人参皂苷Rb1转化菌株筛选及转化产物分析

【背景】许多微生物能够对皂苷类化合物进行生物转化,因此,通过微生物对皂苷类化合物不同位置结构的修饰能获得高活性的皂苷成分。【目的】从分离纯化的菌株中筛选能将人参皂苷Rb₁转化为药理活性较高的稀有人参皂苷。【方法】从三七根际土壤及三七茎中分离纯化了36株真菌,首先利用产β-葡萄糖苷酶的方法对菌株进行皂苷转化活性初筛,再以人参皂苷Rb₁为底物进行皂苷转化活性复筛,通过薄层色谱(thinlayerchromatography,TLC)、高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)和质谱(mass spectrometry, MS)等方法对转化产物进行分析。【结果】筛选出一株对人参皂苷Rb₁具有较高转化活性的菌株F17,通过形态学观察及对内转录间隔区(internaltranscribedspacer,ITS)序列分析,菌株F17被鉴定为拟盘多毛孢属菌(Pestalotiopsis biciliata)。P. biciliata可将人参皂苷Rb₁转...     

XC302的微生物转化及其产物研究

筛选可转化抗肿瘤新药XC302的微生物菌种,并对转化产物和活性进行研究。利用保藏的植物内生真菌进行转化筛选,获得了一株具有转化XC302能力的真菌HCCB07927,经过分子生物学鉴定,该茵属于丝核茵属（Rh＆octonia）,该茵株可转化XC302生成两个转化产物LYBXYl、LY-BXY2。经MS．MS分析初步确定了两个化合物的结构。抗肿瘤活性测定表明,两个产物均对PANC一1细胞具有较高的抑制作用,其抑制率高于对照品XC302。通过微生物转化技术,成功获得两个转化产物,其均对PANC．1细胞具有较高抑制活性。     

民族药马利筋内生真菌生物活性研究

药用植物内生真菌能产生与宿主相同或相似的活性物质,民族药马利筋生物活性广泛。为获得马利筋活性内生真菌资源,该研究基于“民族药-内生真菌-活性成分”的思路,考察了168株马利筋内生真菌代谢产物的生物活性,并分别采用SRB法、Griess法、PNPG法和DPPH法对内生真菌发酵液乙酸乙酯提取物进行抗肿瘤、抗炎、α-葡萄糖苷酶抑制和抗氧化等生物活性测定,对活性菌株进行ITS菌种鉴定。结果表明：（1）所筛选的168株内生真菌中有22株表现出不同程度的生物活性。其中,9株内生真菌具有显著抗肿瘤活性,其IC₅₀值在0.1～40μg·mL^-1之间;菌株MJF-53在2.5μg·mL^-1时对LPS诱导的Raw264.7释放的NO和IL-1β均具有明显的抑制作用;7株内生真菌表现出不同程度的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其IC₅₀值在1.0～4.0 mg·mL^-1之间,其中MYF-16和MYF-55对α-葡萄糖苷酶抑制活性接近阿卡波糖;19株内生真菌具有不同程度的DPPH自由基清除活性,其中菌株MYF...     

一种真菌对人参皂苷Rg3的转化

[目的]筛选长白山人参土壤中的活性微生物,转化人参总皂苷及单体人参皂苷产生稀有抗肿瘤成份.[方法]从长白山人参根际土壤中分离各类菌株,对人参总皂苷及单体人参皂苷进行微生物转化,并通过硅胶柱层析等方法对转化产物进行分离纯化,采用波谱解析及理化常数对其进行结构鉴定;结合菌落形态、产孢结构、孢子形态特征以及菌株ITS rDNA核酸序列分析,对活性菌株进行鉴定.[结果]从长白山人参根际土壤中分离各类真菌菌株68株,有12株菌株对人参总皂苷有转化活性,其中菌株SYP2353对二醇组人参皂苷Rg3具有较强的转化活性.[结论]阳性菌株SYP2353被鉴定为疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria),能将人参皂苷Rg3转化为稀有人参皂苷Rh2及二醇组人参皂苷苷元PPD,为稀有人参皂苷Rh2的制备提供了新的方法.     

