长片段PCR技术

长片段ＰＣＲ技术刘建伟,徐湘民（第一军医大学分子生物学研究所,广州５１０５１５）关键词长片段ＰＣＲＰＣＲ技术是１９８３年由Ｍｕｌｌｉｓ首创的一种通过体外酶促扩增反应快速获取特定ＤＮＡ序列的方法,已在分子生物学、分子遗传学、医学和法医学等领域得到广泛应...     

分子生物学技术在研究肠道病毒性心肌炎,赆肌病中…

肠道病毒性心肌炎、心肌炎研究是国家“九．五”攻关项目之一。本文作者结合自己在英国伦敦大学实验室的直接经验,综述了用分子生物学技术如膜相核酸杂交、原位杂交以及采用ＴａｑＤＮＡ多聚酶催化的循环ＤＮＡ序列法,免疫多聚酶链反应（ＰＣＲ）、原位ＰＣＲ等技术,进一步证明了肠道病毒是心肌炎的主要病原,并可用ＰＣＲ产物分析病毒型别。     

PCR产物克隆方法的新进展

ＰＣＲ产物克隆方法的新进展陈尚武,马涧泉（中山医科大学生化教研室．广州）随着ＰＣＲ技术的发展和普及,克隆ＰＣＲ产物已广泛应用于分子生物学的各个领域。通常ＰＣＲ产物不具有粘端,只能进行平端连接的克隆,由于ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性...     

用于扩增较大片段DNA的PCR方法

用于扩增较大片段ＤＮＡ的ＰＣＲ方法方向东,陈淳（中科院上海生物化学研究所国家分子生物学实验室,上海２０００３１）诸江（上海第二医科大学上海血液学研究所,上海２０００２５）关键词ＤＮＡ扩增,ＰＣＲ自从Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合...     

DNA分子标记在柑桔中的应用

ＤＮＡ分子标记是最为理想的遗传标记 ,依其多态性检出所用的分子生物学技术 ,大致可分为Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交技术为核心的分子标记和ＰＣＲ技术为核心的分子标记。前者的代表性技术有ＲＥＬＰ(ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)和ＤＮＡ指纹技术 (ＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ)。后者的代表性技术有ＲＡＰＤ(ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ)、ＳＣＡＲ(ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃ ｔｅｒｉｓｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ)…     

RACE: cDNA末端快速扩增技术进展

ＲＡＣＥ：ｃＤＮＡ末端快速扩增技术进展明洪黄秉仁中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所国家分子生物学重点实验室北京１００００５基因表达水平和模式的变化驱动着生物体内主要的生物学过程。分离和克隆基因是研究基因结构、功能以及表达的基础。以往建立和筛选ｃＤＮＡ和ＤＮＡ文库来分离克隆目的基因的经典方法繁琐而且工作量大。ＰＣＲ技术的出现极大地提高了分离克隆目的基因的效率。反向ＰＣＲ、锅...     

新型的NDA序列测定策略：PCR产物直接测序

ＤＮＡ序列的测定在现代分子生物学中的应用越来越广泛 ,传统的模板制备方法是将待测序列的ＤＮＡ片段插入质粒或病毒载体中 ,然后让其在宿主细菌细胞中增殖。尽管这套方法已被简化和标准化 ,但由于其涉及到活细胞的保存和使用 ,不可避免地会带来诸如载体和宿主细胞基因发生突变等不利影响。而用ＰＣＲ技术直接从基因组或克隆片段制备测序模板 ,可以完全避免细菌培养、模板提取等重复性操作 ,也克服了以上弊端 ;由于ＰＣＲ技术快速、简便 ,在检测人类遗传病的基因突变时 ,需要比较患者和正常人中的突变分布情况 ,应用ＰＣＲ直接测序技术就能…     

分子生物学技术与新病原发现

近年来分子生物学方法已成为寻找人类疾病新病原微生物的有力工具,一些不能以常规方法分离培养的致病因子因此得以检定。这些分子生物学技术包括一些常规分子生物学技术,如聚合酶链反应、ＤＮＡ分子克隆测序和核酸杂交等;以及近几年来涌现的较新颖的技术、如消碱杂交技术、代表性差异分析、抑制消减杂交技术、ｃＤＮＡ免疫文库技术、酵母双杂合系统、兼并引物ＰＣＲ和随机肽库技术等,这些分子生物学技术在一些病原的寻找和发现中     

扩增大段靶DNA的PCR方法

扩增大段靶ＤＮＡ的ＰＣＲ方法陈尚武,王章（中山大学生命科学学院,广州）ＰＣＲ和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合酶的应用以及ＰＣＲ技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使ＤＮＡ片段的ＰＣＲ扩增成...     

