As_2O_3干预口腔鳞癌A431细胞EGFR表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人口腔鳞癌A431细胞生长的抑制作用,探讨其抗肿瘤的机制。方法：合成特异性靶向到肿瘤细胞表面表皮生长因子受体（EGFR）的近红外荧光分子对比剂EGF-Cy5.5,验证试剂合成的靶向特异性。口腔鳞状细胞癌A431细胞系暴露于浓度分别为0μM,0.5μM,2.5μM和5.0μM的三氧化二砷溶液中0,24 h,48 h和72 h。共聚焦显微镜、流式细胞仪及免疫组化证实EGFR的表达水平,上述实验均测量三次,结果取平均值。结果：EGF-Cy5.5靶向荧光对比剂的标记率为68%~70%。对比对照组,越高浓度的三氧化二砷处理的肿瘤细胞其获得的细胞荧光信号强度越小,这与药物浓度越高细胞表面表达EGFR的量越少相一致。流式细胞仪显示,在72小时,作用于细胞的三氧化二砷药物浓度分别为0.5μM,2.5μM,和5.0μM,其相对应获得的细胞EGFR表达量分别为57.28±3.2%（P〈0.05）,29.91±2.2%（P〈0.01）和10.73±2.4%（P〈0.01）,明显低于对照组的细胞EGFR表达量74.42±1.8%,（P〈0.05）。结论：本研究应用近红外荧光分子成像的方法体外检测口腔鳞状细胞癌A431的EGFR表达水平,实验证明三氧化二砷对其EGFR具有明显的抑制作用,且抑制作用具有时间-剂量依赖性。     

靶向EGFR二聚化界面单链抗体的构建及表达

[目的]构建靶向EGFR二聚化界面的单链抗体。[方法]构建单链抗体的基因并进行密码子优化,克隆于表达载体p GAPZα-A和毕赤酵母X-33。镍柱纯化目的蛋白,并对EGFR高表达细胞A431和EGFR正常表达细胞NIH-3T3进行体外抑制分析和抗磷酸化分析。[结果]纯化获得了分子量大小约29. 0 k Da的EGFR dimer Sc Fv蛋白。在48h体外抑制实验中,534 nmol/L EGFR dimer Sc Fv对A431和NIH-3T3的抑制率分别为34. 92±1. 30%和5. 89±0.46%,抑制作用与母本抗体相似。Western Blotting分析表明,EGFR dimer Sc Fv能显著抑制A431细胞EGFR磷酸化,而对NIH-3T3细胞显著无抑制作用。[结论]初步验证了靶向EGFR二聚化界面的单链抗体作为新型抗体药物的可行性,为后续研究奠定了基础。     

IL-18通过调节TRPV4/Smad7信号通路促进皮肤鳞状细胞癌的增殖

目的:探讨白介素18(Interleukin-18,IL-18)对皮肤鳞状细胞癌(Cutaneous Squamous Cell Carcinoma,CSCC)增殖的影响及可能分子机制。方法:采用外源性IL-18刺激皮肤鳞状细胞癌A431细胞和Colo-16细胞24 h、48 h和72 h,通过CCK-8检测细胞的增殖能力;48 h后qRT-PCR和Western blot检测刺激前后瞬时感受器电位离子通道家族蛋白4(Transient Receptor Potential Vanilloid 4,TRPV4)和Smad7以及p-Smad7的表达。外源性IL-18刺激皮肤鳞状细胞癌A431细胞和Colo-16细胞12 h后,采用TRPV4激动剂G3给药处理A431细胞和Colo-16细胞36 h,通过MMT检测细胞增殖能力,qRT-PCR和Western blot检测刺激前后TRPV4的表达和Smad7以及p-Smad7的表达。结果:外源性IL-18刺激A431细胞和Colo-16细胞可显著促进其增殖,抑制TRPV4的表达而激活p-Smad7的表达;TRPV4激动剂G3可以部分抵消外源性IL-18对A431细胞和Colo-16细胞的增殖作用。结论:IL-18可能通过下调TRPV4激活Smad7信号通路促进皮肤鳞状细胞癌增殖作用。     

