吗啡对脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨吗啡预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响.方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、吗啡组,各18只.四动脉阻断法建立脑缺血模型,吗啡组在脑缺血前60 min腹腔内注射吗啡1mg/kg.脑缺血8 min再灌注12h、72h及168h各取6只大鼠的脑组织,观察海马区病理学改变、神经元凋亡及Bcl-2表达.结果:吗啡预处理能使各灌注点海马神经元病理改变减轻、凋亡细胞数减少(P<0.01)、Bel-2表达增加(P<0.01).吗啡组细胞凋亡数减少趋势与Bcl-2表达上调趋势一致.结论:吗啡预处理可减轻缺血性脑损伤;吗啡抗凋亡作用机制与Bcl-2密切相关.     

芍药苷对巨细胞病毒感染小鼠脑组织损伤及海马神经元细胞凋亡的影响

海马组织在学习、记忆中发挥着重要作用,而且海马组织对巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)感染非常敏感,会使海马组织中的神经元大量丢失,神经元细胞发生凋亡.芍药苷可以减轻小鼠炎性脑损伤,其可能与提高机体抗氧化能力、清除体内自由基有关,但是芍药苷在CMV感染小鼠中研究甚少.为探讨芍药苷对CMV感染小鼠脑组织损伤及海马神经元细胞凋亡的影响,本研究将新生昆明小鼠随机分为4组:对照组、小鼠巨细胞病毒组(MCMV组)、芍药苷低剂量组(Pae-L组)和芍药苷高剂量组(Pae-H组),后三组通过腹腔注射MCMV病毒悬液建立模型,之后对照组和MCMV组经腹腔注射生理盐水,Pae-L组经腹腔注射10 mg/kg芍药苷,Pae-H组经腹腔注射30 mg/kg芍药苷;荧光定量PCR检测各组小鼠脑组织中MCMV-DNA载量的变化;Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆功能指标的变化;蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测各组小鼠脑组织中MMP-9的表达变化;NeuN免疫染色检测各组小鼠海马组织中NeuN阳性细胞的变化;TUNEL染色检测各组小鼠海马组织中神经元细胞凋亡的变化;Western Blot检测各组小鼠海马组织中Bax、Bcl-2蛋白表达的变化.结果显示,与对照组比较,MCMV组小鼠的逃避潜伏期明显增加,穿越平台次数明显减少,脑组织中MMP-9蛋白表达水平显著上调,海马组织中NeuN阳性细胞数目显著减少,海马组织中神经元细胞凋亡指数显著增加,海马组织中Bax蛋白表达水平显著上调,Bcl-2蛋白表达水平显著下调;与MCMV组比较,Pae-L组和Pae-H组小鼠脑组织中MCMV-DNA载量减少,逃避潜伏期减少,穿越平台次数增加,脑组织中MMP-9蛋白表达水平下调,海马组织中NeuN阳性细胞数目增加,海马组织中神经元细胞凋亡指数减少,海马组织中Bax蛋白表达水平下调,Bcl-2蛋白表达水平明显上调.本研究提示,芍药苷能够改善MCMV感染引起的脑损伤,减轻海马组织中神经元细胞的凋亡.     

电针对大鼠局灶性脑缺血后脑内Bax,Bcl-2表达的影响

为了探讨 bcl- 2基因家族成员 bax,bcl- 2的表达产物 Bax、 Bcl- 2与电针抗缺血脑损伤的关系。本实验采用改良线拴法制备大鼠大脑中动脉 (MCA )阻塞 -再灌注模型 ,并用 TTC及 HE染色观察缺血及电针后梗塞灶的变化 ,用免疫组织化学方法对大鼠局灶性脑缺血组织内 Bax,Bcl- 2免疫阳性细胞的分布及电针对该分布的影响进行观察。发现 :1.行为生理学观察 :电针组大鼠神经缺损 Bederson综合评分明显低于缺血组综合评分 (P<0 .0 5 ) ;2 .TTC染色表明梗塞灶中心位于尾壳核 ,累及大脑皮层 ;HE染色计算缺血组梗塞灶体积为 74.72± 3.6 7m m3,电针组为 5 2 .6 6± 1.81mm3,两组间有显著性差异 (P<0 .0 1) ;3.大鼠 MCA阻塞 30 m in再灌注 48小时后 ,缺血组及电针组梗塞灶中心 (尾壳核 )偶见 Bax及 Bcl- 2免疫阳性细胞 ;缺血组半影区 Bax阳性细胞数量显著增加 (P<0 .0 1)。 Bcl- 2免疫阳性细胞数反应性上调 (P<0 .0 5 ) ;电针组半影区 Bax的表达与缺血组相比下调 (P<0 .0 5 ) ,但仍高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;Bcl- 2的表达与缺血组之间无差异显著性。海马 CA1区神经元 Bax,Bcl- 2的表达在各组间均无显著性差异。结果表明电针有抗缺血脑损伤的效应 ,其分子机制之一可能是通过下调半影区 Bax的表达而相对降低 Bax/Bcl- 2比     