银杏酚对5种蔬菜病原物的抑菌活性初探

银杏外种皮采用70%乙醇加热回流浸提得到含活性成分银杏酚的粗提物,用70%乙醚、5%Na₂CO₃、5% NaOH萃取分离,获得银杏酚;本实验采用气相色谱-质谱分析鉴定提取物为银杏酚。银杏酚对茄子白绢病菌抑制作用较强,EC₅₀为1.36 mg·mL^-1。     

薤白总皂苷的抗氧化活性

以薤白叶片和鳞茎为材料,测定了一年生、二年生和三年生总皂苷不同浓度下(50、100、200、400、800μg·mL^-1)的还原力和抗亚油酸脂质体氧化能力,以及对DPPH（二苯代苦味酰基）、O₂^-、·OH的清除力,综合评价薤白总皂苷的体外抗氧化活性。结果表明,薤白叶片和鳞茎中的总皂苷随着浓度的增加,其抗氧化能力呈逐渐增强的趋势,对DPPH、O₂^-和·OH的清除作用分别达77.30%、95.95%和91.96%,相同浓度下对O₂^-的清除能力要强于抗坏血酸,但还原能力低于抗坏血酸,在浓度为800μg·mL^-172 h时,叶片和鳞茎总皂苷的抗亚油酸脂质体氧化能力均达到最大;薤白叶片的总皂苷在一定浓度下抗氧化能力要强于鳞茎。薤白叶片和鳞茎可作为天然抗氧化剂原料来源。     

大豆异黄酮微生物转化研究进展

大豆异黄酮是大豆在其生长过程中形成的一类次生代谢产物,具有抗氧化、抗癌、减少骨质流失、降低心脑血管发病率等多种生理功能。目前已知,被摄人机体的大豆异黄酮将被肠道微生物菌群转化为具有更高、更广生物学活性的不同产物。因此,大豆异黄酮对人体的有益调节作用强弱并不简单取决于摄人机体的净含量的多少,更在于被摄人机体的大豆异黄酮将如何被肠道菌群转化。本文从大豆异黄酮的组成与功能、大豆异黄酮体内吸收、代谢及微生物转化、转化产物的活性以及高效合成等方面进行了系统综述,对大豆异黄酮微生物生物转化研究现状和存在问题进行分析总结,并对今后发展趋势进行展望,旨在推动高活性大豆异黄酮微生物转化产物的研究与开发。     

土生曲霉转化三七中药材的研究

从土壤真菌中筛选出直接转化中药材三七化学成分的菌株YM31966,经鉴定该菌株为土生曲霉(Aspergillus terreus).以固态转化方式,结合化学提取分离方法,通过高效液相色谱、核磁共振及质谱等波谱检测,该菌株转化三七产物由三七皂苷nR2 、RX1和人参皂苷Rg1、Rd、Rh1、Rh4构成主体成分,而原三七成分Rb1、Rc、Re和R1、R3,R6等物质被分解.结果表明,土生曲霉是一株能转化中药材三七的微生物,它具有改变原三七化学成分,形成新化合物,以及提高某些原化合物成分含量的作用.     

红色红曲霉Mr-1的次级代谢产物生物活性成分分析

【背景】红曲霉(Monascus)是一种重要的药食同源性真菌,其自身产生的次级代谢产物具有多种生理活性功能,然而红曲霉中的生物活性成分却鲜有报道。利用红曲霉发酵液进行药效物质成分追溯,对了解红曲霉药效物质基础具有十分重要的意义。【目的】对红色红曲霉(M.ruber)Mr-1次级代谢产物中的生物活性成分和生物学功能进行研究。【方法】采用硅胶柱、SephadexLH-20凝胶柱等色谱技术对活性成分进行分离纯化,通过核磁共振和高分辨质谱技术对化合物结构进行解析;对鉴定的化合物进行体外抗氧化、抑菌和酶活性测定。【结果】从红色红曲霉Mr-1次级代谢产物中分离得到4个活性化合物,鉴定为3个黄酮类化合物Luteolin(1)、Hesperetin(2)、Glycitein(3)和1个萜类化合物Ursolic acid(4)。化合物1、2、4为首次从红曲菌科中分离得到。在抗氧化试验中,化合物1对ABTS⁺、DPPH和OH^-自由基具有较强的清除能力,IC₅₀分别为13.36、8.74和32.75μg/mL;在抑菌试验中,化合物4对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和李斯特菌(Listeria monocytogenes)表现出中等强度的抑菌能力,抑菌圈直径分别为13.4 mm和11.9 mm;在α-葡萄糖苷酶抑制活性试验中,化合物4表现出很强的抑制能力,IC₅₀为21.34μg/mL。【结论】红色红曲霉Mr-1是宝贵的微生物种质资源,其产生的次级代谢产物生物活性成分多样,具有开发成功能性食品原料的潜能。     