基于对JNK信号通路的调控探讨齐墩果酸对食管癌细胞凋亡的影响

摘要 目的：本研究通过对JNK信号通路的调控来探讨齐墩果酸( oleanolic acid,OA) 对食管癌细胞凋亡的影响。方法：对食管癌细胞EC109进行培养,以MTT法分析不同浓度齐墩果酸对食管癌细胞EC109的生长抑制作用,采用流式细胞术考察齐墩果酸对EC109细胞凋亡的影响,以Western blot实验检测JNK通路蛋白的表达情况。结果：不同浓度齐墩果酸作用Eca109细胞48 h后,均有显著的抑制作用（P<0.05）,且随着齐墩果酸浓度的增加,对Eca109的抑制作用逐渐增强。与对照组相比,各浓度OA组的Eca109细胞的凋亡率分别为8.03±0.34 %,12.82±0.28 %,19.34±0.79 %和32.21±0.81 %,均显著增加（P<0.05）,且随着OA浓度的增加,细胞凋亡率显著升高。与对照组相比,不同浓度OA组的P-JNK、Bak、Bax表达量均显著升高（P<0.05）,Bcl-2表达量显著降低（P<0.05）,JNK表达量无显著差异（P>0.05）,对OA组(1.2 mmol/L)相比,OA组(2.4 mmol/L) Bak、Bax表达量均显著升高（P<0.05）,Bcl-2表达量显著降低（P<0.05）,P-JNK、JNK表达量无显著差异（P>0.05）。结论：齐墩果酸能通过对JNK信号通路的调控促进食管癌细胞的凋亡,且随着浓度的增强,细胞凋亡率显著升高。     

三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用及其FOXO1表达的影响

本研究探讨三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的生长及迁移等作用的抑制作用以及对FOXO1的表达的影响。不同浓度三氧化二砷作用人乳腺癌MCF-7细胞后,利用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡的变化;通过划痕实验和transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化;通过荧光定量PCR和Western blotting检测FOXO1基因和蛋白水平表达的变化。结果显示不同浓度的三氧化二砷能够抑制细胞生长、迁移及侵袭,诱导细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性;并且三氧化二砷可以上调FOXO1基因和蛋白水平的表达。因此三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用可能与上调抑癌基因FOXO1表达有关。     

二萜化合物Rabdocoetsin B抑制蛋白酶体功能并诱导t(8;21)白血病细胞凋亡

从香茶菜属植物细锥香茶菜中分离得到的二萜类化合物Rabdocoetsin B(Rabd-B),研究其对人类t(8;21)白血病细胞凋亡的诱导作用及其对蛋白酶体19S泛素识别亚基S6’(Rpt5)的抑制作用,为Rabd-B应用于t(8;21)白血病治疗提供实验依据。以不同浓度的Rabd-B处理t(8;21)白血病Kasumi-1细胞,应用CCK-8法检测细胞活力,用Bliss法计算IC50值,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以稳定表达pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞作为蛋白酶体抑制剂筛选模型,荧光显微镜成像拍照GFP荧光。Western blotting检测不同浓度的Rabd-B处理Kasumi-1,检测Casp-3、S6’(Rpt5)、PARP、ubiqutin在该细胞内的表达变化。结果显示,Rabd-B明显抑制t(8;21)阳性的Kasumi-1细胞生长,48 h的IC50值为1.27μmol/L;同时诱导Kasumi-1细胞凋亡效果显著;荧光显微镜观察药物处理和未处理的pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞Ub-GFP表达,结果显示GFP平均荧光值随药物浓度增高而增强;Rabd-B处理Ka...     

BPA 激活 GPER-EGFR-ERK1 /2 信号通路诱导乳腺癌细胞增殖

目的:研究雌激素G蛋白偶联受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)-表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)-细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路在双酚A促乳腺癌细胞SKBR-3增殖中的作用。方法:采用CCK8试剂盒检测SKBR-3细胞的增殖情况,利用Western Blot观察ERK1/2磷酸化变化。结果:与对照组相比,10-11~10-7 M浓度的双酚A具有促乳腺癌细胞增殖作用,10-9M浓度的双酚A可诱导细胞增殖最大效应(细胞活力高于对照组约38.84%,P<0.001);预孵GPER、EGFR、ERK1/2特异性抑制剂G15、AG-1478、PD98059后,双酚A诱导的乳腺癌细胞增殖明显减少,细胞活力与单纯双酚A(10-9 M)处理相比降低约14.27%、12.23%和17.98%(P<0.05);双酚A(10-9 M)处理细胞0.5、1、3小时后,发现磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达明显高于对照组,双酚A可快速激活ERK1/2;而阻断GPR30和EGFR后,ERK1/2的磷酸化表达减少。结论:双酚A诱导的乳腺癌细胞增殖可能与GPR30-EGFR-ERK1/2信号通路有关,但不是唯一通路。深入研究双酚A对促进乳腺癌细胞增殖机制,可能为乳腺癌的防治提供新的方向。     

