代谢及血清PGⅠ、PGⅡ、G-17水平变化与Hp感染有关。     

瑞巴派特四联疗法对幽门螺杆菌阳性消化性溃疡患者血清氧化应激指标和胃蛋白酶原的影响

摘要 目的：观察瑞巴派特四联疗法治疗幽门螺杆菌（Hp）阳性消化性溃疡的疗效及对患者血清氧化应激指标和胃蛋白酶原的影响。方法：选取2020年7月至2021年12月期间广西壮族自治区胸科医院收治的Hp阳性消化性溃疡患者（n=100）,按照随机数字表法分为联合组（50例,瑞巴派特四联疗法）、对照组（50例,标准四联疗法）。对比两组疗效、量表评分、血清氧化应激指标、胃蛋白酶原（PG）、不良反应发生率、Hp根除率、复发率。结果：联合组的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。联合组的消化性溃疡愈合率高于对照组（P<0.05）。治疗后,联合组胃食管反流性疾病症状频率量表（FSSG）各项评分、临床症状各项评分低于对照组（P<0.05）。治疗后,联合组血清丙二醛（MDA）低于对照组,血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）高于对照组（P<0.05）。治疗后,联合组胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、PGⅡ低于对照组（P<0.05）。两组不良反应总发生率组间对比无差异（P>0.05）。联合组的Hp根除率高于对照组,复发率低于对照组（P<0.05）。结论：瑞巴派特四联疗法治疗Hp阳性消化性溃疡患者,可有效促进溃疡愈合,缓解临床症状,改善机体应激状态和胃蛋白酶原水平,提高Hp根除率,减少不良反应及复发情况。     

血清PGR、G-17、TK1、RHBDD1联合幽门螺杆菌抗体对萎缩性胃炎与早期胃癌的鉴别价值研究

摘要 目的：研究血清胃蛋白酶原比值（PGR）、胃泌素-17（G-17）、胸苷激酶1（TK1）、菱形结构域蛋白1（RHBDD1）联合幽门螺杆菌抗体（HP-IgG）对萎缩性胃炎与早期胃癌的鉴别价值。方法：选取2018年1月～2021年12月我院收治的202例早期胃癌患者,记作胃癌组。另选取同期萎缩性胃炎和健康体检志愿者各200例,记作萎缩性胃炎组及对照组。检测并比较三组血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、PGⅡ、PGR、G-17、TK1、RHBDD1水平以及HP-IgG阳性率。比较早期胃癌HP-IgG阳性及阴性患者血清PGⅠ、PGⅡ、PGR、G-17、TK1、RHBDD1水平。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清PGR、G-17、TK1、RHBDD1水平联合HP-IgG鉴别早期胃癌与萎缩性胃炎的效能。结果：胃癌组血清PGⅠ、PGR水平均低于萎缩性胃炎组及对照组,且萎缩性胃炎组上述指标水平均低于对照组（均P＜0.05）;胃癌组血清PGⅡ、G-17、TK1、RHBDD1水平以及HP-IgG阳性率均高于萎缩性胃炎组及对照组,且萎缩性胃炎组上述指标水平均高于对照组（均P＜0.05）。早期胃癌HP-IgG阳性患者血清PGⅠ、PGR均低于HP-IgG阴性患者,而血清PGⅡ、G-17、TK1、RHBDD1水平均高于HP-IgG阴性患者（均P＜0.05）。经ROC曲线分析发现,血清PGR、G-17、TK1、RHBDD1水平以及HP-IgG抗体联合鉴别早期胃癌与萎缩性胃炎的效能优于上述五项指标单独鉴别。结论：早期胃癌患者血清PGR存在异常低表达,而血清G-17、TK1、RHBDD1以及HP-IgG抗体存在异常高表达,联合上述五项指标鉴别早期胃癌与萎缩性胃炎的价值较高。     

