人参皂甙Rd通过调节SNI大鼠背根神经节钠、钾电流抑制痛敏

目的：观察人参皂甙Rd（ginsenoside Rd）对大鼠坐骨神经分支选择性损伤（spared sciatic nerve injury,SNI）引起的痛敏的影响及其作用机制。方法：坐骨神经分支选择性损伤术后7天,观察腹腔注射不同浓度人参皂甙Rd后大鼠后足的机械性缩足反应阈值（paw withdrawl mechanical threshold,PWMT）的变化;在术后7天,急性分离并取出大鼠腰4和腰5段背根节,对整节DRG上的中小型神经元运用全细胞膜片钳技术进行记录。结果：坐骨神经分支选择性损伤术后7天,大鼠出现明显的机械性痛敏,腹腔注射5 mg/ml和10 mg/ml的人参皂甙Rd能剂量依赖性的翻转大鼠机械性痛敏;坐骨神经分支选择性损伤能明显地增大SNI大鼠DRG中小型神经元上的钠电流以及减小电压依赖性钾电流,而100μM人参皂甙Rd能有效翻转该钠、钾电流的变化。结论：人参皂甙Rd能有效地改善坐骨神经分支选择性损伤引起的机械性痛敏,其机制可能与人参皂甙Rd明显地调节SNI大鼠DRG中小型神经元上的电压依赖性钠、钾电流有关。     

脊神经损伤后钠电流的变化及其离子通道机制

目的：检测脊神经切断大鼠背根节（DRG）神经元重复放电能力和钠电流的变化,并研究介导其电流变化的钠通道亚型的表达情况。方法：脊神经切断术后2～8d慢性痛大鼠模型背根节急性分离,对中等直径DRG神经元运用全细胞膜片钳技术记录神经元放电和钠电流的变化。对背根节神经元进行RT-PCR检测,分析其钠通道亚型的表达情况。结果：电流钳下,实验组DRG神经元在电流刺激下产生重复放电,而对照组神经元多诱发单个动作电位,电压钳记录发现实验组背根节神经元快钠电流和持续性钠电流幅值均明显大于对照组,PCR结果显示,Nav1.3、Nav1.7和Nav1.8通道亚型mRNA表达显著增高。结论：钠通道介导了脊神经受损模型的DRG神经元兴奋性增高,持续性钠电流可能通过调节阈下膜电位振荡的产生调节神经元兴奋性。     

慢性炎症痛引起DRG感觉神经元P2X3受体表达的改变

目的探讨脊髓背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）P2X3受体参与大鼠足底慢性炎症痛相关的热痛觉过敏机制。方法 1）用行为学的研究方法,以大鼠右侧后脚掌注射松节油加石蜡（各占50％）0．1ml建立后脚掌慢性痛模型,用热测痛的方法测量后脚掌皮下注射松节油后的痛阈,每天1次,连续测15d。2）用免疫组织化学技术观察大鼠后脚掌慢性炎症后第2天和第7天,炎症侧脊髓背根神经节（L4—6）神经元中P2X,受体阳性细胞类型的分布变化;以及正常脊髓背根神经节（L4—6）神经元中P2X,受体阳性细胞类型的分布作为对照。结果1）炎症后大鼠后脚掌侧痛阈出现降低,在第2天痛阈达到最低,后逐渐恢复,14d后恢复正常痛阈值。2）正常大鼠P2X,主要表达于DRG的中小神经元上,炎症后DRG（L4—6）,中小型P2X,受体阳性细胞数比对照组明显增加。细胞平均面积增大。结论后脚掌慢性炎症痛可以引起大鼠对伤害性热刺激的痛觉过敏,并导致脊髓背根神经节（L4—6）神经元qbP2X3受体阳性细胞数目增加,表明P2X3在DRG的中小神经元的改变可能对松节油引起脚掌炎症痛时热痛觉过敏的形成与维持起重要作用。     

尼氟灭酸对γ-氨基丁酸激活DRG神经元电流的作用

目的:观察尼氟灭酸(NFA)对大鼠背根神经节(DRG)神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流的调制作用。方法:在新鲜分离的大鼠DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术记录NFA和GABA激活电流。结果:部分DRG神经元(21/48,43.75%)外加NFA(0.1～100μmol/L)能引起浓度依赖性的外向电流,而大多数DRG神经元(150/159,94.32%)外加GABA(0.1～100μmol/L)则引起明显的浓度依赖性的内相电流。NFA-(100μmol/L)和GABA-(100μmol/L)激活电流的幅值分别是(0.27±0.06)nA(n=12)和(1.29±0.72)nA(n=53)。然而,预使用NFA(0.1～100μmol/L)能明显的抑制GABAA受体介导的内向电流。NFA的这一抑制作用也具有明显的浓度依赖性。但NFA没有改变GABA激活内向电流的EC50(大约30μmol/L)和翻转电位(大约-10mV)(P>0.05)。结论:预加NFA对GABA激活电流的峰值有明显的浓度依赖性的抑制作用。     

