Red同源重组在大肠杆菌基因组修饰中的应用

Red同源重组技术发展迅速,已广泛应用于大肠杆菌基因组修饰,在点突变、基因敲除、序列整合等方面发挥着重要作用。简要综述了Red同源重组的重组机制和操作策略等研究进展,并介绍了Red同源重组在大肠杆菌基因组减小及多基因代谢途径优化方面的应用情况。     

Red重组技术研究进展

主要从Red系统组成元件、作用机理、重组策略以及先进性和发展前景四个方面综述了利用Red 重组系统敲除或替换细菌染色体目的基因的方法。首先简要介绍了传统的细菌染色体重组技术,指出了其中的缺陷。然后提出了Red重组技术的定义：利用噬菌体Red系统介导来实现外源线性DNA片断与细菌染色体的靶基因进行同源重组的方法,外源线性DNA通常是PCR产物、寡核苷酸片断等,在它们的两翼各含有与染色体靶基因两翼同源的序列40~60bp。这种Red重组技术省去了体外DNA酶切和连接等步骤,使细菌染色体靶基因的敲除与替换操作相对简单,逐渐成为基因功能探索以及新菌株构建的有力手段。     

Red/ET重组及其在生物医学中的应用

通过应用Rac噬菌体的RecE RecT和λ噬菌体的RedαRedβ系统而建立的DNA工程平台———Red ET重组,是一种不依赖于限制性内切酶的分子克隆新技术。运用该技术能够介导PCR产物或寡核苷酸对目标基因进行剪切、插入、融合及突变等多种操作,在生物医学领域里具有广阔的应用前景,尤其在基因组功能研究中对BACs、PACs和细菌染色体的打靶修饰以及基因敲除动物DNA靶分子的快速构建等方面最有效。随着Red ET重组的推广与应用,该技术本身也在不断被改进,在工作效率得到显著提高的同时,其操作也变得更加简单、省时、省力。结合自身的一些研究结果,对Red ET重组的技术特点、发展现状和在生物医学中的应用进行了详细阐述。     

Red重组系统用于大肠杆菌基因修饰的研究进展

Red重组作为一种新的重组系统已经被广泛用于大肠杆菌的基因敲除、基因替换。与传统的Rec重组相比,Red重组具有同源臂短,重组效率高等优点。本文分别详细介绍了Red重组系统中Exo、Beta、Gam三种蛋白质的功能,Red重组系统运用在大肠杆菌基因敲除中的三种质粒及其功能,同时概括了Red重组的技术要点及技术难点,分析了文献报道的阿拉伯糖诱导浓度和诱导时间、转化后的复苏温度及时间、引物同源臂长度对于重组率的影响,总结出了Red重组的最佳条件。     

红果黄檀一新异名

通过对红果黄檀(Dalbergia tsoi Merr. et Chun)和白沙黄檀(D. peishaensis Chun et T. Chen)的标本研究及野外观察,确认两者为同种植物,故将白沙黄檀处理为红果黄檀的异名。     

Red重组系统用于大肠杆菌基因修饰研究进展

Red重组作为一种新的重组系统已经被广泛用于大肠杆菌的基因敲除、基因替换.与传统的Rec重组相比,Red重组具有同源臂短,重组效率高等优点.分别详细介绍了Red重组系统中Exo、Beta、Gam 3种蛋白质的功能,Red重组系统运用于大肠杆菌基因敲除的3种质粒及其功能,同时概括了Red重组的技术要点及技术难点,分析了文献报道的阿拉伯糖诱导浓度和诱导时间、转化后的复苏温度及时间、引物同源臂长度对于重组率的影响,总结出了Red重组的最佳条件.     

红木字典

紫檀木（类）檀香紫檀：中乔木;直径0.4~0.7米。商品名Red sanders,Red sandalwood,Saunderswood。主产于印度南部,印度半岛东南部东高止山脉南段安得拉邦区域,包括古德柏、奇图尔、内洛尔、科努尔、蒂鲁帕蒂、帕拉马南等地区。尼泊尔、缅甸、泰国、柬埔寨和中国华南等地引种栽培。     

Red/ET同源重组技术及其在微生物基因组挖掘中的应用进展

Red/ET同源重组技术(Red/ET recombineering)是由来源于大肠杆菌λ噬菌体的蛋白对Redα/Redβ或来源于Rac原噬菌体的蛋白对Rec E/Rec T所介导的基于短同源臂(40–50 bp)的同源重组技术,能对宿主DNA序列进行快速、高效、精确的修饰和操作。本文主要综述了2010年以来Red/ET同源重组技术在大肠杆菌及其他细菌中的研究进展,同时简要介绍了该技术在微生物基因组挖掘,尤其是在微生物基因簇的异源表达领域的应用进展。     

中国黄檀属植物（豆科）—新记录

报道了一种黄檀属植物-南亚黄檀[Dalbergia volubilis Roxb.（Leguminosea）]在中国的分布新记录。     

探析越南黄檀良种选育及高效栽培

保护现有降香黄檀野生资源,大力发展降香黄檀人工栽培,具有重要的生态和经济意义。光是植物必需的资源之一,对植物的生长发育、生理生化及形态结构等方面有重要的作用。本文将针对越南黄檀良种选育及高效栽培进行探讨。     