血清PG、LGR4与胃癌患者腹腔镜D2根治术预后相关性分析

摘要 目的：探讨与分析血清胃蛋白酶原（PG）、多富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体4（LGR4）与胃癌患者腹腔镜D2根治术（LD2RS）预后相关性。方法：2021年1月到2021年12月选择在本院进行诊治的胃癌患者210例作为胃癌组,同期选择在本院进行体检的健康者210例作为对照组。检测两组人群的血清血清PG、LGR4含量,调查患者预后并进行相关性分析。结果：胃癌组的血清PGⅠ含量低于对照组,血清LGR4、PG Ⅱ含量高于对照组（P<0.05）。平均手术时间154.98±19.43 min;平均术中出血量148.62±15.83 mL;平均术后肠功能恢复时间2.51±0.29 d;平均术后肛门排气时间2.79±0.16 d;平均术后下床活动时间2.33±0.15 d;平均术后住院时间9.28±0.29 d。术后14 d发生并发症24例,占比11.4 %。胃癌组所有患者随访至今,平均随访时间为17.38±2.15个月,预后发生转移23例,占比11.0 %;复发14例,占比6.7 %。Spearsman分析显示胃癌患者预后转移、复发与血清PGⅠ、PGⅡ、LGR4含量存在相关性（P<0.05）。多因素logistic回归显示血清PGⅠ、PGⅡ、LGR4为导致患者预后复发、转移的重要因素（P<0.05）。结论：腹腔镜D2根治术治疗胃癌具有很好的安全性与微创性,但是预后复发率与转移率依然比较高,血清PG、LGR4与胃癌患者腹腔镜D2根治术预后存在相关性,也是导致预后复发与转移的重要因素。     

酪酸梭菌活菌胶囊联合四联疗法对幽门螺杆菌阳性胃溃疡患者血清炎症因子、胃肠激素和胃蛋酶原亚群的影响

摘要 目的：探讨酪酸梭菌活菌胶囊联合四联疗法对幽门螺杆菌（Hp）阳性胃溃疡患者血清炎症因子、胃肠激素和胃蛋酶原亚群的影响。方法：选择天津市中医药研究院附属医院于2017年2月~2020年3月期间收治的Hp阳性胃溃疡患者100例,按信封抽签法随机分为对照组（50例,采用四联疗法治疗）、观察组（50例,采用酪酸梭菌活菌胶囊联合四联疗法治疗）。对比两组患者疗效、血清炎症因子、胃肠激素、胃蛋酶原亚群、Hp根除率及不良反应。结果：治疗4周后,观察组患者的总有效率为92.00%（46/50）,高于对照组患者的70.00%（35/50）（P＜0.05）。观察组治疗4周后白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）水平低于对照组（P<0.05）。观察组治疗4周后胃泌素（GAS）低于对照组,胃动素（MTL）高于对照组（P<0.05）。观察组治疗4周后胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）水平较对照组更低（P<0.05）。对比两组不良反应发生率无差异（P>0.05）。观察组的Hp根除率为94.00%（47/50）,较对照组的72.00%（36/50）更高（P<0.05）。结论：酪酸梭菌活菌胶囊联合四联疗法治疗Hp阳性胃溃疡患者,可取得显著疗效,提高Hp根除率,改善血清炎症因子、胃肠激素和胃蛋酶原亚群,且安全性较好。     

慢性胃病患者胃蛋白酶原I、II水平与幽门螺旋杆菌感染的关系研究

目的:探讨慢性胃病患者胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PG Ⅱ水平与幽门螺旋杆菌(HP)感染的关系。方法:选取2012年12月-2016年12月期间我院收治的慢性胃病患者64例作为研究对象,根据疾病类型分为慢性胃炎组23例、胃溃疡组22例以及胃癌组19例。另取同期于我院接受体检的健康志愿者30例作为对照组,应用免疫比浊法测定各组血清PG Ⅰ与PG Ⅱ水平,采用快速尿激酶法测定各组HP感染情况,分别对比各组研究对象HP感染发生情况,血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、PG Ⅰ/PG Ⅱ水平,HP感染情况与血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、PG Ⅰ/PG Ⅱ水平关系。结果:慢性胃炎组、胃溃疡组以及胃癌组患者HP阳性率分别为60.87%、63.64%、78.95%,均明显高于对照组的13.33%(P0.05)。慢性胃炎组、胃溃疡组以及胃癌组患者血清PG Ⅰ、PG Ⅰ/PG Ⅱ水平均低于对照组,且胃癌组低于慢性胃炎组与胃溃疡组(P0.05),慢性胃炎组和胃溃疡组血清PG Ⅰ、PG Ⅰ/PG Ⅱ水平比较差异无统计学意义(P0.05),各组血清PG Ⅱ比较无统计学差异(P0.05)。各组研究对象HP阳性血清PG Ⅰ、PG Ⅰ/PG Ⅱ水平均低于HP阴性(P0.05),而PG Ⅱ水平比较无统计学差异(P0.05),慢性胃炎组、胃溃疡组、胃癌组HP阳性血清PG Ⅰ水平低于对照组,且胃癌组低于慢性胃炎组、胃溃疡组(P0.05),胃溃疡组、胃癌组HP阳性血清PG Ⅰ/PG Ⅱ水平低于对照组,且胃癌组低于慢性胃炎组(P0.05)。结论:慢性胃病患者PG Ⅰ、PG Ⅱ水平异常降低,HP阳性患者PG Ⅰ、PG Ⅱ水平降低更为明显,随病变的程度增加,血清PG Ⅰ、PG Ⅰ/PG Ⅱ水平也呈现出下降的趋势。     