人参皂苷单体定向转化的生物催化及应用进展

人参是我国传统中药,药效显著、应用广泛。通过定向修饰与转化人参皂苷糖基可产生高抗癌活性稀有人参皂苷。传统化学法由于制备工艺极其复杂、成本过高,不能应用于临床,微生物及其酶系转化成为解决该瓶颈问题的最可行手段。有关全细胞催化、糖苷酶重组表达、固定化及其催化分子识别机制和溶剂工程的生物转化已有大量综述报道,但尚无在人参皂苷转化应用中的系统研究。文中通过对人参皂苷单体生物转化理论和应用研究最新进展的回顾,结合目前广泛采用的生物催化方法的讨论,系统梳理归纳了能够改善产物专一性、提高催化效率,且具有工业应用前景的人参皂苷单体定向转化方法。基于酶分子设计以及离子液体溶剂工程,对人参皂苷单体抗癌药物和食品、保健品市场的开发、规模化制备进行了展望。     

Specific reversal of multidrug resistance to colchicine in CEM/VLB100 cells by Gynostemma pentaphyllum extract

P-glycoprotein (P-gp)-mediated multiple drug resistance (MDR) is perhaps the most thoroughly studied cellular mechanism of cytotoxic drug resistance. Its efflux function can be circumvented by a wide range of pharmacological agents in vitro and in vivo. Most of these agents are pharmaceuticals used clinically for conditions other than cancer. However, their use in alleviating MDR is limited because the concentrations required for inhibition of the pump surpass their dose-limiting toxicity. The aim of this research is to study the role of gypenosides, isolated from Gynostemma pentaphyllum, as modulators of P-gp-mediated MDR in tumor cells, at both cellular and plasma membrane level. In the presence of total gypenoside preparation (0.1 mg/ml), an approximately 15-fold reversal of colchicine (COL) resistance was observed in P-gp-overexpressed CEM/VLB₁₀₀ cells. However, the gypenoside sample showed no reversal effect in cells treated with vinblastine and taxol. A purified gypenoside sample (gypenoside fraction 100) exhibited even more significant reversal of COL resistance (42-fold) in the CEM/VLB₁₀₀ cells. Further examination of the reversal effect of fraction 100 in membrane vesicles derived from CEM/VLB₁₀₀ cells using the continuous fluorescence method found that gypenoside fraction 100 at 0.1 mg/ml completely abolished the transport of fluorescein–COL.     

不同前处理方式绞股蓝总皂甙含量的差异

用超声法提取绞股蓝鲜叶样、杀青样、烘干样、风干样以及绞股蓝袋泡茶干茶样的总皂甙,并测定其含量。结果表明,总皂甙含量为杀青样> 烘干样> 鲜叶样> 风干样> 干茶样,可能由于各处理的糖苷酶失活程度不同导致皂甙不同程度的分解,在生产和实验研究中应引起注意。     

The Aspergillus niger carbon catabolite repressor encoding gene, creA

In order to undertake a comparative analysis of carbon catabolite repression in two Aspergillus species, the creA gene has been isolated from A. niger by cross hybridization, using the cloned A. nidulans gene. The A. niger gene has been shown to be functional in A. nidulans by heterologous complementation of the creA204 mutation of A. nidulans. Overall, the genes show 90% sequence similarity (82% identity) at the amino acid (aa) level. There were some striking similarities between the aa sequences encoded by the two fungal creA genes and two genes involved in carbon catabolite repression in Saccharomyces cerevisiae. The zinc-finger regions showed 96% similarity (84% identity) with the zinc-finger region of the MIG1 gene of S. cerevisiae. The CREA protein contains a stretch of 42 aa that is identical in A. niger and A. nidulans, and these show 81% similarity (33% identity) with a region of the S. cerevisiae RGR1 gene.     