海南岛黄檀属一新种和油杉属及榕属二新组合

海南岛发现黄檀属一新种以及海南油杉和保亭榕降为地理亚种。     

豆科黄檀属的二个新异名

在比较研究标本馆馆藏标本的基础上,确认Dalbergia esquirolii H. L関. 与滇黔黄檀(D. yunnanensis Franch.); 西盟黄檀(D. ximengensis Y. Y. Qian)与多裂黄檀(D.rimosa Roxb.)分别为同种植物,因此予以归并。     

噬菌体重组酶介导的DNA同源重组工程

来源于噬菌体的遗传操作工具在基因工程中具有非常重要的地位,例如位点特异性重组酶、柯斯质粒DNA文库及同源重组酶等。其中,来源于lambda噬菌体的同源重组酶Redα/Redβ和来源于Rac原噬菌体的同源重组酶RecE/RecT能够高效地介导35–50 bp短同源臂之间的重组。基于噬菌体同源重组酶Redα/Redβ和RecE/RecT开发的DNA同源重组工程（Recombineering）能够对靶标DNA分子进行快速、精准、高效的修饰,不受限制性内切酶识别位点和DNA分子大小限制,已发展成为一种新型的基因工程技术。本文主要综述了噬菌体同源重组酶及其作用机制、在大肠杆菌及其他细菌中的应用和开发,以及在微生物次级代谢产物的挖掘、动植物转基因、病毒基因组克隆和修饰等方面的应用。原位激活沉默基因簇需要宿主特异性的DNA同源重组工程进行启动子和调控元件的修饰;异源表达次级代谢产物的首要步骤一般是通过RecET直接克隆大的DNA片段;动植物转基因复杂载体的构建效率在有了Red同源重组系统以后有了革命性的发展;RecET直接克隆和Red同源重组介导的感染性克隆构建和修饰方法,不仅有利于病毒基因组功能研究,同时也为载体疫苗开发提供了最优方案。     

云南黄檀属一新种

DalbergiamengsuoensisY.Y.Qian,sp.nov.Fig.1 SpeciesaffinisD．benthamiiPrain,sedfoliolispapyraceis,suprasecuscostaspubescentibus,paniculisterminalibus,floribus3.5－4mmlongis,leguminibus8－11cmlongis,3－3.3cmlatisdiffert. Frutexvelfrutexscandens;ramulivetibadii,albo-lenticellati,glabri,juvenilesviridesinsiccofusci,cerino-pubescentes.Foliapinnata5－15cmlonga;rhachidesetpetiolicerino-pubescentes;foliola2－3-jugata,papyracea,terminalialongeobovata,lateraliaoblongavellongeellipticavellon…     

广西黄檀属(蝶形花科)一新种—靖西黄檀

Affinis D. burmanicae Prain., sed differt fructibus,foliis et foliolis multo parvis, foliis 4-11 cm longis,foliolis 1-3.5 cm longis, 8-15 mm latis, paniculisbrevioris 2-5 cm longis, 1-3.5 cm latis, axillaribus velterminaiibus,calycibus longioribus 5-6 mm longis,vexillis apice obtusis vel emarginatis non deflexis.     

安徽皇甫山黄檀种群结构初步研究

通过选取9个25m×25m的样方,采用5m×5m的小样方为基本调查单位进行种群生态学的调查,研究了皇甫山黄檀种群结构,结果表明,皇甫山黄檀种群结构可分为:线性增长型种群、指数性增长型种群、线性下降型种群、指数性下降型种群等四种类型。对各样方的种群大小与大小级进行相关分析和函数拟合,各样方及整个种群的大小结构相关性不甚显著,而Q1和Q3的相关性较密切。种群结构稳中有升,该种群处于发育中期阶段。     

Red同源重组技术研究进展

伴随着分子生物学的发展,一种基于λ噬菌体Red重组酶的同源重组系统已应用于大肠杆菌基因工程研究。Red重组系统由三种蛋白组成:Exo蛋白是一种核酸外切酶,结合在双链DNA的末端,从5′端向3′端降解DNA,产生3′突出端;Beta蛋白结合在单链DNA上,介导互补单链DNA退火;Gam蛋白可与RecBCD酶结合,抑制其降解外源DNA的活性。Red同源重组技术具有同源序列短(40～60bp)、重组效率高的特点。这种技术可在DNA靶标分子的任意位点进行基因敲除、敲入、点突变等操作,无需使用限制性内切酶和连接酶。此外,这种新型重组技术可直接将目的基因克隆于载体上,目的基因既可来源于细菌人工染色体也可是基因组DNA。Red同源重组技术使难度较大的基因工程实验顺利进行,大大推动功能基因组研究的发展。     

中国黄檀属植物(豆科)一新记录

报道了一种黄檀属植物―南亚黄檀[Dalbergiavolubilis Roxb.(Leguminosae)]在中国的分布新记录。     

Red/ET同源重组技术在载体构建中的应用

Red/ET同源重组技术是以原有的重组技术为基础,利用Rac噬菌体ET系统或者λ噬菌体的Red系统进行外源基因重组的重组方法。该方法使同源重组过程变得更方便快捷。本文对Red/ET同源重组技术的原理,改进和载体构建方面的应用做了综述。     

红果黄檀—新异名

在比较研究标本馆标本的基础上,确认Dalbergia darlacensis P.H.H(o)& Niyomdham与红果黄檀(D.tsoi Merr.et Chun)为同种植物,并把前者作为后者的异名处理.