荆花胃康胶丸联合标准四联疗法对Hp相关十二指肠溃疡患者血清肽类胃肠激素、胃蛋白酶原和炎症介质的影响

摘要 目的：探讨荆花胃康胶丸联合标准四联疗法对幽门螺杆菌（Hp）相关十二指肠溃疡（DU）患者血清肽类胃肠激素、胃蛋白酶原和炎症介质的影响。方法：选择2019年3月~2021年11月期间我院收治的Hp相关DU患者103例。按随机数字表法,将其分为对照组（标准四联疗法治疗,51例）和联合组（荆花胃康胶丸联合标准四联疗法治疗,52例）。对比两组疗效、Hp清除率、血清肽类胃肠激素[胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）、 生长抑素（SS）和降钙素基因相关肽（CGRP）]、胃蛋白酶原[胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）]和炎症介质[白介素-8（IL-8）、白介素-1β（IL-1β）、转化生长因子β1（TGF-β1）],统计两组用药安全性。结果：联合组的临床总有效率、Hp清除率高于对照组（P<0.05）。两组治疗后血清IL-8、IL-1β、TGF-β1、PGⅠ、PGⅡ、GAS、MTL水平均下降,且联合组的下降程度大于对照组（P<0.05）。两组治疗后SS、CGRP均升高,且联合组的升高程度大于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间对比未见显著差异（P>0.05）。结论：荆花胃康胶丸联合标准四联疗法可通过提高Hp清除率、改善Hp相关DU患者的血清肽类胃肠激素、胃蛋白酶原和炎症介质水平,来进一步提高临床疗效。     

分析胃肠ESD治疗早期胃癌疗效、随访情况及血清胃蛋白酶原、癌胚抗原表达水平

摘要 目的：分析予以早期胃癌患者胃肠内镜下黏膜剥离术（ESD）治疗的效果，为此类患者治疗提供参考。方法：于我院诊治的早期胃癌患者中筛选60例为主体，以电脑随机法将患者分成常规组（30例）、实验组（30例）。予以常规组外科切除术治疗，予以实验组胃肠ESD治疗，完成治疗后对比各组临床疗效、手术指标、血清肿瘤标志物、PG水平（PGⅠ、PGⅡ）、随访情况，病例选取时间为2019年11月-2021年11月。结果：实验组患者治疗总有效率与常规组对比无差异（P>0.05）；治疗前两组患者的CEA、CA199、CA125水无差异（P＞0.05），治疗后两组患者的CEA、CA199、CA125水平均降低，并且实验组患者降低幅度大于常规组（P＜0.05）；实验组患者的手术时间、出血量、住院时间、输血率少于或小于常规组患者相应指标（P＜0.05）；治疗前两组患者的PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ水平无差异（P＞0.05），治疗后两组患者的PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ水平均升高，PGⅡ水平降低，实验组患者变化幅度大于常规组（P＜0.05）；实验组复发率与常规组比较无差异（P＜0.05）。结论：胃肠ESD治疗早期胃癌患者的效果较为理想，可有效改善血清蛋白酶原及肿瘤标志物水平，具有出血量少、手术时间短等优势，同时还可降低并发风险，可在此类疾病治疗中应用并推广。     

胶体果胶铋胶囊联合维酶素片对慢性萎缩性胃炎患者血清胃蛋白酶原和炎症因子的影响

摘要 目的：观察胶体果胶铋胶囊联合维酶素片对慢性萎缩性胃炎（CAG）患者血清胃蛋白酶原和炎症因子的影响。方法：选取重庆大学附属涪陵医院于2019年4月~2021年3月期间收治的CAG患者98例,按照双色球法将患者分别对照组（n=49）和实验组（n=49）,对照组、实验组患者分贝接受维酶素片、胶体果胶铋胶囊联合维酶素片治疗,两组均治疗4周。观察两组疗效和血清胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）、胃泌素-17（G-17）、白细胞介素-6（IL-6）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化情况,记录两组用药安全性。结果：经治疗,对照组的临床总有效率为71.43%,低于实验组的93.88%（P<0.05）。治疗结束后,两组PGⅡ较治疗前下降,PGⅠ、G-17均较治疗前升高（P<0.05）,且实验组的PGⅠ、PGⅡ、G-17变化更为明显（P<0.05）。治疗结束后,两组炎性因子指标：IL-6、hs-CRP、sIL-2R、TNF-α均较治疗前下降（P<0.05）,且实验组的炎性因子指标变化更为明显（P<0.05）。两组不良反应发生率组间对比无差异（P>0.05）。结论：胶体果胶铋胶囊联合维酶素片治疗CAG患者,具有显著的治疗效果,可有效调节机体胃黏膜相关和炎症因子水平,且不增加不良反应发生率,临床应用价值较好。     

