蝉花虫草活性成分的抗惊厥作用

本研究采用活性追踪的方法,逐步从人工培养蝉花虫草分离获得A（50%乙醇回流提取）、B（膜分离）、C（大孔树脂洗脱）和D（Sephadex LH20柱纯化）等4种样品,单一化合物D纯度为98.62%,鉴定为N6‐(2‐羟乙基)腺苷[N6‐(2‐hydroxyethyl)‐adenosine,HEA]。研究各样品对戊四唑（pentylenetetrazol,PTZ）诱导的小鼠惊厥模型的影响,以及选择性腺苷A1受体（AA1R）拮抗剂DPCPX或选择性腺苷A2A受体（AA2AR）拮抗剂ZM241385对HEA作用的影响,并采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色、免疫组化（immunohistochemical,IHC）染色和蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）等技术进一步探究HEA抗惊厥作用的机制。结果表明,各样品（i.p.）均有抗惊厥活性,HEA（40–60mg/kg,i.p.）能显著延长惊厥小鼠的存活时间和降低死亡率,DPCPX（2mg/kg,i.p.）能够拮抗HEA的抗惊厥作用,而ZM241385无此作用;HE、IHC和WB的结果进一步揭示DPCPX显著降低HEA的作用。综上所述,蝉花虫草的HEA具有抗惊厥作用,并且可能通过激活腺苷A1受体而起作用。     

腺苷和睡眠觉醒调节

腺苷作为神经调质,调节多种神经生物学功能.随觉醒时间延长,动物脑内腺苷水平逐渐增高,在睡眠期显著降低.因此,腺苷被认为是调节睡眠的内稳态因子之一.腺苷受体(receptor,R)有A1R、A2AR、A2BR和A3R四种亚型,其中A1R和A2AR与诱导睡眠相关.激活A1R可抑制促觉醒神经元诱导睡眠,也可抑制促眠神经元导致...     

腺苷A2A受体参与基底神经节间接通路运动调节的研究进展

运动功能是在神经系统的调控下完成的,皮层及基底神经节在运动功能调节中发挥信息整合及指令发放的作用,其中纹状体是基底神经节中接受传入信息的主要核团。腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor, A2AR)在纹状体中高度表达,并在纹状体中整合多巴胺、谷氨酸和大麻素信号,参与间接通路运动抑制的信息编码。该文阐述了腺苷A2AR与多巴胺D2受体、代谢型谷氨酸mGlu5受体以及大麻素CB1受体的交互作用,探讨腺苷表达异常在神经疾病,如帕金森病、酒精成瘾等产生的作用,以及靶向干预腺苷改善相关疾病运动功能的机制,并对A2AR在间接通路运动调控及相关运动障碍中的研究进行总结,为后期运动功能中枢靶向干预提供理论参考。     

广义虫草类真菌来源的N~6‐(2‐羟乙基)腺苷的研究开发现状与思考

N~6-(2-羟乙基)腺苷(简称HEA)是虫草菌丝体中得到的第一个生物来源的钙离子拮抗剂,具有抑制癌细胞生长、降低炎症反应、保护肾脏、镇静、镇痛和抗惊厥等多种功效,已经成为一个研究热点。本文对HEA的菌株来源、生理功能、生物合成、提取纯化、化学合成的研究现状等方面进行了总结,对有关专利进行了评价和分析,提出从种质资源入手拓宽HEA来源,优化HEA的提取纯化方法,并深入探究其生物合成途径,为HEA的深入研究和开发应用提供指导。     

纹状体A2AR/D2DR拮抗效应在运动功能调节中的研究进展

纹状体是运动调控的关键组成部分,对机体运动控制发挥重要作用。腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor, A2AR)与多巴胺D2受体(dopamine D2 receptor, D2DR)在纹状体投射到苍白球的神经元中高度共表达,形成的A2AR/D2DR异聚体具有拮抗效应,共同调节纹状体接收到的谷氨酸能和多巴胺能投射,通过改变纹状体神经元的活性,控制投射向下级核团的GABA能输出,调节基底神经节直接通路和间接通路的平衡,最终对运动产生影响。A2AR/D2DR在细胞水平以及行为水平上的拮抗效应,为其在运动疲劳和帕金森病的运动功能改善上提供了新的靶点。该文将对A2AR/D2DR拮抗效应在运动功能调节中的研究进行综述,为后期研究运动的中枢干预靶点提供新的可能性。     

五种虫草无性型菌株产腺苷类物质的分析

采用分光光度计法对虫草菌丝体中腺苷类组分的提取方法进行研究,采用薄层层析法和高效液相色谱法对虫草菌丝体中的腺嘌呤、腺苷、虫草菌素、N6-(2-羟乙基)腺苷等4种物质进行定性和定量分析。结果表明,虫草菌丝体中腺苷类组分的提取方法采用蒸馏水超声波提取30min效果较好,所测5种虫草菌株都能产腺苷和腺嘌呤,在蛹草拟青霉菌株中含有虫草菌素,在粉被玛利亚霉和蝉拟青霉菌株中含有N6-(2-羟乙基)腺苷,同时发现N6-(2-羟乙基)腺苷的累积与培养时间有一定关系。     