PCR技术的种类及其应用

ＰＣＲ技术是分子生物学技术的一场革命。本文综述多种ＰＣＲ技术及其在分子生物学领域的应用。     

红树DNA的十六烷基三甲基溴化铵法提取及其随机扩增多态DNA反应

采用ＣＴＡＢ法提取了耐盐植物红树ＤＮＡ,所得ＤＮＡ样品的紫外吸收Ａ２５８／Ａ２８０比值为１．８９,纯度能符合限制性内切酶酶切、ＰＣＲ反应以及ＤＮＡ重组克隆等分子生物学操作的要求．方法简便,容易掌握,较普通的酚－氯仿法有明显的优点．还探讨了以ＣＴＡＢ法制备的红树ＤＮＡ为模板进行ＲＡＰＤ反应参数的优化组合     

用分子生物学技术对草菇进行菌株鉴别

利用ＡＰ－ＰＣＲ和ＲＡＰＤ技术对三个草菇菌株进行鉴别,其结果与用草菇菌株Ｖ３４基因文库中的中等重复序列为探针进行限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）,及对编码核糖体５．８ＳｒＲＮＡ的ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）进行ＰＣＲ扩增后的产物进行限制性内切酶长主多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）的结果相一致。这一结果显示出用这四种方法对草菇菌株进行鉴别具有相似的效果。同时用这四种方法构建的分子生物学标记显示出这三个菌株     

PCR技术及其在医学上的应用

ＰＣＲ技术及其在医学上的应用陈禹保,曾灵芳（中科院北京科海医疗生物工程公司,１０００８０）自５０年代Ｗａｌｔｓｏｎ—Ｃｒｉｃｋ提出ＤＮＡ双螺旋假说,拉开了分子生物学的序幕。６０年代中心法则（ＤＮＡ—ｍＲＮＡ—Ｐｒｏｔｅｉｎ）的提出,对生命本质有了较深...     

分子生物学技术在环境微生物监测中的应用

随着环境生物学的发展,对环境中复杂的混合微生物群落进行及时监测和准确鉴定变得越来越重要。但是传统的研究方法因为检测速度慢、准确性差等缺点,在某种程度上已经不适应于这方面的研究;而以ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）技术为主的一些分子生物学技术因具有快速、灵敏的特点,正被越来越多的人所采用。目前,这些分子生物学技术已能在ｒＤＮＡ测序和有关结构基因分析的基础上监测和定量复杂的混合微生物群落中的一些特殊的微生物,而且其中许多技术都是在ＰＣＲ扩增的基础上来检测混合微生物群落中原本…     

免疫—PCR技术进展

免疫－ＰＣＲ结合了抗原抗体反应的特异性和ＰＣＲ的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。免疫－ＰＣＲ的关键在于形成抗体－标记ＤＮＡ偶联物,作为桥梁连接免疫反应的特异和ＰＣＲ的高扩增能力。本文简述了－ＰＣＲ的基流程以及与标ＤＮＡ相偶联,ＰＣＲ产物检测方法的进展。     

多聚酶链反应技术诊断生殖支原体的研究进展

本文不近年来应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术快速诊断生殖支原体（Ｍｇ）的研究进展作一综述,内容包括Ｍｇ的分子生物学特性、引物的设计、ＤＮＡ提取以及此法在检测Ｍｇ中的临床应用和注意事项。     

用毛细管电泳技术检测DNA点突变

毛细管电泳(ＣＥ)是90年代初发展起来的新技术,具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化的特点。后来又发展了激光诱导荧光检测器(ＬＩＦ),大大提高了分析灵敏度,对微量样品如单细胞分析等,具有很大的优势。通常,利用ＣＥ技术可以在20ｍｉｎ内分析完成几千个碱基的ＤＮＡ片段。ＣＥ可以应用于ＤＮＡ点突变的检测,目前在ＰＣＲ基础上利用ＣＥ技术对ＤＮＡ已知点突变及未知点突变的检测发展十分迅速。1.已知点突变的检测1.1　扩增抗拒突变系统ＰＣＲ(ＡＲＭＳＰＣＲ)和短串联重复ＰＣＲ(ＳＴＲＰＣＲ)　　ＡＲＭＳＰＣＲ和Ｓ…     

RT—PCR测定mRNA的荧光定量分析

利用反转录毛细管ＰＣＲ技术,可合成代表特异ｍＲＮＡ的双链ＤＮＡ。在一定循环数内,ＰＣＲ产物的量与其模板ｃＤＮＡ即反转录中相应ｍＲＮＡ的浓度有关。溴乙锭嵌入ＤＮＡ双螺旋后,其荧光量子产率大为增加,因此可通过利用处在适当ＰＣＲ循环数中的ｃＤＮＡ浓度与在优选的激发光谱发现射波长下其荧光强度的线性关系,计算出所检测的ｍＲＮＡ表达量。     

分子生物学技术在结核诊断和流行病学研究中的应用

结核是当今世界范围内致残和致死的几个主要传染病之一,每年会导致３００多万人死亡。诊断基础为罗琼氏培养基或选择性培养基培养,金胺Ｏ染色,萋纳氏染色,镜检,需２～８周。这就迫切要求分子生物学技术在结核快速诊断中的应用。本文综述了ＤＮＡ杂交、ＤＮＡ指纹图、脉冲场凝胶电泳和ＰＣＲ在结核诊断和流行病学研究中的应用,同时,评述了用分子生物学技术检查结核耐药基因的适用性     

分子标记技术在林木常规育种中的应用及其问题

分子生物学技术在植物和动物常规育种中的应用主要包括两个方面,即分子标记和基因工程。分子标记,或称ＤＮＡ标记,是基因型在ＤＮＡ水平上的表现形式。目前,已产生了多种分子标记技术,在方法上可以分为三类［１７］：（１）非ＰＣＲ类,如ＲＦＬＰ（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）和ＶＮＴＲｓ（Ｖａｒｉａｂｌｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔｓ）。（２）以...