血清PCT、presepsin和Gas6对老年慢性心力衰竭合并肺部感染患者病情及预后的评估价值

摘要 目的：探讨血清降钙素原（PCT）、白细胞分化抗原14亚型（presepsin）联合生长停滞特异性基因产物6（Gas6）对老年慢性心力衰竭（CHF）患者合并肺部感染患者病情及预后的评估价值。方法：412例老年CHF患者根据有无合并肺部感染分为肺部感染组（n=176）和无肺部感染组（n=236）,另选取同期体检健康的40例健康体检者作为健康对照组,比较三组血清PCT、presepsin、Gas6水平。统计住院28 d内老年CHF合并肺部感染患者的预后情况,根据预后不同分为死亡组（n=37）和生存组（n=139）,多因素Logistic回归模型分析老年CHF合并肺部感染患者死亡的危险因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清PCT、presepsin联合Gas6对老年CHF合并肺部感染患者死亡的预测价值。结果：肺部感染组和无肺部感染组血清PCT、presepsin、Gas6水平均高于健康对照组,且肺部感染组高于无肺部感染组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,年龄偏高、心功能分级Ⅳ级、PCT升高、presepsin升高、Gas6升高均是导致老年CHF合并肺部感染患者死亡的独立危险因素（P＜0.05）。ROC结果显示,血清PCT、presepsin、Gas6单独及联合检测对预测老年CHF合并肺部感染患者死亡风险的AUC分别为0.663、0.731、0.751、0.855,三指标联合检测的预测效能优于各指标单独检测。结论：血清PCT、presepsin及Gas6水平在老年CHF合并肺部感染患者中升高,且是短期预后不良的独立危险因素,检测PCT、presepsin及Gas6水平对老年CHF合并肺部感染患者病情及预后具有一定评估价值。     

壳聚糖酶的克隆表达与壳寡糖的制备分析

目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖。方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21(DE3)。重组子经0.5 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和质谱检测与鉴定重组酶。酶纯化后水解壳聚糖,薄层色谱分析其水解产物。结果:质谱证明壳聚糖酶(31.5kDa)成功表达,表达量占菌体总蛋白的45%左右。纯化后重组酶浓度为900 mg/L,纯度95%、回收率85%,酶活力为10 000 U/mg。壳聚糖降解产物为壳二糖至壳四糖。结论:原核表达载体pET23a(+)-CSN构建正确,壳聚糖酶表达量与活性高,适用于水解壳聚糖制备壳寡糖。     

国内外蝗害治理技术现状与展望

本文首先概述了国内外蝗虫发生与为害的态势,总结了现阶段我国蝗虫发生与为害的主要特点:即农田飞蝗暴发频繁而且严重,草原土蝗的发生时常造成严重的经济损失,而且侵入城市干扰市民生活,我国与周边国家之间蝗虫过境迁移频繁,使用化学农药污染环境和农产品;分析了国内外蝗虫防治对策与技术的发展现状,重点介绍了应急防治和可持续治理对策、...     

放牧对牧草光合作用、呼吸作用和氮、碳吸收与转运的影响

研究放牧对草地植物生理活动的影响,对于揭示草地放牧演替的生理机制有重要意义.大量研究表明,家畜放牧对牧草光合作用、呼吸作用以及C和N吸收与转运的影响,可以分为生理伤害和生理恢复2个阶段.放牧通过改变草地冠层结构影响牧草光合作用,净光合作用速率短期内迅速下降,随着叶面积指数增加又逐渐上升,呼吸作用有相似的变化趋势.牧草放牧后再生长所需的C和N最初主要来自根系和留茬中的贮藏物质,此后随着牧草生长恢复逐渐由同化作用供给,C代谢与土壤N水平负相关.放牧后牧草生理活动变化与牧草遗传特性、种间竞争、家畜放牧特征、非生物环境等因素密切相关.     

