不同固定方法对植物细胞扫描电镜观察用冷冻断裂样品的影响

用冷冻断裂法在扫描电镜下研究了洋葱(Allium cepa)根端分生组织细胞内部的三维结构。采用了两种固定方法。冷冻断裂前只用1％锇酸固定的材料容易在细胞质和核之间断开,而用卡诺固定液(无水乙醇:冰醋酸3:1)前固定,然后再用1％锇酸固定的材料容易使细胞核断裂。前一固定方法适于研究细胞质的内部结构(细胞骨架的纤维、线粒体、内质网等及其三维分布关系):后一固定方法适于研究核内结构(染色质、核仁、核基质纤维)的三维形象,特别是核仁纤维中心染色质的三维结构。     

论粒线体的固定方法

粒线体是细胞质中的一些线状或粒状的小体,可用福马林-铬酸盐(如Regaud 氏液、Helly 氏液、Bensley-Cowdry氏液、Schridde氏液和Murray氏液等)和铬酸盐-锇酸(如Benda氏液、Champg氏液、Flemming氏液和Altmann氏液等)的混合液固定;用酸性复红或铁苏木精染色。     

水牛和黄牛肉孢子虫包囊超微结构研究

左仰贤(1988)曾报道一种寄生于水牛的肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp.)包囊,其光学形态和梭形肉孢子虫(S.fusiformis)、莱氏肉孢子虫(S.levinei)、枯氏肉孢子虫(S.cruzi)、毛肉孢子虫(S.hirsuta)的包囊均不同。本文用扫描和透射电镜对这五种肉孢子虫包囊的超微结构进行观察。 材料和方法 将包囊分别用0.85％生理盐水清洗,然后用2.5％戊二醛固定,(1)经脱水、干燥、喷金,用 Jsm 3.5 型扫描电镜观察;(2)用 0.1mol/L、pH7.2 磷酸盐缓冲液洗两次,1％ 锇酸固定,经脱     

菜粉蝶幼虫感染颗粒体病毒后线粒体形态异常变化的初步观察

病毒侵入昆虫后引起细胞器形态变化的报道很少。我们进行菜粉蝶颗粒体病毒组织病理观察时,在脂肪细胞中,观察到线粒体有异常形态变化现象,现简要报道如下。 用病毒悬液浸湿甘蓝叶,晾干后饲喂3龄幼虫,感染后第3天,截取虫体中段,戍二醛和锇酸固定,618环氧树脂包埋,醋酸铀染色,透射电镜观察。 在脂肪细胞的超薄切片中,可以看到有些线粒体近似环状或液泡状,在有的切片中,此种线粒体的比例很大(图版Ⅰ:2),但在正常幼虫脂肪组织的超薄切片中,极少观察到此种形状的线粒体(图版Ⅰ:1)。     

约氏疟原虫配子体形成的形态学特征

应用六氰酸铁钾和锇酸双染色法的透射电镜技术,对红内期疟原虫配子体形成过程中的形态生物学特征进行识别。结果表明,配子体是一渐进发育的单核、惰性(团块样、虫体不活跃)虫体,其核旁有一个由扁平囊和泡状小体极性排列组成的细胞器——高尔基体(Golgi complex),虫体被膜下有嗜锇小体。其雌性配子体的结构特点是核质较致密、内质网丰富和被膜下嗜锇小体多;而雄性配子体却是核质较疏松、线粒体发达、内织网和嗜锇小体少。结论是红内期疟原虫配子体形成与裂体增殖过程中形态结构的明显差别,雌雄配子体在结构与发育上明显的差异,都具有特定的生物学与生态学意义。     

观察真菌孢子的微结构的简便方法

真菌的形态、大小、表面结构是真菌分类中的重要依据。如何能用较简单的方法,得到较满意的照片呢?目前广泛应用扫描电镜来达到上述目的(A.Kaarik等,1983)。他们认为,在制片时,不同类群真菌的孢子用不同的固定方法。接合菌亚门、粘菌门和担子菌亚门的孢子用1％高锰酸钾固定1.5小时,用丙酮脱水,临界点干燥,真空镀金。半知菌亚门的孢子用1％锇酸(OsO_4)固定1.5小时,在丙酮中脱水,临界点干燥并镀金。子囊菌亚门的孢子是在室温下干燥,镀金即可。     