脊神经损伤后钠电流的变化及其离子通道机制

目的:检测脊神经切断大鼠背根节(DRG)神经元重复放电能力和钠电流的变化,并研究介导其电流变化的钠通道亚型的表达情况。方法:脊神经切断术后2～8d慢性痛大鼠模型背根节急性分离,对中等直径DRG神经元运用全细胞膜片钳技术记录神经元放电和钠电流的变化。对背根节神经元进行RT-PCR检测,分析其钠通道亚型的表达情况。结果:电流钳下,实验组DRG神经元在电流刺激下产生重复放电,而对照组神经元多诱发单个动作电位,电压钳记录发现实验组背根节神经元快钠电流和持续性钠电流幅值均明显大于对照组,PCR结果显示,Nav1.3、Nav1.7和Nav1.8通道亚型mRNA表达显著增高。结论:钠通道介导了脊神经受损模型的DRG神经元兴奋性增高,持续性钠电流可能通过调节阈下膜电位振荡的产生调节神经元兴奋性。     

人参皂甙Rd通过调节SNI大鼠背根神经节钠、钾电流抑制痛敏

目的:观察人参皂甙Rd(ginsenoside Rd)对大鼠坐骨神经分支选择性损伤(spared sciatic nerve injury,SNI)引起的痛敏的影响及其作用机制。方法:坐骨神经分支选择性损伤术后7天,观察腹腔注射不同浓度人参皂甙Rd后大鼠后足的机械性缩足反应阈值(paw withdrawl mechanical threshold,PWMT)的变化;在术后7天,急性分离并取出大鼠腰4和腰5段背根节,对整节DRG上的中小型神经元运用全细胞膜片钳技术进行记录。结果:坐骨神经分支选择性损伤术后7天,大鼠出现明显的机械性痛敏,腹腔注射5 mg/ml和10 mg/ml的人参皂甙Rd能剂量依赖性的翻转大鼠机械性痛敏;坐骨神经分支选择性损伤能明显地增大SNI大鼠DRG中小型神经元上的钠电流以及减小电压依赖性钾电流,而100μM人参皂甙Rd能有效翻转该钠、钾电流的变化。结论:人参皂甙Rd能有效地改善坐骨神经分支选择性损伤引起的机械性痛敏,其机制可能与人参皂甙Rd明显地调节SNI大鼠DRG中小型神经元上的电压依赖性钠、钾电流有关。     

慢性神经痛对抑郁状态以及中枢多巴胺神经元电生理的影响

目的：探讨大鼠慢性神经痛导致抑郁症状发生后,中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元自发放电活动的改变情况。方法：24只健康成年大鼠进行随机分组（n=12）：假手术组（Sham）大鼠仅进行坐骨神经分支暴露,坐骨神经损伤组（SNI）进行坐骨神经分支选择性损伤。在神经损伤后的第3、7、14、28、42、56天进行机械刺激计算缩足反射阈值,并进行糖水偏好、强迫游泳、旷场实验等行为学实验来评价大鼠是否发生抑郁症状;利用在体多通道电生理技术,对SNI组大鼠和假手术组大鼠中脑腹侧被盖区神经元分别进行记录分析。结果：与假手术组比较,SNI组大鼠的机械痛阈值明显降低（P<0.01）;在旷场实验、糖水偏好、强迫游泳较对照组出现显著性差异（P<0.01）;大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元自发放电频率、簇状放电活动中动作电位的数量明显增加（P<0.01）。结论：慢性疼痛可以导致大鼠抑郁相关症状的发生,中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元自发放电频率增加与疼痛后抑郁发生相关。     

