以壳聚糖为载体亲和层析胰蛋白酶

用活化的壳聚糖为载体,鸡卵粘蛋白(CHOM)为配基,制备了胰蛋白酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂亲和层析胰酶,所得产物经SDS-PAGE电泳检测,带中只有一条带颜色较深,且与标准胰蛋白酶带位置几乎相同。实验结果表明1 g壳聚糖可以固定60 mg鸡卵粘蛋白,制成的亲和吸附剂可吸附胰蛋白酶的最大量为118 U/g。以壳聚糖为载体的亲和吸附剂制备过程简单、安全。     

改性与修饰壳聚糖固定化酶纯化抑肽酶研究

采用化学改性与修饰微珠壳聚糖为载体,共价法偶联牛胰蛋白酶,制成抑肽酶亲和吸附剂,单位活力5 190 KIU/g（湿）,蛋白质偶联率60.5％,酶活性回收率55％;将其直接亲和层析牛肺提取液,分离纯化高比活抑肽酶.方法过程简单,样品比活力5 700 KIU/mg,质量稳定,成本较低;该吸附剂机械强度高,抗污染能力较强,非特异性吸附较小,可以反复使用,价格低廉,适合工业化生产.     

壳聚糖固定化酶一步纯化抑肽酶研究

采用化学改性与修饰微珠壳聚糖为载体,共价法偶联牛胰蛋白酶,制成抑肽酶亲和吸附剂,单位活力５１９０ＫＩＵ／ｇ（湿）,蛋白偶联率６０．５％,酶活性回收率５５％;将其直接亲和层析牛肺提取液,分离纯化高比活抑肽酶。方法过程简单,样品比活力５７００ＫＩＵ／ｍｇ,质量稳定,成本较低;该吸附剂机械强度高,抗污染能力较强,非特异性吸附较小,可以反复使用,价格低廉,适合工业化生产。     

Con．A-Sepharose亲和吸附剂的制备及其纯化某些蛋白质的性能

伴刀豆球蛋白A (Con.A) 与溴化氰活化的琼脂糖(Sepharose)偶联制成的Con.A-Sepharose亲和吸附剂具有纯化某些糖蛋白一类物质的性能。因此,人血清中的胰蛋白酶抑制剂,碱性磷酸酯酶,小牛脾磷酸二酯酶,不同变种的甲胎球蛋白和某些激素如绒毛膜促性腺激素(HCG),促黄体激素(LH)等物质都可用它纯化。此法操作简单、样品回收率较高,故它已成为纯化上述一类物质的有效工具。我们参考Steven的方法,用自己制备的     

用免疫亲和层析法纯化细菌铁蛋白

用细菌铁蛋白免疫家兔,制备抗铁蛋白血清,用进一步纯化的抗铁蛋白抗体作为配基与溴化氰活化的Sepharose4B偶联,得到亲和免疫吸附剂。以此法纯化的铁蛋白为聚丙烯酰胺凝胶电泳纯,相对复合抗体作双向免疫电泳显示单峰,并具有较高的免疫活性。     

交联琼脂糖珠固定化蛋白酶在纯化牛肺Kunitz抑制剂中的应用

本文介绍了珠状交联琼脂糖及以此作为载体,经氯代环氧丙烷活化后与蛋白酶(胰蛋白酶或糜蛋白酶)结合,制成固定化蛋白酶亲和吸附剂,进而用以亲和层析牛肺提取液中的Kunitz抑制剂的方法。纯化出的抑制剂在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现单一条带,与参照物Trasytol(商品Kunitz抑制剂)具有相对应的电泳迁移率,其分子量也相符。纯化产品每毫克蛋白的抑制活力相当于16 000胰蛋白酶BAEE单位。纯化效果为90倍,收率约85％。     

用壳聚糖替代Sepharse 4B固定相关配体纯化酶的研究

采用壳聚糖固定酶作用的特定底物（菌体细胞）,并用戊二醛交联制备成酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂纯化溶葡球菌的研究表明,经一步纯化可提高纯度4倍,酶活性回收大于70％。SDS－PAGE的电泳结果显示,产品基本上达到了标准酶的纯度。同时表明该吸附剂没有非特异性吸附。由载体壳聚糖替代Sepharose 4B制备的吸附剂具有简单、快速、较高收得率和操作安全等优点,适用于特定酶或基因工程产品的分离纯化。     

刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和填料的制备及纯化瑞替普酶

刺桐属胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,能特异性的抑制胰蛋白酶、组织纤溶酶原激活剂(tPA)、瑞替普酶(rPA)等丝氨酸蛋白酶。实验利用ETI工程菌,经诱导表达、体外复性及纯化获得ETI蛋白,并将该蛋白键合到CNBr活化的琼脂糖凝胶,制备ETI亲和填料,纯化瑞替普酶 。     

果胶酶亲和吸附剂的制备及其性能比较

以甜菜渣、果胶、海藻酸钠为原料 ,与表氯醇在碱性条件下交联 ,制备了果胶酶亲和吸附剂并应用这几种亲和吸附剂对草酸青霉果胶酶和黑曲霉果胶酶进行亲和层析实验。结果表明 :用小于 60目的甜菜渣粉末和海藻酸钠制备的果胶酶亲和吸附剂 (分别简写为SBP吸附剂和SA吸附剂 )具有较好的纯化果胶酶性能 ,其中SBP吸附剂性能稳定 ,而SA吸附剂膨胀系数较大 ,在流动相改变时引起流速不稳。     

固定化胰蛋白酶的快速制备

目的：快速制备高活力的固定化胰蛋白酶,用于转肽反应。方法：将壳聚糖与硅胶搅拌均匀,同时用戊二醛进行活化制成活化载体,再通过交联反应将胰蛋白酶固定至载体制备固定化胰蛋白酶。用正交法进行优化。结果：用快速工艺制得的固定化胰蛋白酶的活力单位为5990．5U/g,活力回收为16．7％,整个制备过程耗时21h。结论：快速工艺的制备过程较之改进前更为快捷简便,制备的固定化胰蛋白酶活力单位显著提高,利于工业应用。