miR-155通过促进炎症因子释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展

摘要 目的：探讨miR-155在脓毒症致肠道功能障碍中的表达及作用。方法：（1）临床实验：以2022年5月至2022年8月入住新疆医科大学第一附属医院重症医学科的脓毒症患者和同期健康体检者为研究对象,根据急性胃肠损伤分级（AGI）将脓毒症患者分为AGI组和非AGI组。根据28 d生存情况分为存活组和死亡组,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）法前瞻性观察各组外周血miR-155的变化。（2）体内实验：将20只雄性S/D大鼠按照随机数字表法分为假手术组（sham组）和盲肠结扎穿孔术组（CLP组）,采用qRT-PCR及Western blot法检测miR-155、肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）的表达,ELISA法检测大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18的表达水平。(3)体外实验：培养人结直肠腺癌细胞（Caco-2）,并分为正常对照组(完全培养基培养48 h)、脂多糖组（完全培养基培养24 h后加入10 μg/mL LPS处理24 h）。采用qRT-PCR检测miR-155的表达。在倒置荧光显微镜下观察细胞形态的变化。采用CCK-8检测细胞活力。采用免疫荧光观察Caco-2细胞中紧密连接蛋白ZO-1分布的变化。并行细胞旁通透性实验,观察两组细胞旁通透性的变化。结果：（1）脓毒症组和健康对照组相比,脓毒症患者外周血miR-155较健康对照组明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。AGI组患者外周血miR-155表达较非AGI组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。脓毒症死亡患者外周血miR-155表达显著升高(P<0.05)。（2）应用CLP模型进行体内动物实验,CLP组大鼠肠道组织miR-155表达较假手术组（sham组）明显升高。CLP组大鼠肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）较sham组下降,差异具有统 计学意义(P<0.05)。ELISA结果提示,CLP大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18水平较sham组显著升高（P<0.05）,且肠道组织中miR-155水平与IL-1β、IL-6、IL-18呈正相关（r=0.542,r=0.906,r=868,P<0.05）。（3）与正常对照组相比,经LPS处理后细胞形态破坏、细胞间紧密连接破坏、细胞活力减弱、细胞旁通透性增加。结论：脓毒症发生时伴有肠道屏障功能障碍,miR-155在脓毒症肠道屏障功能障碍中表达升高,并可能通过促进炎症因子的释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展。miR-155异常表达对脓毒症患者早期肠道功能障碍诊断及预后的评估具有重要价值,可作为脓毒症早期肠道损伤诊断及预后情况的重要指标。     

七氟醚对血管痴呆性大鼠海马区细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响及相关机制研究

摘要 目的：探讨与研究七氟醚对血管性痴呆（Vascular dementia,VaD）大鼠海马区细胞凋亡及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达的影响及相关机制。方法：60只老年雄性SD大鼠随机平分为两组-七氟醚与对照组,两组大鼠都采用双侧颈动脉缺血再灌注法制作VaD模型,七氟醚组与对照组在建模前分别吸入0.11 %七氟醚与空气各45 min,分别于建模后7 d、14 d与21 d进行Morris水迷宫实验检测大鼠的逃避潜伏期;建模后21 d,采用TUNEL法测定各组大鼠海马组织细胞凋亡情况,采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别测定血清超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性与丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量,采用Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白相对表达水平。结果：两组各有26只大鼠顺利建立VaD模型,建模后7 d、14 d与21 d,七氟醚组的逃避潜伏期均显著少于对照组(P<0.05);建模后21 d,七氟醚组大鼠海马组织神经元细胞凋亡指数显著低于对照组(P<0.05);建模后21 d,七氟醚组大鼠血清SOD活性显著高于对照组,而MDA含量则显著低于对照组(P<0.05);建模后21 d,七氟醚组大鼠海马组织Bax、Bcl-2蛋白的相对表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论：七氟醚干预可通过促进VaD大鼠海马组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达抑制细胞凋亡,并可平衡大鼠的氧化应激反应水平,从而促进大鼠记忆功能恢复正常。     