川芎嗪对慢性压迫性损伤大鼠神经病理痛行为学的影响

目的探讨川芎嗪对慢性压迫性损伤（CCI）大鼠行为学的影响。方法建立大鼠坐骨神经CCI神经病理痛模型,取40只雄性大鼠随机分成4组,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为假手术组,Ⅲ组为CCI＋川芎嗪治疗组,Ⅲ组在术后第1天开始腹腔注射100 mg/kg川芎嗪注射液,Ⅳ组为CCI手术组。分别于术前（0 d）及术后1、3、5、7、91、1、14 d以von Frey细丝法和热辐射法测定机械缩足反射阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）和热缩足反射潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）,观察CCI大鼠神经病理痛的行为学变化。结果术后14 d,Ⅳ组和I、Ⅱ、Ⅲ组相比较,大鼠后爪的机械和热痛敏阈值明显降低（P〈0.01）;I、Ⅱ、Ⅲ组之间相比,大鼠后爪的机械和热痛敏阈值差异没有显著性（P〉0.05）。结论川芎嗪可以缓解CCI大鼠的慢性神经病理痛行为学表现。     

右美托咪啶通过抑制超极化激活内向电流减轻机械性触诱发痛

本文旨在研究右美托咪啶(dexmedetomidine,DEX)对慢性压迫背根神经节(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)引起的机械性触诱发痛的作用及机制。制备Sprague Dawley(SD)大鼠CCD模型,用痛行为学方法检测机械性触诱发痛,用全细胞膜片钳技术检测背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)C类和A_δ类神经元兴奋性和超极化激活内向电流(hyperpolarization-activated inward currents,I_h)的变化。结果显示:鞘内注射DEX显著减轻CCD大鼠机械性触诱发痛(P0.05);在CCD大鼠DRG C类和A_δ类神经元上,DEX显著提高细胞基强度和后超极化电位,降低I_h电流密度。上述结果提示,DEX可能通过抑制C类和A_δ类DRG神经元I_h电流,降低神经元兴奋性,从而减轻神经病理性疼痛。     

外源性的电磁干预对神经病理性疼痛大鼠的镇痛效果研究

目的:探讨外源性的电磁干预方法对神经病理性疼痛大鼠的镇痛效果。方法:将30只成熟的雄性SD大鼠随机等分成3组:空白对照组(Control),坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)组以及坐骨神经慢性压迫损伤协同电磁刺激组(CCI+EMF)。CCI组和CCI+EMF组的20只大鼠建立坐骨神经慢性压迫损伤模型,CCI+EMF组大鼠行外源性的全身性电磁刺激干预(脉冲波形,频率15 Hz,强度30 Gs),每天刺激6小时。在CCI模型构建的第0、3、6、9、12及15天对大鼠测试和比较足底机械痛阈值、足底热痛阈值、运动功能评分和神经传导速率。结果:CCI组大鼠的足底机械痛阈值、足底热痛阈值及感觉神经传导速率从CCI手术后的第3天即出现显著性降低,其6、9、12、15天足底机械痛阈值、足底热痛阈值及感觉神经传导速率均显著低于Control组(P0.01),而运动功能评分均显著高于Control组(P0.05)。CCI+EMF组大鼠的足底机械痛阈值、足底热痛阈值及感觉神经传导速率在第9、12、15天显著高于CCI组大鼠(P0.05),而运动功能评分均显著高于CCI l组。结论:外源性的电磁刺激对于神经病理性疼痛大鼠具有良好的镇痛效果,有望成为一种临床治疗神经病理性疼痛的新的物理治疗手段。     

缓激肽抑制大鼠DRG分离神经元的GABA激活电流

本文应用全细胞膜片箝技术在新鲜分离的大鼠背根神经节（ＤＲＧ）神经元上研究缓激肽（ＢＫ）对γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）反应的调制作用。结果发现：在３４个对ＧＡＢＡ反应的细胞中有３１个细胞对ＢＫ敏感。在对ＢＫ敏感并引起内向电流的２７个细胞中预加ＢＫ,对ＧＡＢＡ－激活电流具有明显的抑制作用,如１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ的ＢＫ可抑制ＧＡＢＡ（１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ）激活电流３０％。ＢＫ可将ＧＡＢＡ量效曲线明显下移,并     

催产素对大鼠背根神经节分离细胞GABA激活电流的调制作用

在急性分离的大鼠背根神经节（ｄｏｒｓａｌ ｒｏｏｔ ｇａｎｇｌｉｏｎ,ＤＲＧ）细胞上,应用全细胞膜片箝技术观察了预知催产素（ｏｘｙｔｏｃｉｎ,ＯＴ）对ＧＡＢＡ激活电流的调制作用。结果如下：（１）大多数细胞（４８／５２,９０．５％）对ＧＡＢＡ敏感。（２）ＯＴ可引起５１．３％（２０／３９）的受检细胞出现外向膜电流;４３．６％（１７／３９）无明显膜反应;５．１％（２／３９）出现内向膜电流。（３）预加ＯＴ     