低氧预处理对新生大鼠脑低氧缺血时海马区Bcl-2和Bax表达的影响

目的：观察低氧预处理对新生大鼠脑低氧缺血时海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨低氧预处理对新生大鼠脑低氧缺血损伤的保护机制。方法：7日龄新生SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、低氧缺血组（HIBD组）和低氧预处理组（HPC＋HIBD组）。采用免疫组织化学方法,检测各组脑组织海马区Bcl-2和Bax表达的变化。结果：与正常对照组、假手术组相比．HIBD组和HPC＋HIBD组海马区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达明显增多;与HIBD组相比,HPC＋HIBD组海马区Bcl-2蛋白表达明显增多,Bax蛋白表达明显减少。结论：低氧预处理后Bcl-2表达上调,Bax表达下调,可能是其保护随后脑低氧缺血损伤的机制之一。     

灯盏花注射液抗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的作用及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的：观察灯盏花注射液对新生大鼠缺氧缺血脑损伤（HIBD）的保护作用及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法：采用新生7日龄SD大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,设立假手术组、缺氧缺血脑损伤模型组、灯盏花注射液治疗大、中、小剂量组、无菌注射用水对照组。采用硫堇染色、免疫组织化学染色的方法测定各组大鼠海马CA1区神经元密度、组织学分级及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达情况,并计数各时间点Bcl-2、Bax免疫阳性细胞数目及测定积分光密度值。结果：假手术组,大鼠海马CA1区无锥体细胞缺失,未见明显免疫阳性细胞。与假手术组比较,缺氧缺血脑损伤模型组、无菌注射用水对照组Bcl-2、Bax蛋白表达均于3 d时达到高峰（与其余各时间点比较差别有显著意义P〈0.05）,神经元密度明显降低,组织学分级显著增高,积分光密度值增加。灯盏花治疗组,与无菌注射用水对照组比较,Bcl-2蛋白表达进一步增加,积分光密度值增加;而Bax蛋白表达则减少,积分光密度值降低;神经元密度显著高于对照组,组织学分级明显降低。结论：灯盏花注射液可能是通过上调Bcl-2表达,抑制Bax表达,减轻缺氧缺血引起的神经元凋亡及迟发性神经元死亡。     

菟丝子总黄酮对内分泌衰退痴呆模型小鼠学习记忆功能的影响及保护作用机制

目的:研究菟丝子总黄酮对内分泌衰退痴呆模型小鼠学习记忆功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将50只昆明种雌性小鼠随机分为模型组,雌激素对照组(0.3 mg·kg-1),菟丝子总黄酮低剂量组(35mg·kg-1),菟丝子总黄酮中剂量组(70 mg·kg-1)和菟丝子总黄酮高剂量组(140 mg·kg-1),采用背部去卵巢法切除双侧卵巢,另取10只小鼠作为假手术对照组,建立内分泌衰退小鼠模型,术后各治疗组进行灌胃给药治疗三个月,假手术组和模型组均给予0.9%生理盐水。给药结束后采用Morris水迷宫观察小鼠行为学变化;放射免疫法检测小鼠血液中雌激素的水平;HE染色光镜观察海马神经元病理形态;流式细胞仪检测小鼠海马神经细胞凋亡率和免疫印迹法检测海马区神经细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Csapase-3)及Cyt-c蛋白的表达水平。结果:与假手术组相比,模型组小鼠学习记忆能力明显下降(P0.01);血液中雌激素水平显著降低(P0.01);海马神经细胞凋亡率显著增加(P0.01);Cyt-c、Caspase-3、Bax蛋白表达水平大大增加(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低明显(P0.01)。与模型组相比,TFSC各治疗组小鼠学习记忆能力显著增强(P0.05,P0.01,P0.01);血液中雌激素水平上升显著(P0.05,P0.01,P0.01);小鼠海马区神经细胞凋亡率明显下降(P0.05,P0.01,P0.01);同时Cyt-c、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均大大降低,Bcl-2蛋白表达均明显增加(P0.05,P0.05,P0.01)。结论:TFSC可上调脑细胞中Bcl-2蛋白的表达水平,抑制Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白的表达量,进而增强神经元的可塑性和营养性,以防止神经细胞从内源性线粒体途径丢失或凋亡,进一步改善内分泌衰退型痴呆小鼠的学习记忆能力。TFSC可能是通过促进或增强下丘脑-脑垂体-性腺轴功能,从而达到增加雌激素水平和改善内分泌系统功能的目的。     