Kinetics and thermodynamics of peroxidase- and laccase-catalyzed oxidation of N-substituted phenothiazines and phenoxazines

N -substituted phenothiazines (PTs) and phenoxazines (POs) catalyzed by fungal Coprinus cinereus peroxidase and Polyporus pinsitus laccase were investigated at pH 4–10. In the case of peroxidase, an apparent bimolecular rate constant (expressed as k _cat/K _m) varied from 1 ×10⁷M⁻¹s⁻¹to 2.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ at pH 7.0. The constants for PO oxidation were higher in comparison to PT. pH dependence revealed two or three ionizable groups with pK _a values of 4.9–5.7 and 7.7–9.7 that significantly affected the activity of peroxidase. Single-turnover experiments showed that the limiting step of PT oxidation was reduction of compound II and second-order rate constants were obtained which were consistent with the constants at steady-state conditions. Laccase-catalyzed PT and PO oxidation rates were lower; apparent bimolecular rate constants varied from 1.8×10⁵M⁻¹s⁻¹ to 2.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ at pH 5.3. PO constants were higher in comparison to PT, as was the case with peroxidase. The dependence of the apparent bimolecular constants of compound II or copper type 1 reduction, in the case of peroxidase or laccase, respectively, was analyzed in the framework of the Marcus outer-sphere electron-transfer theory. Peroxidase-catalyzed reactions with PT, as well as PO, fitted the same hyperbolic dependence with a maximal oxidation rate of 1.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ and a reorganization energy of 0.30 eV. The respective parameters for laccase were 5.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ and 0.29 eV. Received: 20 September 1999 / Accepted: 24 February 2000     

Coiled-coil nanomechanics and uncoiling and unfolding of the superhelix and alpha-helices of myosin

The nanomechanical properties of the coiled-coils of myosin are fundamentally important in understanding muscle assembly and contraction. Force spectra of single molecules of double-headed myosin, single-headed myosin, and coiled-coil tail fragments were acquired with an atomic force microscope and displayed characteristic triphasic force-distance responses to stretch: a rise phase (R) and a plateau phase (P) and an exponential phase (E). The R and P phases arise mainly from the stretching of the coiled-coils, with the hinge region being the main contributor to the rise phase at low force. Only the E phase was analyzable by the worm-like chain model of polymer elasticity. Restrained molecular mechanics simulations on an existing x-ray structure of scallop S2 yielded force spectra with either two or three phases, depending on the mode of stretch. It revealed that coiled-coil chains separate completely near the end of the P phase and the stretching of the unfolded chains gives rise to the E phase. Extensive conformational searching yielded a P phase force near 40 pN that agreed well with the experimental value. We suggest that the flexible and elastic S2 region, particularly the hinge region, may undergo force-induced unfolding and extend reversibly during actomyosin powerstroke.     

白术同源四倍体的诱导和鉴定及其与二倍体过氧化物酶的比较

以白术（Atractylodes macrooephala Koidz.）二倍体组培苗为材料,对其四倍体诱导方法进行研究,共获得45个白术同源四倍体株系,为优良株系的选育提供了材料。此外,还分析比较了其中8个白术四倍体株系与二倍体的过氧化物酶同工酶（POD）的酶谱差异,发现四倍体各株系过氧化物酶同工酶谱比二倍体的均多了Rf0.310的谱带,且总过氧化物酶比活力也发生了很大改变,对探讨白术四倍体优良株系的生理生化机理具有一定的参考价值。     

Synthesis of hapten and conjugates of coumestrol and development of immunoassay

3-O-Carboxymethylcoumestrol was prepared as the hapten for immunoassay by a partial alkylation of coumestrol with ethyl chloroacetate in acetone alkalized with potassium carbonate. 3-O-Ethoxycarbonylmethylcoumestrol was separated by column chromatography and finally was hydrolyzed with formic acid. 1H and 13C NMR data (APT, COSY, HMQC, and HMBC) revealed that the reaction was regioselective, as 3-O-ethoxycarboxymethylcoumestrol was the only monosubstituted derivative. The hapten was then conjugated to bovine serum albumin and used for immunization of rabbits. A radioimmunoassay (RIA) system was established based on the polyclonal antiserum and a 125I-labeled hapten-tyrosine methyl ester conjugate as the radioligand. Parameters of the RIA: sensitivity: 12 pg per tube, 50% intercept: 140 pg per tube, working range: 20-4000 pg per tube. The cross-reactivity of a panel isoflavonoid and lignan phytoestrogens was either negligible (e.g. formononetin 0.07%; biochanin A 0.06%) or not detectable at all. The major immunoreactive peak in HPLC fractions from an alfalfa extract had the same retention time as coumestrol standard and represented 94.8% of the signal. The remaining 5.2% of immunoreactivity was distributed between five minor peaks. We conclude that after the validation for particular matrices, the method will be a useful tool for analysis of coumestrol, especially in low volume and low concentration samples.