EGFR靶向的PET/SPECT分子成像研究进展

恶性肿瘤的发病率及死亡率逐年递增,分子靶向治疗为癌症治疗带来了新的革命,表皮生长因子受体(EGFR)在癌症发生、发展中发挥重要作用,针对EGFR的分子靶向治疗已成为近年研究热点。目前,已有多种EGFR分子靶向药物应用于临床,但总体有效率偏低。研究表明EGFR过表达和/或突变对治疗效果影响显著,因此治疗前准确评价肿瘤EGFR表达水平及突变状态显得尤为重要。分子成像能够实现活体细胞及分子水平生物学过程成像,并进行定性定量研究,使在体揭示EGFR表达状态成为可能。本文简述EGFR靶向分子成像的研究进展并对不同分子探针成像结果进行比较分析,对不同分子成像探针的功能进行评价,以期有益于EGFR靶向分子成像探针的研发及EGFR靶向分子成像研究。     

口腔鳞状细胞癌患者术后病变区菌群分析

摘要：目的 研究口腔鳞状细胞癌患者术后病变区菌群变化。方法 选择2017年12月至2018年12月于我院进行治疗的80例口腔鳞状细胞癌患者为研究对象,测定入选患者术前和术后第14天口腔病变中心区细菌检出率、构成比和数量。结果 患者术前病变区链球菌属的构成比（67.63%）和检出率（93.89%）最高,其次为葡萄球菌属、奈瑟菌属和普氏菌属。检出细菌数量为（4.06±0.42）~（5.49±0.53）CFU/cm2。患者术后病变区链球菌属的构成比（75.48%）和检出率（81.45%）最高,其次为普氏菌属、韦荣菌属、葡萄球菌属。检出细菌数量为（2.76±0.39）~（4.54±0.63）CFU/cm2。患者手术前后奈瑟菌属和梭杆菌属的检出率和数量差异有统计学意义（P<0.05）,二氧化碳噬纤维菌属数量和细菌总量差异有统计学意义（P<0.05）,而病变区各细菌构成比差异无统计学意义（P>0.05）。结论 口腔鳞状细胞癌患者术后链球菌属的构成比和检出率最高,未检测出梭杆菌属和奈瑟菌属细菌。     

三氧化二砷脂质体透过载瘤大鼠血脑屏障的实验研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）脂质体通过载瘤大鼠血脑屏障（BBB）的效果。方法：超声薄膜分散法制备三氧化二砷脂质体,建立药物标准曲线,检测包封率;立体定向技术建立C6／Wistar大鼠脑胶质瘤模型;取Wistar雄性载瘤大鼠84只,随机分为三氧化二砷脂质体组和三氧化二砷组,分别经静脉注射三氧化二砷脂质体和三氧化二砷注射液,给药后0．5h、1h、2h、4h、8h、16h、24h取大鼠脑组织冻存,应用双道原子荧光法检测载瘤大鼠脑组织中的砷含量。结果：制备稳定的三氧化二砷脂质体,包封率分别为92、2％,92．2％,92．3％;As2O3脂质体组及As2O3给药后7个时间点鼠脑组织中砷含量（μg／L）分别为：341．09&#177;18．18,523、98&#177;27．36,475．19&#177;15、52,467.02&#177;22．46,471．52&#177;24．38,382.30&#177;13．26,282．47&#177;19．71;99.93&#177;17.10,148.07&#177;26、21,101.78&#177;17．54,89．09&#177;19．41,74.39&#177;13．85,50．44&#177;15.31,51．52&#177;19．23。比较给三氧化二砷组及给三氧化二砷脂质体组载瘤大鼠脑组织中砷含量有显著差异（P〈0．05）。结论：三氧化二砷脂质体对血脑屏障的透过性明显优于单纯砷剂。     

Near Infrared Imaging of EGFR of Oral Squamous Cell Carcinoma in Mice Administered Arsenic Trioxide

Background

The effectiveness of near-infrared imaging (NIR) interrogation of epidermal growth factor receptor (EGFR) expression as a sensitive biomarker of oral squamous cell carcinoma (OSCC) response to arsenic trioxide therapy was studied in mice.

Material and Methods

A431 OSCC in vitro were exposed to 0 µM, 0.5 µM, 2.5 µM, or 5 µM of As₂O₃ for 0 h, 24 h, 48 h and 72 h. Confocal microscopy and flow cytometry confirmed EGFR expression and demonstrated a sensitivity dose-related signal decline with As₂O₃ treatment. Next, mice with pharynx-implanted A431 cells received As₂O₃ i.p. every 48 h at 0.0, 0.5, 2.5, or 5 mg/kg/day (n = 6/group) from day 0 to 10. An intravenous NIR probe, EGF-Cy5.5, was injected at baseline and on days 4, 8, and 12 for dynamic NIR imaging. Tumor volume and body weights were measured three times weekly.