食物水限制对子午沙鼠海马组织HIF-1α相关活性物质表达的影响

目的探讨食物水限制对子午沙鼠Meriones meridianus海马组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)等相关活性物质表达的影响,阐明食物水缺乏对子午沙鼠海马组织的影响及相关机制。方法子午沙鼠随机分为食物水限制0 d、3 d、6 d、9 d组,每组6只。运用免疫组织化学方法检测海马组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Bax、Bcl-2的表达。结果食物水限制可引起海马组织HIF-1α、Bax表达增加(P0.05),Bcl-2生成减少(P0.05)。HIF-1α阳性细胞比率从0 d的低于10%增加到3 d的80%以上。食物水限制期间海马CA3区HIF-1α在食物水限制3 d组可见显著应答效应,而CA1反应晚于CA3区。HIF-1α与Bax的表达呈正相关,与Bcl-2的表达呈负相关。HIF-1α可能部分参与食物水限制期间海马Bax与Bcl-2表达的调节。     

凝血酶诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其与Bcl-2及Bax表达变化关系的实验研究

目的研究不同浓度凝血酶诱导海马神经元凋亡的作用及其机制.方法将原代培养新生大鼠海马神经元分为对照组,凝血酶组(1U/ml,10U/ml,20U/ml,40U/ml),凝血酶受体激活肽组.应用TUNEL及流式细胞仪检测凋亡细胞数及凋亡百分率,免疫细胞化学方法检测Bcl-2,Bax蛋白表达.结果低浓度凝血酶组(1U/ml)凋亡细胞数和凋亡率与对照组无差异,Bcl-2表达增加;随凝血酶浓度增加,TUNEL阳性细胞数及凋亡率明显增多,Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值降低.凝血酶受体激活肽的作用与大剂量凝血酶类似.结论凝血酶可能通过激活PAR-1受体诱导凋亡,凋亡呈剂量依赖性.Bcl-2的表达减少,Bax的表达增加,Bcl-2/Bax降低可能为高浓度凝血酶诱导凋亡的机制之一.     

下肢骨骼肌缺血后处理对兔缺血/再灌注心肌坏死和凋亡的影响

目的:探讨在体情况下,骨骼肌缺血后处理对兔缺血/再灌注心肌坏死和凋亡的影响。方法:新西兰大白兔36只,随机分成3组(每组随机选取6只进行梗死范围的测定,另外6只进行凋亡测定):①假手术组(Sham组);②缺血/再灌注组(I/R组);③远端后处理组(RPostC组)。在缺血前、后及再灌注60 min、120 min分别抽血测定肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)的活性。采用伊文思兰(evans blue)和三苯基氯化四氮唑(TTC)染色方法确定心肌缺血区范围以及心肌坏死区范围。用Tunel法检测兔心肌缺血区细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测心肌缺血区蛋白caspase-3、Bcl-2及Bax的表达。结果:RPostC组心肌坏死程度、再灌注末CK活性较I/R组明显减低。RPostC组缺血区心肌Tunel阳性指数显著低于I/R组(21.79%±1.07%vs35.81%±1.10%,P<0.05)。而RPostC组缺血区心肌细胞caspase-3阳性指数显著低于I/R组(25.03%±1.16%vs39%±2.43%,P<0.05)。与Sham组比较,I/R组及RPostC组Bax蛋白表达指数、Bcl-2蛋白表达指数均升高;但RPostC组的Bax/Bcl-2比值降低,而I/R组的Bax/Bcl-2比值升高。与I/R组相比较,RPostC组Bax蛋白表达指数及Bax/Bcl-2比值显著降低,Bcl-2表达指数显著升高,差异均有统计学意义。结论:远端后处理能够明显的减少缺血/再灌注心肌细胞的坏死和凋亡,其减轻心肌细胞凋亡的机制可能与抑制促凋亡基因caspase-3的活化及Bcl-2表达的上调有关。     

褪黑素抑制新生大鼠脑缺血缺氧损伤后海马内Bcl-2/Bax的下调和caspase-3的活化

目的探讨褪黑素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑内Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响。方法用电凝结扎第7天的新生SD大鼠右颈总动脉制备新生大鼠脑缺血缺氧损伤模型,用称重法测定脑水肿程度;hematoxylin-eosin(HE)和triphenyltetrazolium chloride(TTC)染色观察脑组织的梗死范围;Fluoro-Jade B(FJB)染色观察细胞的死亡情况;免疫荧光染色、Westernblot检测caspase-3、Bcl-2和Bax在各组的表达。结果 HIBD大鼠右侧大脑半球出现明显的梗死灶,且含水量较假手术组明显增加;褪黑素可使之减轻。HE和FJB染色显示,褪黑素可减轻大鼠缺血缺氧损伤引起的海马神经元的形态改变,降低FJB阳性细胞的数量。免疫荧光染色和Western Blot检测显示,HIBD大鼠右侧海马caspase-3、Bcl-2和Bax水平升高,Bcl-2/Bax降低;褪黑素干预后caspase-3和Bax水平达降低,Bcl-2水平升高,Bcl-2/Bax升高。结论褪黑素可通过抑制新生大鼠脑缺血缺氧损伤后海马内Bcl-2/Bax的下调和caspase-3的活化,抑制细胞凋亡,对新生鼠脑缺血缺氧损伤产生保护作用。