罗氟司特对脓毒症炎症大鼠炎症因子及淋巴细胞的调控机制分析

摘要 目的：探究罗氟司特通过JAK/STAT途径对脓毒症炎症大鼠炎症因子及淋巴细胞的调控机制分析。方法：将54只SD大鼠随机分为正常组（n=18）,模型组（n=18）和罗氟司特组（n=18）,正常组正常喂养,模型组和罗氟司特组建立脓毒症大鼠模型。模型组和罗氟司特组腹膜内注射0.9 %的氯化钠和罗氟司特。干预7 d后,对大鼠取样。测定灌洗液中炎症细胞的数量、JAK和STAT-3的蛋白、AST和ALT、IL-6和TNF-α的mRNA表达。结果：在观察的7 d中,正常组大鼠均存活,生存率高于模型组和罗氟司特组（P<0.05）,罗氟司特组生存率高于模型组（P<0.05）。与正常组相比,模型组和罗氟司特组术后症状评分均增加（P<0.05）,罗氟司特组术后症状评分低于模型组（P<0.05）。模型组和罗氟司特组的miRNA-218表达低于正常组（P<0.05）,而罗氟司特组高于模型组（P<0.05）;模型组和罗氟司特组淋巴细胞,中性粒细胞和单核细胞总数,JAK和STAT-3的蛋白质表达,AST、ALT、IL-6和TNF-α水平高于正常组（P<0.05）,罗氟司特组上述指标低于模型组（P<0.05）。结论：罗氟司特通过JAK / STAT途径阻断miRNA-218表达,抑制促炎性细胞因子IL-6和TNF-α的表达,减轻脓毒症炎症的机制和肝脏损害并改善多发性脓毒症的生存率。     

七氟醚预处理介导AMPKα1通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

摘要 目的：探讨七氟醚预处理介导腺苷酸环化激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）α1通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury, MIRI）的保护作用。方法：将清洁级雄性SD大鼠60只随机平分为三组：模型组、地佐辛组与七氟醚组,三组均建立MIRI模型。地佐辛组与模型组都在建模前24 h腹腔注射地佐辛40 μg/kg与等剂量生理盐水,七氟醚组吸入2.5 %七氟醚15 min。结果：所有大鼠在建模过程中均存活,无大鼠因严重并发症而舍弃。地佐辛组与七氟醚组再灌注后24 h与48 h的左心室收缩压、左心室舒张末期压、心肌梗死面积百分比、血清去甲肾上腺素含量、心脏组织AMPKα1和皮质激素调节激酶-1（glucocorticoid-regulated kinase-1,GK1）蛋白相对表达水平都低于模型组（P<0.05）,七氟醚组低于地佐辛组（P<0.05）。结论：七氟醚预处理可通过抑制大鼠MIRI的AMPKα1通路的激活和血清去甲肾上腺素释放,从而减少大鼠心肌梗死面积,并进一步促进心功能恢复正常。     

miR-19靶向PTEN并介导HMGB1影响小鼠动脉粥样硬化进程的机制研究

摘要 目的：探究miR-19靶向PTEN并介导HMGB1影响小鼠动脉粥样硬化进程的机制研究。方法：SPF级C57BL/6J ApoE^-/-雄性小鼠根据研究目的将实验小鼠分为对照组、AS模型组和miR-19抑制剂组。通过RT-PCR分析小鼠主动脉组织中miR-19的mRNA表达。通过蛋白印迹分析小鼠主动脉PTEN、HMGB1和AKT的蛋白表达。通过荧光素酶活性检测miR-19a与PTEN的靶向关系。通过组织学和红油O染色分析小鼠胸腹主动脉和主动脉窦中的AS斑块面积。通过RT-PCR分析小鼠主动脉主动脉弓内膜中促炎细胞因子和趋化因子的mRNA表达。通过蛋白印迹分析主动脉弓内膜中ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达。结果：AS模型组miR-19mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组miR-19mRNA表达较AS模型组降低（P<0.05）。AS模型组PTEN蛋白表达较对照组降低,HMGB1和AKT蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组PTEN蛋白表达较AS模型组升高,miR-19抑制剂组HMGB1和AKT蛋白表达较AS模型组降低（P<0.05）。AS模型组主动脉和主动脉窦的斑块面积较对照组增加（P<0.05）,miR-19抑制剂组主动脉和主动脉窦的斑块面积较AS模型组减少（P<0.05）。AS模型组TNF-α、IL-β、IL-6和CXCL2的mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组TNF-α、IL-6、IL-β和CXCL2的mRNA表达较AS模型降低（P<0.05）。AS模型组ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达较AS模型组降低（P<0.05）。结论：miR-19通过靶向调控PTEN表达激活HMGB1/PI3K/Akt信号通路,这可能会促进VSMCs的异常增殖、迁移和炎症反应,有助于AS的进展。     