可乐定对背根神经节神经元GABA激活电流的抑制作用

本实验在新鲜分离大鼠背根神经节（ＤＲＧ）细胞上应用全细胞膜片的箝记录研究贤上腺素α２－受体激动剂可乐定（ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）对ＧＡＢＡ－激活电流的调制作用。发现缘大多数ＤＲＧ细胞对ＧＡＢＡ（１０＾－６￣１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）敏感（７２／７５）,产生浓度依赖性的内向电流;并且可被ｂｉｃｕｃｕｌｉｎｅ（１０＾－５￣１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ）所阻断。在多数细胞中（５１／７２）预加可乐定（１０＾－８￣１０＾－     

一氧化氮促进体外培养大鼠脑室下区神经干细胞的分化

目的：探讨一氧化氮（NO）对新生大鼠体外培养的神经干细胞（NSCs）分化的作用。方法：采用常规方法分离新生大鼠脑室下区（SVZ）组织,进行NSCs体外培养。用DETA／NO作为NO供体,用L-NAME作为一氧化氮合酶（NOS）抑制剂。免疫荧光法检测NSCs标志物-巢蛋白（nestin）、神经元标志物-8Ⅲ型微管蛋白（Tuj-1）和星型胶质细胞标志物-胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,还检测了神经元型NOS的表达。用Greiss还原法检测培养液中总NO的浓度。结果：培养的神经球均为nestin阳性、BIdu阳性和nNOS阳性。NSCs和40μmol／L、50μmol／L、60μmol／LDEFA／N0共培养5d,实验组培养液中N0浓度较对照组显著增高（P〈0．01）,相应实验组分化的神经元数和星型胶质细胞数较对照组明显增加（P〈0．01和P〈0．05）。NSCs和100μmol／L、150μmol／L、200μmol／LL-NAME共培养5d,实验组培养液中NO浓度较对照组降低（P〈0．05）,相应实验组分化的神经元数和星型胶质细胞数也较对照组减少（P〈0．05）。结论：NO能直接促进大鼠SVZ体外培养的NSCs分化。     

咖啡因对大鼠背根神经节急性分离神经元GABA-激活电流的抑制作用

应用全细胞膜片钳记录技术,在大鼠新鲜分离背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上,观察预加咖啡因对GABA-激活电流(IGABA)的调制作用。实验中,大部分受检细胞(97．4％,l13／116)对外加GABA敏感。1-1000μmol／L GABA引起一剂量依赖性、有明显上敏感作用的内向电流。在受检的108个DRG细胞中,约有半数(53．7％,58／108)对胞外加咖啡因(0．1-100μmol／L)敏感．产生一幅值很小的内向电流。倾加咖啡因(0．1～100μmol／L)30s后再加GABA能明显抑制GABA(100μmol／L)激活电流的幅值。预加咖啡因后GABA量效曲线明显下移;GABA-激活电流的最人值较之对照下降约57％;而Kd值(30μmol／L)几乎不变,表示此种抑制为非竞争性的。预加安定(diazepam,1μmol／L)对GABA(100μmol／L)激活电流有增强作用,而预加咖啡因(10μmol／L)有拈抗安定增强IGABA的作用。胞内透析H-8后,几乎可以完全消除咖啡因对,IGABA的抑制作用。已知GABA作用于初级感觉神经元能引起初级传入去极化,因而实验结果提示,咖啡因有可能在初级传入末梢产生对抗突触前抑制的效应。     

Increased Response to Glutamate in Small Diameter Dorsal Root Ganglion Neurons after Sciatic Nerve Injury

