犬骨髓分化细胞种植人工血管体内植入实验研究

目的:骨髓分化细胞预种植,探讨增强人工血管内皮化方法.方法:选取选杂种犬8条.每组实验犬2条.实验犬采自体骨髓,定向分化提取培养为内皮细胞,种植人工血管内膜表面.对照犬采用血清和培养基预凝支架.将人工血管重建犬右室流出道,于术后第1、3月观察植入的人工血管通畅情况,采用免疫组织化学方法鉴定细胞,在光镜和电镜下观察人工血管新生内膜表面内皮化情况.结果:骨髓细胞分化后鉴定,第2带细胞CD34染色阳性,第5代细胞CD31、Ⅷ因子染色阳性.细胞种植人工血管7天内皮细胞覆盖.光镜观察植入后1月实验组部分内皮化.对照组无内皮细胞覆盖;术后第3月实验组基本实现内皮化,对照组少量内皮细胞覆盖,存在钙化灶.1月实验组扫描电镜显示细胞排列紧密,对照组细胞少,有少量血栓附着;3月实验组血管表面细胞排列成片,对照组部分覆盖.结论:骨髓细胞定向分化所获取为内皮细胞.内皮细胞种植于去细胞后牛颈静脉血管,可获得较理想的内皮化,减少体内不良反应发生.     

脱细胞牛颈静脉内皮细胞黏附实验研究

目的:探讨去细胞处理后牛颈静脉血管片表面改性方法,增加内皮细胞在材料表面的黏附生长.方法:选取三种表面预衬组分:纤维连接蛋白(Fibronectin)单纯组,纤维连接蛋白+Ⅳ型胶原+明胶混合组,磷酸缓冲液空白组,采用物理包裹法.剪取多步骤去垢剂-酶消化法脱细胞处理的牛颈静脉片,无茵下静态培养7天,标本血管片表面细胞记数,切片染色,扫描电镜检测,比较不同组分预衬对细胞黏附生长的影响.结果:混合组在选取时间点表面细胞数目最多,单纯组次之.第7天HE染色结果显示混合组细胞连接成片,呈单层排布;单纯组表面细胞少量细胞黏附;对照组基本无细胞.扫描电镜显示:单纯组血管片表面细胞稀疏,细胞间无桥接,与下方的纤维结构联结不明显,数目较少;混合预衬组铺连成片,细胞间长梭形有桥接和突起,与去细胞的血管片纤维之间形成连接.结论:去细胞处理的牛颈静脉血管片可生长内皮细胞.经过纤维连接蛋白单独预衬处理的血管片表面,可增强内皮细胞黏附和贴壁生长,三组分混合预衬增强细胞黏附性及贴壁生长方面效果更好.