七氟醚联合右美托咪定对剖宫产分娩的子痫前期患者血流动力学、炎症反应和血清S100β、NSE的影响

摘要 目的：观察七氟醚联合右美托咪定对剖宫产分娩的子痫前期患者血流动力学、炎症反应和血清S100β、神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响。方法：采用随机数字表法,将我院2019年8月~2021年5月期间收治的行剖宫产分娩的80例子痫前期患者分为对照组（n=40,七氟醚）和研究组（n=40,七氟醚联合右美托咪定）。对比两组血流动力学、炎症反应和血清S100β、NSE、镇静情况,记录两组麻醉期间不良反应发生情况。结果：给药前（T1）~拔管时（T4）时点,两组心率（HR）、平均动脉压（MAP）和血氧饱和度（SpO₂）均下降后又升高（P<0.05）,麻醉诱导后（T2）~胎儿娩出时（T3）时点,研究组HR、SpO₂、MAP高于对照组（P<0.05）。T4~术后24 h（T6）时点,两组血清S100β、NSE水平升高后下降（P<0.05）,T4~T6时点,研究组血清S100β、NSE水平低于对照组（P<0.05）。T6时点,研究组白介素-6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平低于对照组（P<0.05）。研究组T3、T4时点Richmond评分低于对照组（P<0.05）。两组不良反应总发生率对比未见差异（P>0.05）。两组新生儿出生后1 min、5 min Apgar评分组间对比无统计学差异（P>0.05）。两组新生儿出生后5 min的Apgar评分较出生后1 min升高（P<0.05）。结论：七氟醚联合右美托咪定用于剖宫产分娩的子痫前期患者,可稳定血流波动,减轻炎症反应,同时还具有一定的脑保护作用。     

布地奈德通过干预线粒体钙单转运蛋白影响哮喘大鼠气道上皮细胞自噬和屏障功能的机制

摘要 目的：探究布地奈德通过干预线粒体钙单转运蛋白影响哮喘大鼠气道上皮细胞自噬和屏障功能的机制。方法：30只雄性SD大鼠作为研究对象,并根据实验目的分为3组：对照组（正常大鼠,生理盐水干预,n=10）,哮喘组（通过OVA诱导大鼠哮喘模型,n=10）,布地奈德组（气雾剂布地奈德用于治疗过敏性哮喘的大鼠,n=10）。通过钙测定试剂盒和蛋白印迹分析大鼠气道上皮细胞中Ca²⁺的吸收和MCU蛋白表达;TEER和TRITC 荧光分析检测大鼠气道上皮中的屏障功能;免疫组化分析分气道上皮细胞屏障功能相关因子ZO-1、E-cadherin的蛋白表达;ELISAF分析BALF上清液中炎性因子IL-4、IL-5和IL-13的水平;二氢乙锭衍生物和蛋白印迹分析BALF中ROS含量和caspase-3活性。结果：哮喘组较对照组Ca²⁺浓度降低,MCU蛋白表达升高（P<0.05）,布地奈德组较哮喘组Ca²⁺浓度升高,MCU蛋白表达降低（P<0.05）。哮喘组较对照组TEER降低,TRITC升高（P<0.05）,布地奈德组较哮喘组TEER升高,TRITC降低（P<0.05）。哮喘组较对照组ZO-1、E-cadherin的蛋白表达降低（P<0.05）,布地奈德组较哮喘组ZO-1、E-cadherin的蛋白表达升高（P<0.05）。哮喘组较对照组IL-4、IL-5和IL-13的水平升高（P<0.05）,布地奈德组较哮喘组IL-4、IL-5和IL-13的水平降低（P<0.05）。对照组组支气管和肺泡结构未见异常,与对照组相比哮喘组大鼠表现出肺泡间隔增厚,可见的肺毛细血管水肿,以及肺毛细血管和肺泡间隙中的大量炎性细胞浸润（P<0.05）,与哮喘组相比,布地奈德组显著减轻肺部病变的严重程度（P<0.05）。哮喘组较对照组LC3B II/I、ATG5、Beclin-1 和LC3II 的表达升高（P<0.05）,布地奈德组较哮喘组LC3B II/I、ATG5、Beclin-1 和LC3II 的表达降低（P<0.05）。哮喘组较对照组ROS含量和caspase-3活性升高（P<0.05）,布地奈德组较哮喘组ROS含量和caspase-3活性降低（P<0.05）。结论：布地奈德通过调节MCU表达介导气道上皮细胞的屏障完整性和自噬水平,缓解哮喘气道炎症,改善哮喘症状。     

