荔枝果皮过氧化物酶的纯化及部分酶学性质研究

经硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose和Sephadex G-75柱层析分离,从荔枝果皮中分离提纯了过氧化物酶(POD),该酶被纯化了12．5倍,产率为1．9％。经SDS-PAGE确定为单一条带。该酶最适反应温度为35℃,对热具有较强的稳定性,经75℃处理30min,酶活性只损失50％。最适pH约为6．5,但在pH4．0—8．0范围内活力仍比较稳定。该酶在25℃和0．05mol／L磷酸缓冲液(pH7．0)条件下对愈创木酚、邻苯二酚和没食子酸的Km分别是2．75、12．4和12．8mmol／L。二硫苏糖醇和抗坏血酸能完全抑制POD活性,L-半胱氨酸、柠檬酸、FeS04、GSH、SDS和ZnS04对POD活性有一定的抑制作用,而FeCl,和CuSOt对POD则有较好的激活作用。     

富士苹果多酚氧化酶特性研究

本文从富士苹果中提取和部分纯化多酚氧化酶,并对其特性进行研究。以邻苯二酚为作用底物,该酶最适pH为50,在pH50～80范围内有较高的稳定性。最适温度为30℃,在60℃以上迅速失活。该酶对不同的酚类物质表现出不同的底物专一性,由高至低的趋势依次为邻苯二酚、焦性没食子酸、DL-多巴、酪氨酸,其中对酪氨酸的活力为零。浓度为04mmol/L的VC、L-半胱氨酸及浓度为03mmol/L的亚硫酸氢钠,可完全抑制该酶活性。     

棘托竹荪子实体多酚氧化酶特性及其抑制剂的研究

以邻苯二酚为底物采用分光光度法对棘托竹荪(Dictyophora echinovolvata)子实体多酚氧化酶的酶学特性和不同抑制剂对多酚氧化酶活性的影响进行了研究。结果表明,棘托竹荪子实体多酚氧化酶的最适反应pH为8.0,最适反应温度为45℃,高温短时处理能显著抑制多酚氧化酶的活性;L-半胱氨酸(L-Cys)、氯化钠(NaCl)、维生素C(Vc)和柠檬酸(C6H8O7)等对多酚氧化酶均有抑制作用。经正交实验筛选的抑制剂组合(5.0 g/L L-Cys、20.0 g/L NaCl、1.5 g/L Vc、10.0 g/L C6H8O7)可以完全抑制多酚氧化酶的活性。     

芋中多酚氧化酶的某些催化特性检测

芋中多酚氧化酶催化反应的最适pH为7.6,最适温度为10℃,以邻苯二酚为底物时的Km=0.115mol·L-1,Vmax=0.600OD·min-1。硫脲和抗坏血酸完全抑制酶活性,抗坏血酸抑制表现出滞后性。SDS对酶有激活作用。     

枇杷果实多酚氧化酶活性影响因素的研究

研究了温度、pH、几种还原剂对枇杷果实多酚氧化酶活性的影响。结果表明:以邻苯二酚为作用底物,该酶的最适温度为25℃、最适pH为6.3,抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠等还原剂对该酶活性有明显的抑制作用。     

粪便微生物宏基因组来源的热稳定性邻苯二酚1,2-双加氧酶异源表达及酶学性质

【目的】克隆倭蜂猴粪便微生物宏基因组的邻苯二酚1,2-双加氧酶基因cat PLCgl,并对该酶进行异源表达及酶学特性研究。【方法】利用宏基因组高通量测序技术获得cat PLCgl,并对其氨基酸序列进行分析。将cat PLCgl重组到载体p EASY-E2中并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,研究其酶学性质。【结果】cat PLCgl全长852 bp,G+C含量48%,编码283个氨基酸,理论分子量为33.56 k D。重组Cat PLCgl酶学性质分析显示最适作用p H为7.0,其中在p H 7.0–10.0范围内处理1 h后,酶活剩余90%以上;最适作用温度为40°C,在25°C和40°C条件下稳定性较好,耐受210 h酶活性几乎不变。重组酶在最适条件下的动力学参数K_m、V_(max)和k_(cat)分别为24.9μmol/L、8.3 mmol/(min·g)和13.7 s~(-1);Fe~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)、Triton X-100、SDS、Ag+强烈抑制该酶活性,而其它金属离子及有机试剂影响较小。【结论】从倭蜂猴粪便微生物宏基因组中克隆得到邻苯二酚1,2-双加氧酶基因cat PLCgl,并对重组Cat PLCgl酶学性质进行研究,该酶具有较好的热稳定性和耐碱性,在降解环境中的邻苯二酚和生产顺,顺-己二烯二酸方面具有应用潜力。     

多孔菌Polyporus W38多酚氧化酶的性质研究

研究了多孔菌（Polyporus）多酚氧化酶的产酶曲线及酶作用最适条件;结果在该培养条件下,多孔菌第12d达产酶高峰,峰值酶活为529u/ml,酶作用的最适pH值为6.0,最适酶解温度为30℃,Mg^2 对漆酶有激活作用,而Ag^ 、Cl^-则能明显抑制漆酶活性。     

多孔菌Polyporus W38漆酶的纯化及性质研究

对多孔菌 (PolyporusW 38)漆酶进行了硫酸铵盐析、半透膜透析、SephadexG75及SephadexG2 5柱层析纯化 ,并研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件。结果表明在该培养条件下 ,多孔菌第 9d达产酶高峰 ,峰值酶活为 412u/mL ,酶作用的最适pH值为 4.2 ,最适酶解温度为 2 5℃ ,Mg2 +,Mn2 +对漆酶有激活作用 ,而Ag+,Fe3 +和Cl-则能明显抑制漆酶活性。     

槐尺蠖多酚氧化酶的纯化及酶学特征

经40%饱和度硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤等步骤,将槐尺蠖Semiothisa cinerearia Bremer et Grey 多酚氧化酶纯化,纯化倍数为6.96倍。该酶对焦性没食子酸,邻苯二酚和L多巴的Km值分别为0.23 mmol/L, 0.48 mmol/L和0.49 mmol/L。多酚氧化酶在pH 7.0,37℃时活性最高,并在40℃以上条件下,随着保温时间的延长酶活力下降。用槲皮苷和硫脲作抑制剂对该酶活性的抑制结果表明,这两种抑制剂分别属于竞争性和非竞争性抑制剂。     

海洋弧菌褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质

从海带糜烂物中分离到一株高产胞外褐藻胶裂解酶的海洋弧菌 (Vibriosp .QY10 1) ,利用硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法从发酵液中分离纯化了褐藻胶裂解酶 (alginatelyase)。SDS PAGE电泳结果表明 ,该酶分子量为 39kD。酶反应最适pH为 7.5 ,最适反应温度为 30℃。Na 、Ca2 、Mn2 对酶活性有促进作用 ,Fe2 、Ni2 以及EDTA对酶活性有抑制作用。酶的底物专一性初步分析结果表明 ,该酶具有降解多聚古罗糖醛酸[poly(G) ]及多聚甘露糖醛酸 [poly(M) ]的活性。