薄荷和罗勒提取物体外抗氧化及保肝活性研究

采用国际常用的ABTS和DPPH方法评价唇形科植物薄荷(Mentha haplocalyx) 和罗勒(Ocimum basilicum)水提物和乙醇提取物体外抗氧化活性,选用HepG2细胞,通过乙醇诱导损伤,构建体外酒精性肝损伤细胞模型,以细胞存活率评价薄荷和罗勒提取物的保肝效果。结果表明,DPPH自由基清除能力大小依次为薄荷醇提物、薄荷水提物、罗勒醇提物、罗勒水提物,半效应浓度(EC₅₀)分别为70.42 μg·mL^-1、75.77 μg·mL^-1、354.87 μg·mL^-1、451.53 μg·mL^-1。ABTS自由基清除能力大小依次为薄荷醇提物、罗勒醇提物、薄荷水提物、罗勒水提物,EC50值分别为9.04 μg·mL^-1、18.03 μg·mL^-1、22.18 μg·mL^-1、36.88 μg·mL^-1。薄荷提取物的抗氧化能力整体优于罗勒提取物,醇提物抗氧化能力优于水提物。酒精性肝损伤细胞活性检测表明,5、10、20、50 μg·mL^-1薄荷水提物、薄荷醇提物和罗勒水提物能剂量依赖性地提高乙醇诱导损伤的细胞存活率,具有一定的保肝活性。     

不同保鲜剂对非洲菊切花的保鲜效应

探讨不同保鲜剂对非洲菊切花的瓶插寿命、观赏品质以及生理生化指标的影响。结果表明,在供试7组保鲜剂中,以处理7(T₇):20g/L Suc+200mg/L 8-HQC+150mg/L CA+75 mg/L KH₂PO₄·3H₂O+1g/L CaCl₂的保鲜效果最佳,可显著延长非洲菊切花瓶插寿命;T₇处理有利于减缓花瓣组织pH上升、花青素含量下降及花瓣细胞膜相对透性的上升,从而延长瓶插寿命。     

基于Morris 水迷宫探讨不同贮食行为鼠类的空间记忆

鼠类的贮食方式(分散或集中)与其空间记忆能力有关,但有关两者的定量关系尚缺少实验证据。朝鲜姬鼠(Apodemus peninsulae)分散或集中贮藏食物;社鼠(Niviventer confucianus)、黑线姬鼠(A. agrarius)、昆明小鼠(Mus musculus)仅集中贮藏食物。利用Morris 水迷宫对4 种鼠的空间记忆能力进行了评估,以探讨其空间记忆能力与食物贮藏方式间的联系。结果发现:在5 d 的定位航行实验中,4 种鼠找到隐藏平台的潜伏期均呈现出显著的下降趋势,其中朝鲜姬鼠潜伏期最短,黑线姬鼠与社鼠次之,昆明小鼠最长。在空间探索实验中,朝鲜姬鼠、黑线姬鼠和社鼠穿越平台的次数显著大于昆明小鼠;实验鼠在目标象限内的时间比和路程比为:朝鲜姬鼠> 黑线姬鼠> 社鼠>昆明小鼠,但差异不显著。结果表明具有分散贮藏行为的朝鲜姬鼠的空间记忆能力较仅具有集中贮藏行为的其它鼠种强,暗示鼠类的食物贮藏方式与其空间记忆能力有一定联系。     

A two-step bioconversion process for vanillin production from ferulic acid combining Aspergillus niger and Pycnoporus cinnabarinus

A two-step bioconversion process of ferulic acid to vanillin was elaborated combining two filamentous fungi, Aspergillus niger and Pycnoporus cinnabarinus. In the first step, A. niger transformed ferulic acid to vanillic acid and in the second step vanillic acid was reduced to vanillin by P. cinnabarinus. Ferulic acid metabolism by A. niger occurred essentially via the propenoic chain degradation to lead to vanillic acid, which was subsequently decarboxylated to methoxyhydroquinone. In 3-day-old cultures of P. cinnabarinus supplied with vanillic-acid-enriched culture medium from A. niger as precursor source, vanillin was successfully produced. In order to improve the yields of the process, sequential additions of precursors were performed. Vanillic acid production by A. niger from ferulic acid reached 920 mg l⁻¹ with a molar yield of 88% and vanillin production by P. cinnabarinus from vanillic acid attained 237 mg l ⁻¹ with a molar yield of 22%. However, the vanillic acid oxidative system producing methoxyhydroquinone was predominant in P. cinnabarinus cultures, which explained the relatively low level in vanillin.     