BIS监测下右美托咪定联合七氟醚对颅内动脉瘤介入栓塞术患者苏醒质量、血清氧化应激指标和神经损伤标志物的影响

摘要 目的：探讨脑电双频指数（BIS）监测下右美托咪定联合七氟醚对颅内动脉瘤介入栓塞术患者苏醒质量、血清氧化应激指标和神经损伤标志物的影响。方法：采用随机数字表法,将我院2019年3月-2021年6月期间收治的80例颅内动脉瘤介入栓塞术患者分为研究组（BIS监测下右美托咪定联合七氟醚,n=40）和对照组（BIS监测下七氟醚,n=40）,观察两组血流动力学、苏醒质量、血清氧化应激指标和神经损伤标志物水平变化。记录两组围术期间不良反应发生状况。结果：气管插管后1 min（T1）~拔管后10 min（T4）时点,两组平均动脉压（MAP）、心率（HR）升高后下降,但研究组低于对照组同时点（P<0.05）。与对照组比较,研究组苏醒时间、恢复呼吸时间、拔管时间较短（P<0.05）。T1~T4时点,两组超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）水平下降后升高,但研究组较对照组同时点高（P<0.05）。术后1 d,两组人脑髓鞘碱性蛋白（MBP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、S100?茁水平升高,但研究组低于对照组同时点（P<0.05）。对照组、研究组的不良反应发生率组间对比无显著性差异（P>0.05）。结论：BIS监测下七氟醚联合右美托咪定应用于颅内动脉瘤介入栓塞术患者中,可提高苏醒质量,减轻氧化应激水平和神经损伤程度,稳定血流动力学波动。     

右美托咪定联合七氟醚对老年腹腔镜胃肠肿瘤切除术患者应激反应和脑氧代谢的影响

摘要 目的：观察老年腹腔镜胃肠肿瘤切除术患者使用七氟醚联合右美托咪定复合麻醉后,机体应激反应和脑氧代谢的变化情况。方法：将我院2020年1月至2020年12月期间收治的100例老年腹腔镜胃肠肿瘤切除术患者根据随机数字表法分为对照组（n=50,七氟醚麻醉）和研究组（n=50,右美托咪定联合七氟醚麻醉）。观察两组血流动力学、应激反应、脑氧代谢、认知功能和不良反应。结果：两组手术60 min（T1）~手术后30 min（T3）时间点较麻醉诱导前（T0）时间点心率（HR）先下降后升高,平均动脉压（MAP）先升高后下降（P<0.05）。研究组T1~T3时间点HR及MAP低于对照组（P<0.05）。两组术后3 d多巴胺（DA）、肾上腺素（AD）、去甲肾上腺素（NE）水平升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组术后3 d血氧含量差（DajvO₂）和脑氧摄取率（CERO₂）下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。研究组术后6 h、术后1 d、术后3 d简易精神状态检查量表（MMSE）评分高于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率,对比无显著性差异（P>0.05）。结论：七氟醚联合右美托咪定应用于老年腹腔镜胃肠肿瘤切除术患者,可有效减轻机体应激反应,减轻机体认知功能损伤,维持血流动力学稳定和脑氧代谢。     