Glutamate in the peripheral nervous system is involved in neuropathic pain, yet we know little how nerve injury alters responses to this neurotransmitter in primary sensory neurons. We recorded neuronal responses from the ex-vivo preparations of the dorsal root ganglia (DRG) one week following a chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve in adult rats. We found that small diameter DRG neurons (<30 µm) exhibited increased excitability that was associated with decreased membrane threshold and rheobase, whereas responses in large diameter neurons (>30 µm) were unaffected. Puff application of either glutamate, or the selective ionotropic glutamate receptor agonists alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA) and kainic acid (KA), or the group I metabotropic receptor (mGluR) agonist (S)-3,5-dihydroxyphenylglycine (DHPG), induced larger inward currents in CCI DRGs compared to those from uninjured rats. N-methyl-D-aspartate (NMDA)-induced currents were unchanged. In addition to larger inward currents following CCI, a greater number of neurons responded to glutamate, AMPA, NMDA, and DHPG, but not to KA. Western blot analysis of the DRGs revealed that CCI resulted in a 35% increase in GluA1 and a 60% decrease in GluA2, the AMPA receptor subunits, compared to uninjured controls. mGluR1 receptor expression increased by 60% in the membrane fraction, whereas mGluR5 receptor subunit expression remained unchanged after CCI. These results show that following nerve injury, small diameter DRG neurons, many of which are nociceptive, have increased excitability and an increased response to glutamate that is associated with changes in receptor expression at the neuronal membrane. Our findings provide further evidence that glutamatergic transmission in the periphery plays a role in nociception.     

琥珀酸对大鼠海马CA1区神经元电压依赖性钙电流的影响

目的：观察不同浓度的琥珀酸对大鼠海马CA1区神经元电压依赖性钙通道（voltage—dependent calcium channels,VDCC）电流的作用,初步探讨琥珀酸对神经元保护的电生理学基础。方法：采用传统全细胞膜片钳技术和制霉菌素（nystatin）穿孔膜片钳技术观察琥珀酸对海马CA1区神经元VDCC电流的影响。结果：不同浓度的琥珀酸（10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2和10^-1mol·L^-1）在海马CA1区对低电压激活（low—voltage activated,LVA）钙通道电流未见任何影响,而对高电压激活（high—voltage activated,HVA）钙通道电流的抑制呈浓度依赖性。对照组HVA钙电流为580．05±17．32pA,分别给予10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2和10^-1mol·L^-1。的琥珀酸后,HVA钙电流依次为563．74±16．65,517．99±15．24,444．66±13．26,405．32±19．11,269．03±9．96和86．41±3．25pA,同对照组相比差异有统计学意义（n=8,P〈0．01）。结论：琥珀酸能浓度依赖性地抑制HVA钙电流,而对LVA钙电流无影响。由此推测琥珀酸可能通过抑制HVA钙电流减少Ca^2＋内流而影响海马CA1区神经元的兴奋性,从而抑制癫痫的形成,其脑保护作用可能与此有关。     

SKF38393抑制大鼠DRG分离神经元GABA-激活电流

在大鼠新鲜分离ＤＲＧ神经元标本上应用全细胞膜片箝记录,观察了多巴胺Ｄ１受体的选择性激动剂ＳＫＦ３８３９３ＨＣＩ对ＧＡＢＡ－激活电流的作用。大部分受检细胞对ＧＡＢＡ敏感,１０＾－６－１０＾－３－ｍｏｌ／Ｌ ＧＡＢＡ可于引起呈剂量依赖性的明显去敏感作用的内向电流。     

姜黄素对自发性高血压大鼠脑缺血/再灌注后海马神经元损伤及RANTES表达的影响

目的：探讨姜黄素对自发性高血压大鼠（SHR）脑缺血/再灌注后认知功能及海马神经元损伤和调解活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子（RANTES）表达的影响。方法：雄性Wistar-Kyoto大鼠（WKY）和SHR,随机分为5组：假手术组（W-Sham、S-Sham）、缺血/再灌注组（W-I/R、S-I/R）和姜黄素组（S-Cur）,各组按再灌注时间分为3h、12 h、1 d、3 d、7 d 5个亚组（n=6）。采用四血管阻断法制备全脑缺血/再灌注模型,HE染色观察海马CA1区神经细胞形态,Nissl染色计数海马CA1区平均锥体细胞密度,ELISA法检测海马RANTES表达,于再灌注后7 d观察行为学。结果：与假手术组大鼠比较,缺血/再灌注组大鼠学习和记忆能力下降,海马CA1区神经元损伤加重,海马RANTES蛋白表达上调（P〈0.05）;与W-I/R大鼠比较,S-I/R大鼠学习和记忆能力下降,海马CA1区神经元损伤加重,海马RANTES蛋白表达上调（P〈0.05）;姜黄素组大鼠学习和记忆能力明显改善,海马CA1区神经元损伤减轻,海马RANTES蛋白表达下调（P〈0.05）。结论：缺血/再灌注更易导致SHR海马神经元损伤。姜黄素减轻SHR脑缺血/再灌注海马神经元损伤,其机制可能与抑制RANTES蛋白的表达有关。