高原鼠兔冬季的食物选择

本文采用胃内容物镜检分析法,对高原鼠兔在矮嵩草草甸、垂穗披碱草草甸和杂类草草甸三种类型栖息
地中的主要食物组成进行了比较分析,旨在探讨三类栖息地不同食物资源状况对高原鼠兔食物组成的影响,以
及高原鼠兔在食物匮乏的冬季的觅食对策。研究结果表明:高原鼠兔在冬季主要选食弱小火绒草和铺散亚菊,
甘肃棘豆、垂穗披碱草和长茎藁本也是冬季食物主要组成部分。在冬季食物资源较为匮乏的情况下,高原鼠兔
选食的主要植物种类相对较多,且不同植物比例变化明显,说明高原鼠兔对食物具有一定的选择性。在矮嵩草
草甸中,其食物组成依次为铺散亚菊(16. 2% ) > 弱小火绒草(11. 5% ) > 甘肃棘豆(11. 3% ) > 大籽蒿
(9. 7% ) > 早熟禾(7. 6% ) > 长茎藁本(7. 5% ) > 垂穗披碱草(5. 5% )等7 种,占其食物的69. 3% ;在垂
穗披碱草草甸,其主要食物组成依次为垂穗披碱草(15. 8% ) > 甘肃棘豆(14. 7% ) > 弱小火绒草(14. 5% )
> 铺散亚菊(14. 2% ) > 早熟禾(7. 8% ) > 长茎藁本(6. 9% ) > 锥果葶苈(6. 2% )等7 种,占其食物的
80. 1% ;在杂类草草甸中,其主要食物组成依次为铺散亚菊(20. 8% ) > 长茎藁本(20. 6% ) > 大籽蒿
(9. 9% ) > 弱小火绒草(9. 8% ) > 锥果葶苈(6. 5% ) > 圆齿狗娃花(5. 5% )等6 种,占选食食物的73. 1% 。
不同栖息地之间食物组成比较分析结果表明,在冬季食物资源匮乏的情况下,栖息地类型不同对高原鼠兔食物
组成的影响较小,杂类草构成了它们的主要食物,这可能是由食物质量决定的,而不同栖息地中喜食植物可利
用量是决定鼠兔食物组成的主要因子,进一步验证了食物可利用量和质量决定植食性小哺乳动物食物选择模式
的假设。     

2种植物生长调节剂诱导烟草抗链格孢菌研究

以链格孢菌Alternaria alternata和烟草Nicotiana tabacum品种云烟87为试材,研究不同浓度茉莉酸甲酯(MeJA)和水杨酸(SA)处理下,链格孢菌菌丝生长情况以及成熟期烟叶防御酶活性与多酚含量变化,探讨植物生长调节剂对烟草抗链格孢菌的影响。结果表明,1 mmol·L^–1 MeJA对链格孢菌的抑制效果最好,抑菌率高达59%以上,其次是3.5 mmol·L^–1SA;MeJA和SA对链格孢菌的抑制效果随药剂浓度升高而增强;0.1 mmol·L^–1 MeJA和2.5 mmol·L^–1 SA能诱导烟草叶片SOD、POD、CAT等防御酶活性,并能降低H₂O₂活性氧含量,尤其以MeJA诱导效果较好。2种植物生长调节剂处理并接种链格孢菌能诱导提高烟叶多酚代谢相关酶PPO及PAL活性,但对烟草多酚类物质影响较小;成熟烟叶中含量较高的前3种多酚物质是绿原酸、芸香苷、隐绿原酸。     

铁皮石斛化学成分及其抗氧化活性研究

采用硫酸-苯酚法、AlCl^₃比色法、酸性染料比色法测定铁皮石斛(Dendrobium officinale)花、叶、茎中多糖、黄酮、生物碱含量，通过DPPH和ABTS清除实验评价铁皮石斛花、叶、茎的水提物和乙醇提取物的体外抗氧化活性。结果表明，铁皮石斛不同部位的多糖含量茎>花>叶，黄酮含量花>叶>茎，生物碱在各个部位分布均较少。其中茎的多糖含量可达23.92%，花中黄酮含量可达1.847%。抗氧化能力评价表明，铁皮石斛花水提物、茎醇提物、花醇提物的DPPH自由基清除能力相对较好，半效应浓度(EC₅₀)分别为410.4 μg·mL^-1、454.1 μg·mL^-1、573.2 μg·mL^-1；铁皮石斛茎醇提物、花醇提物、花水提物ABTS自由基清除能力相对较好，半效应浓度(EC₅₀)分别为61.1 μg·mL^-1、62.2 μg·mL^-1、103.0 μg·mL^-1。铁皮石斛花的提取物抗氧化活性整体优于叶和茎，醇提物抗氧化能力优于水提物。