大鼠脊髓小胶质细胞P2X4的表达和糖尿病病理性神经痛大鼠炎症反应和疼痛阈值的关系

摘要 目的：探究大鼠脊髓小胶质细胞P2X4的表达和糖尿病病理性神经痛大鼠炎症反应和疼痛阈值的关系。方法：通过高脂饮食结合链脲佐菌素注射诱导糖尿病病理性神经痛大鼠模型并分为3组：对照组（正常大鼠,腹腔注射载体柠檬酸盐缓冲液0.25 mL/kg）,模型组（糖尿病病理性疼痛模型,同上注射,n=15）和抑制剂组（大鼠糖尿病病理性模型,过鞘内导管注射米诺环素）,共28 d。通过MWT评估对机械刺激的手掌反应。通过双极针电极检测实验大鼠的运动神经传导速速。通过蛋白印迹分析P2X4和BDNF蛋白表达。通过RT-PCR分析炎症因子IL-1β、TNF-α和NLRP3的mRNA表达。通过蛋白印迹分析p38MAPK和p-p38MAPK的蛋白表达。结果：第2week、4week和6week,模型组MWT较对照组降低（P<0.05）,抑制剂组MWT较模型组升高（P<0.05）。第2 week,个实验组大鼠MNCV比较无差异（P>0.05）,第4week和第6week,模型组MNCV较对照组降低（P<0.05）,抑制剂组MNCV较模型组升高（P<0.05）。模型组P2X4和BDNF蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,抑制剂组P2X4和BDNF蛋白表达较模型组降低（P<0.05）,模型组P2X4和BDNF mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,抑制剂组P2X4和BDNF mRNA表达较模型组降低（P<0.05）。模型组IL-1β、TNF-α和NLRP3的mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,抑制剂组IL-1β、TNF-α和NLRP3的mRNA表达较抑制剂组降低（P<0.05）。模型组p-p38MAPK蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,抑制剂组p-p38MAPK蛋白表达较模型组降低（P<0.05）,各实验组大鼠p38MAPK蛋白表达无差异（P>0.05）。结论：大鼠脊髓小胶质细胞P2X4-BDNF信号在DNP中起重要作用,并且P2X4在DNP期间激活的脊髓小胶质细胞中表达升高,抑制小胶质细胞激活能显著降低P2X4表达和炎症水平,可防止热痛觉过敏并增加大鼠疼痛阈值。     

Characteristics of the membranes of the pellicle of the ciliatePseudomicrothorax dubius

Summary The membranes of the pellicle of the ciliatePseudomicrothorax dubius are investigated using thin section electron microscopy and freeze-fracture replicas. The plasma membrane is covered by a surface coat and is connected to the outer alveolar membrane by short, sometimes branched, bridges. The inner alveolar membrane is coated on both sides. The epiplasm lies in intimate contact with the cytoplasmic surface of this membrane, and there is a corresponding deposit on the other surface. This deposit is regularly striated.The epiplasmic layer and the alveoli are interrupted at sites of cytotic activity,e.g., the attachment sites of trichocysts, the cytoproct, and the parasomal sacs. The striated deposit ends where the epiplasm ends, indicating a direct relationship between these two epimembranous layers.There is a deposit along the sides of the first part of the tip of the trichocysts, and in this region the trichocyst membrane is free of intramembranous particles.The membrane of the parasomal sacs has a coat on both surfaces. That on the extraplasmic surface is similar to the surface coat of the plasma membrane. The origin of the cytoplasmic coat is unknown. The cytotic activity of these sacs is indicated by their highly irregular profiles.     

The early development of the tail and the transformation of the shape of the nucleus of the spermatid of the domestic fowl,Gallus gallus

Summary The differentiation of the spermatid, especially in reference to the formation of the flagellum, and transformation of the shape of the nucleus was investigated in the domestic fowl.In the early stage of the spermatid, a prominent Golgi apparatus appears around the centrioles. The Golgi vesicles then surround the axial-filament complex which develops from the distal centriole. These vesicles fuse to form continuous membrane at the earliest stage of flagellar formation, and in the succeeding stage Golgi lamellae are attached to the plasma membrane of the developing flagellum. From these observations, it is assumed that Golgi apparatus may be a source of the membrane system of the flagellum.The microtubules distributed around the nucleus form the circular manchette. The anterior region of the nucleus with the manchette is cylindrical in shape and the posterior region without it remains irregular in shape. When the circular manchette has been completed, the whole nucleus acquires a slender cylindrical shape. The circular manchette then changes into the longitudinal manchette. The nuclei of spermatids without a longitudinal manchette are abnormal in shape. In view of these observations it is assumed that the nuclear shaping of the spermatid may be accomplished by circular manchette and the maintenance of shape of the elongated nucleus by longitudinal manchette.The authors wish to thank Mr. Takayuki Mori for his helpful suggestions and technical advices     

Observations on the permeability of the choriocapillaris of the eye

Summary The choriocapillaris is a fenestrated capillary bed located posterior to the retinal pigment epithelium. It serves as the main source of supply to the photoreceptors, retinal pigment epithelium, and other cells of the outer retina. The permeability of these capillaries to intravenously injected ferritin (MW — approx. 480,000; mol. diam. 11 nm) was examined in the mouse, rabbit, and guinea pig, each of which is characterized by a different type of retinal vascularization. In all three species, the bulk of the ferritin remained in the capillary lumina, where it appeared to be blocked at the level of the diaphragmed fenestrae. Some ferritin was present in endothelial cell vacuoles. The results confirm previous work on the rat choriocapillaris and indicate that the barrier function of the choriocapillary endothelium is present even among species in which the retinal circulation differs significantly.Supported by NIH grant EY03418