减压、低温条件下制样的几种植物液泡图象

样品制作中选用的固定剂不同,在电子显微镜下所得的图象差异甚大。高锰酸钾固定的样品中(Luft 1956,Mollenhauer1959),液泡是一个空泡,核也是一个空泡。用四氧化锇(Palade 1952)和醛类-四氧化锇双固定的样品(Sabatini等1963)核内有物质,但液泡仍是一空泡。所有电子显微技术样品制作都离不开固定、脱水、包埋等过程中化学试剂的反复处理,化学试剂处理细胞会抽去部分细胞内含物;或与细胞某些内含物结合形成络合物。从而     

晶体锇酸安瓿瓶的安全破裂法

锇酸是电镜样品制备中主要的固定剂,它是剧毒试剂,并被密封在壁较厚的安瓿瓶中,从晶体锇酸配制固定液时,须将安瓿瓶破裂,常用安瓿瓶的破裂方法是在洁净的安瓿瓶的中部用小砂轮或钻石刀划一痕,然后将安瓿瓶放入洁净的小棕色试剂瓶中,再用一洁净的粗玻璃棒的一端对准安瓿瓶的的中部一敲,使其破裂。此法要求敲击之力适度而准确,破裂不成功,可能安瓿瓶和棕色试剂瓶皆破或棕色试剂瓶破裂而安瓿     

百合花粉母细胞腺苷三磷酸酶反应产物的X-射线微区分析

百合早前期花粉母细胞经腺苷三磷酸酶反应处理后,一部分经过锇酸后固定和铀染色,一部分不经锇酸后固定和铀染色,其余的经锇酸固定,但不经铀染色,在此三种情况下,细胞质膜和染色质中都出现有致密的,电子不通透的沉淀。进一步的X-射线微区分析表明这些沉淀物中含有一定量的铅。X-射线微区分析结果也表明核膜和胞间连丝通道内部的酶反应沉淀中也含有铅,并且质膜、染色质和胞间连丝通道中酶反应沉淀中的铅较为丰富,细胞融合期染色质酶反应沉淀物中的铅含量较高,进入粗线期后,酶反应沉淀物中铅的含量下降。本研究结果表明百合早前期花粉母细胞的质膜、染色质、核膜及胞间连丝通道内部的确具有ATP酶活性;ATP酶在细胞融合过程中可能起重要作用。     

非酒精性脂肪肝病肝组织超微结构特点

目的:阐明非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的超微结构特点。方法:收集我校和其他单位送检的3例单纯性非酒精性脂肪肝,16例NASH患者和4例NAFLD肝硬化患者的肝穿刺组织。用2.5%戊二醛、1%锇酸双固定、Epon 812包埋,超薄切片70nm,醋酸铀和柠檬酸铅染色后,JEM-2000EX透射电镜观察。结果:单纯性脂肪肝患者主要表现为大小不等的脂滴沉积、以小脂滴为主,可互相融合。NASH患者的肝细胞都可出现大量脂滴积聚,为大小脂滴混合型、内容物主要为中等电子密度、比较均一的甘油三酯,部分脂滴周围可见磷脂成分,NASH患者肝细胞内脂滴也互相融合。肝细胞线粒体的超微结构改变包括多形性线粒体、基质颗粒增多、线粒体增大和嵴的丧失是主要的电镜异常发现,线粒体内还可见副晶格样包涵体。部分NASH患者肝细胞内可见Mallory小体。NASH患者肝细胞周围可见淋巴细胞浸润。肝血窦Kupffer细胞增生不明显,NAFLD肝硬化患者Disse间隙和肝细胞间可见胶原纤维增生。结论:NAFLD具有较为明确的超微结构改变,电镜检查有助于诊断。     

辐射诱导的小麦根尖细胞亚显微结构变化的初步研究

近年来,我们研究了辐射诱导的小麦根尖分生组织间期细胞亚显微结构的变化,现将初步结果报告于下:材料与方法小麦干种子分别用~(60)Co-γ射线(剂量为20000伦琴)和快中子(剂量为10~(11)中子/厘米~2)照射,然后将此种子与未处理的(对照)种子同时浸泡在培养皿中发芽,待主胚根伸长1—2厘米时切取根尖,用戊二醛-锇酸双重固定,乙醇或丙酮脱水,Epon 812包埋,用     

显示绿眼虫的鞭毛和细胞核的制片方法

绿眼虫(Euglena viridis)取材容易,所以在一般动物学教学中,常用作鞭毛虫纲的代表类型。鞭毛和细胞核是绿眼虫的重要细胞器。前者与运动有关,后者在分裂繁殖过程中起着重要的生理作用。此外,在眼虫属(Euglena)种的鉴别上、鞭毛明显的程度、细胞核的大小、形状和地位等,都是较重要的分类特征。但用眼虫一般的染色显示法,常不能获得理想的效果。笔者曾用下列方法染色制片,获得了较理想的结果,现将制作过程介绍于后。 (1)取1/4指管的眼虫培养液,加过半量的波因氏(Boiun’s)固定剂(波因氏固定剂的配方如下:饱和苦味酸溶液     