Results

In vitro, A431 EGFR expression was well appreciated in the controls and decreased (p<0.05) with increasing As₂O₃ dose and treatment duration. In vivo EGFR NIR tumor signal intensity decreased (p<0.05) in As₂O₃ treated groups versus controls from days 4 to 12, consistent with increasing dosage. Tumor volume diminished in a dose-related manner while body weight was unaffected. Immunohistochemical staining of excised tumors confirmed that EGFR expression was reduced by As₂O₃ treatment in a dose responsive pattern.

Conclusion

This study demonstrates for the first time that OSCC can be interrogated in vivo by NIR molecular imaging of the EGFR and that this biomarker is effective for the longitudinal assessment of OSCC response to As₂O₃ treatment.     

EPA诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及端粒酶活性调控机制研究

目的:探究二十碳五烯酸(Eicosa Pentaenoic Acid.EPA)对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡、端粒逆转录酶h TERT的调控作用及端粒酶表达活性的影响。方法:体外培养SMMC-7721人肝癌细胞,用不同浓度的EPA(0μM、25μM、50μM、100μM、200μM)作用于SMMC-7721肝癌细胞(24 h、48 h、72 h)后,显微镜下观察其形态学变化;应用MTT法检测SMMC-7721肝癌细胞细胞增殖变化情况;Western-blot法检测h TERT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平变化;Real Time-PCR检测h TERTm RNA的表达变化;ELISA法检测SMMC-7721肝癌细胞端粒酶活性的表达水平。结果:EPA可诱导肝癌细胞SMMC-7721发生细胞凋亡,具有明显的时间计量依赖关系。在此过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白表达上调,同时端粒酶逆转录酶h TERT蛋白及其m RNA的表达水平和端粒酶活性均明显降低。结论:抑制端粒酶逆转录酶基因(h TERTm RNA)表达而抑制端粒酶的活性、诱导癌细胞凋亡,可能是EPA的抗癌作用机制之一。     

EGCG对H2O2诱导HLE细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨表没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人晶状体上皮(human lens epithelial,HLE)细胞氧化损伤的保护作用及可能机制。方法:HLE细胞传代培养,分为阴性对照组:以正常培养液培养;氧化损伤组:100μmol·L~(-1)的H_2O_2作用12 h;EGCG低浓度组:10μmol·L~(-1)EGCG孵育24 h后,加入H_2O_2作用12 h;EGCG高浓度组:100μmol·L~(-1)EGCG孵育24 h后,加入H_2O_2作用12 h。MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest33258染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子caspses-3及caspase-9的表达。结果:EGCG能明显抑制H_2O_2诱导的HLE细胞活力的下降,用不同浓度EGCG处理后,HLE细胞活性分别提高到51.00%±2.37%和63.67%±2.29%,与氧化损伤组(40.33%±2.86%)比较差异具有统计学意义(P0.05);经不同浓度EGCG处理后,HLE细胞凋亡率分别下降至33.33±3.12%和22.80±1.67%,与氧化损伤组(43.03±2.43%)比较差异具有统计学意义(P0.05);此外,EGCG还能明显减少H_2O_2所致HLE细胞内caspses-3及caspase-9的表达。结论:EGCG通过抑制caspses-3及caspase-9的表达有效抑制了H_2O_2对HLE细胞的损伤,从而为其用于治疗HLE细胞损伤提供可靠的实验依据。     

不同浓度胆汁酸盐对人肝胆管癌细胞凋亡的影响

目的:探讨不同浓度胆汁酸盐对人肝胆管癌细胞RBE凋亡的影响。方法:采用0、100μM、500μM、1 m M胆汁酸盐作用于人肝胆管癌细胞后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western-blot法检测细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:胆汁酸盐浓度为0、100μM、500μM、1 m M时,人胆管癌细胞的凋亡率分别为(0.7±0.12)%、(0.9±0.15)%、(1.4±0.17)%、(4.8±0.14)%,以1 m M胆汁酸盐所致人胆管癌细胞的凋亡最明显,Bcl-2蛋白表达量逐渐减少,Bax表达量逐渐增多,以1 m M胆汁酸盐时作用最明显,差异具有统计学意义(P0.05)。1 m M胆汁酸盐处理的人肝胆管癌细胞的形态由原来的梭形变成圆形,细胞核固缩、碎裂。结论:胆汁酸盐可以以浓度依赖性的方式导致人胆管癌细胞凋亡,以1 m M胆汁酸盐的作用最明显。     