蝉花虫草提取物N~6-(2-羟乙基)腺苷对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

研究蝉花虫草提取物N~6-(2-羟乙基)腺苷[N~6-(2-hydroxyethyl)-adenosine,HEA]对小鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion,IR)的影响。选择20–25g雄性C57BL/6小鼠,随机分成5组。假手术组小鼠仅接受腹中线开腹、游离双侧肾蒂及缝合腹部操作;IR组小鼠制成肾脏IR模型,不给药;HEA低剂量组、HEA中剂量组、HEA高剂量组分别在建立肾脏缺血再灌注模型前15min腹腔注射HEA(2.5mg/kg、5mg/kg和7.5mg/kg)。再灌注24h后检测各组肾功能指标血清肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平。苏木精-伊红染色后用光学显微镜观察肾脏组织形态学改变。电镜和TUNEL分析法观察肾小管上皮细胞凋亡状况。实时荧光定量RT-PCR检测细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等基因的m RNA的表达情况。结果显示,与假手术组比较,IR组BUN和Scr水平明显升高(P0.01,P0.05);肾脏病理表现为上皮细胞碎片和管型,且最为严重;与IR组比较,HEA 7.5mg/kg组血清BUN和Scr水平显著降低(P0.05);HEA 5mg/kg组和HEA 7.5mg/kg组肾损伤情况明显改善(P0.05,P0.01);电镜观察可知HEA 7.5mg/kg组明显改善肾小管上皮细胞的损伤程度,并且保护线粒体和细胞核膜的完整性。原位末端标记法[terminal dexynucleotidyl transferase(Td T)-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL]显示HEA治疗组凋亡细胞数量明显低于IR组(P0.01)。HEA治疗组ICAM-1、IL-1β和TNF-αm RNA的水平均低于IR组(P0.01)。所以预处理HEA 7.5mg/kg对肾脏缺血再灌注有保护作用。     

FGF受体-1和FGF受体-2介导成纤维细胞生长因子-21信号传导

成纤维细胞生长因子-21是FGF家族成员,FGF-21与其他FGF家族成员不同,它没有促进细胞分裂的作用,但具有很强的调节血糖作用.本实验旨在系统研究FGF-21的功能受体,以及配体/受体的作用机制,为深入研究FGF-21的生物功能,加快FGF-21从基因到药物的转变奠定理论基础.前期实验表明,FGF-21促进3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢,对前脂肪细胞无作用,说明3T3-L1脂肪细胞表达FGF-21功能受体.本文以3T3-L1脂肪细胞为靶标,深入研究FGF-21的功能受体.在FGF-21作用下3T3-L1脂肪细胞中的FGF受体1(R1)和FGF受体2(R2)形成特异性异源二聚体.脂肪细胞经FGF-21处理后,R1和R2均迅速发生磷酸化,表明两个受体均被FGF-21激活.siRNA干涉实验表明,抑制R1和R2功能可以抑制FGF-21处理后3T3-L1脂肪细胞Glut1的表达水平,揭示了FGF-21通过R1和R2上调3T3-L1脂肪细胞中Glut1的表达.免疫印迹结果表明,FGF-21可以介导3T3-L1脂肪细胞表面R1和R2的内吞.克隆后测序分析结果表明,3T3-L1脂肪细胞表达的FGF受体为FGFR-1Ⅲc和FGFR-2Ⅲc.结果表明,FGFR-1Ⅲc和FGFR-2Ⅲc是FGF-21的功能受体,参与FGF-21在脂肪细胞中介导的糖代谢活性的信号传导.     

抑制CYP4A11基因表达的siRNAs优选及对血管收缩相关因子的影响

为了考察人细胞中细胞色素P450 4A11(CYP4A11)表达受抑制之后是否会影响血管相关收缩因子的表达,在线设计多个抑制细胞中代谢酶编码基因CYP4A11表达的siRNAs并通过BLAST验证;选择效果好的3对siRNAs合成并转染至EA.hy926细胞株,通过荧光染色和定量多聚酶链反应(quantitative polumerase chain reaction,qPCR)初步检测后,再采用表达量相对更高的MG63细胞系进行验证,发现25 nmol/L的siRNA2抑制效果最好;随后使用25 nmol/L siRNA2抑制CYP4A11在EA.hy926细胞株中的表达,并通过qPCR与Western-blot检测血管收缩相关因子的表达情况,发现促血管收缩相关因子内皮素1受体(endothelin 1 receptor,ET1R)、血管紧张素1型受体(angiotensin type 1 receptor,AT1R)表达下调(P0.05),而内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达显著上调(P0.001)。因此,siRNA2能通过显著抑制EA.hy926细胞中CYP4A11的表达,调节血管紧张的相关指标,有促血管松弛作用的趋势。     

LC-MS分析CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢组的影响

Sucrose-nonfermenting1(SNF1)蛋白激酶调节大量基因的转录,改变代谢酶的活性,并控制各种营养反应性细胞发育过程。本研究通过LC-MS非靶向代谢组学技术比较蛹虫草Cordyceps militaris野生型菌株Cm01和CmSnf1基因过表达菌株菌丝体的化学成分,从整体代谢物水平阐明CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢产物积累的影响。研究表明：CmSnf1基因过表达后,在LC-MS正负离子模式下检测出547种差异代谢物,同野生型菌株相比,220种产物上调和327种下调。尤其显著的是黄酮类物质2-香叶基-3,4,2′,4′-四羟基二氢查耳酮上调了140.55倍,甘油磷脂代谢中的磷脂酰丝氨酸(PS)下调了47.53倍。差异代谢产物参与甘油脂代谢、氨基酸生物合成和降解、半乳糖代谢、丙酮酸和酮类化合物代谢等多种途径。CmSnf1过表达菌株与野生型相比在酮类化合物代谢上具有优势,推测CmSnf1基因在蛹虫草药用功效中发挥着重要的作用。