长链非编码RNA对HepG2 肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA RP13-514E23.1在肝癌细胞系中的表达,并观察上调该基因后其下游基因MAPK10的变化及对肝癌细胞Hep G2增殖、凋亡的影响。方法:通过荧光定量PCR(q RT-PCR)检测RP13-514E23.1在正常肝细胞与肝癌细胞系中的表达差异,进一步构建质粒转染肝癌Hep G2细胞上调RP13-514E23.1的表达,以Mock组(只加转染试剂)和NC组(转染空载体pc DNA3.1-NC)作为对照评估转染效率及对MAPK10表达的影响。用CCK-8实验和流式细胞术检测转染前后Hep G2细胞的增殖、凋亡的变化。结果:Lnc RNA RP13-514E23.1在大部分肝癌细胞系(Hep G2,SMMC,Huh7,Hep3B)中的表达明显低于正常肝细胞(0.58±0.05 vs 1.00,P0.05);转染pc DNA-RP13-514E23.1后,q RT-PCR检测Hep G2细胞的RP13-514E23.1和MAPK10m RNA表达量显著升高(分别为29.90±1.40、2.42±0.25,P0.05),western blot检测MAPK10蛋白表达量较对照组也升高(2.10±0.16,P0.05);CCK-8结果显示Hep G2细胞在各个时间段增殖均受到抑制(P0.01),Mock组、NC组和实验组的凋亡率分别为(5.53±1.17)%、(6.40±2.84)%和(46.87±3.45)%(P0.01)。结论:Lnc RNA RP13-514E23.1在肝癌细胞系中表达异常降低,上调其表达后MAPK10的表达升高,且Hep G2细胞增殖受到抑制、凋亡增加。     

shRNA抑制活化诱导的胞苷脱氨酶（AID）对前列腺癌细胞C4-2表型的影响

目的:探讨AID在前列腺癌中的表达情况,AID对前列腺癌细胞C4-2的侵袭、迁移、增殖以及凋亡方面的影响。方法:应用靶向敲减AID的慢病毒对前列腺癌细胞C4-2进行干扰,运用Western-blot、免疫组化、平板克隆形成、流式、Transwell实验对前列腺癌组织和前列腺癌细胞C4-2表型的变化情况进行研究。结果:临床前列腺癌样本中AID高表达,良性前列腺增生组织中AID低表达,正常前列腺组织不表达(*P0.05);shRNA干扰以后的shAICDA-C4-2单克隆细胞株中AID的表达量显著降低,其增殖、迁移和侵袭能力阳性对照组(Monoclonal6)与阴性对照组(NC)相比分别降低49%、80%、63%,凋亡率阳性对照组(Monoclonal6)为阴性对照组(NC)的3.2倍。结论:前列腺癌组织中AID高表达,AID在促进前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制前列腺自细胞的凋亡中具有极其重要的作用。AID表达极可能与前列腺癌的进展、预后明显相关。     

Interferon gamma-mediated growth regulation of epithelial cells

Interferon gamma (IFNgamma) is known to inhibit proliferation of certain transformed cell lines. Recently, we have demonstrated the transactivation of the epidermal growth factor receptor (EGFR) in response to IFNgamma (Burova et al., 2007) and provided direct evidence for the dependence of IFNgamma-induced EGFR transactivation upon EGFR expression level in epithelial cells (Gonchar et al., 2008). This study examines an antiproliferative effect of IFNgamma on human epithelial cells lines A431 and HeLa which express high levels of EGFR, as well as HEK293, which expresses low levels of EGFR. We characterized the IFNgamma-induced changes in these cells by studying cell growth, the cell cycle and induction of apoptosis. The response to IFNgamma differed in the tested cell lines: cell growth was inhibited in both A431 and HeLa cells, but not in HEK293 cells, as shown by cell counts and MTT. The cell cycle phases analyzed by flow cytometry were disturbed in A431 and HeLa cells in response to IFNgamma. In contrast, IFNgamma treatment did not alter distribution by cell cycle phases in HEK293. Our results indicate that IFNgamma exhibit an antiproliferative effect depending on the increased expression of EGFR in A431 and HeLa cells. Further, it was demonstrated that IFNgamma induced the caspase 3 activation in A431 cells, suggesting an involvement of active caspase 3 in IFNgamma-induced apoptosis.