绒毡层及小孢子发育研究的扫描电镜样品制备

锇酸-二甲基亚砜—锇酸冷冻割断法制备的样品,在扫描电镜下,可观察绒毡层及小孢子发育过程,细胞形态保存良好,结构清晰,立体感强,为用扫描电镜研究植物细胞结构提供了一个有应用价值的方法。     

诺卡氏菌形放线菌枝菌酸的气相色谱分析

以已知的棒杆菌枝菌酸,红球菌枝菌酸及自诺卡氏菌典型株提取的枝菌酸为参照样品,用硅烷化的枝菌酸甲酮气相色谱分析方法,分析侧定了包括以前我们发表的两个诺卡氏菌种在内的7株诺卡氏菌形放线菌的枝菌酸。结果表明.鲜黄诺卡氏菌A100和黄粉诺卡氏菌N10的枝菌酸分子碳原子数(58-64)均在诺卡氏菌枝菌酸的范围内;而另一株原名珊瑚诺卡氏菌N21的枝菌酸碳原子数(32-40)则与红色红球菌8372一样在红球菌枝菌酸范围内。其余结果均与文献报道的相一致。本文还讨论了这一方法在诺卡氏菌形放线菌分类鉴定中的作用和意义。     

绒毡层及小孢子发育研究的扫描电镜样品制备

锇酸-二甲基亚砜一锇酸冷冻割断法制备的样品,在扫描电镜下,可观察绒毡层及小孢子发育过程,细胞形态保存良好,结构清晰,立体感强,为用扫描电镜研究植物细胞结构提供了一个有应用价值的方法。     

单殖目双睾吸虫(Diplorchis sp.)钩毛蚴眼点的超微结构

双睾吸虫自由生活的幼虫(钩毛蚴)是由寄生在沼蛙(Rana guentheri Boulcnger)膀胱内的成熟虫体所产的虫卵孵化而获得。按常规的方法清洗虫体后,于2％戊二醛和1％锇酸中双重固定,然后在各等级浓度的乙醇和丙酮中脱水,用618~#环氧树脂和Epon 812包埋剂浸透和包埋。经超薄切片后用醋酸铀和柠檬酸铅染色,最后在JEOL,JEM-100CXI,型透射电子显微镜下观察并进行显微摄影。     

体外培养的小猫脊髓神经元对辣根过氧化物酶的内吞现象

本工作的目的是用电子显微镜观察培养的小猫脊髓神经元摄取辣根过氧化物酶(HRP)的途经及其在细胞内的分布。将出生后1—10天小猫脊髓在体外培养8—30天的神经元,移放在去血清的199培养液内再培养1小时,然后在含0.25%或0.6%HRP的199培液内36℃温育5—20分钟。用2.5%戊二醛固定,经3,3′-二氨基联苯胺(DAB-HCl)和过氧化氢混合液对过氧化物酶进行酶反应后,用锇酸再固定,制备超薄切片标本。电镜观察在树突末端的生长锥、丝状足和充满小泡的丘状隆起(VFM)等处有内吞的HRP颗粒较多,这些HRP颗粒位于一层由质膜包裹的小泡、短管和杯形的细胞器内。在核周质内除有较多含HRP的小泡、短管和杯形的细胞器外,还有含HRP的多泡体,并看到这种细胞器与溶酶体联合的现象。高尔基复合体和线粒体内并没有HRP颗粒。     

硅烷化氨基树脂用作电镜标本的水溶性包埋介质

氨基树脂可以在存在水的情况下固化,从而可以避免生物样品中的脂类因接触脱水用的有机溶剂而造成的流失。掺入少量的低分子量聚乙二醇(PEG-400)可以降低甲醛—戊二醛—尿素合成的氨基树脂固化块的脆性。固化后的标本用双三甲基硅基乙酰氨(BSA)处理,可降低树脂的亲水性,提高超薄切片的质量。蛙卵经过戊二醛固定、锇酸再固定、单宁酸媒染和醋酸铀整体染色(G-O-T-U处理),氨基树脂包埋和硅烷化反应(APE-Si处理);切片后用醋酸铀和/或柠檬酸铅复染,可以见到卵黄粒脂蛋白的晶格和边缘区中的小“脂泡”结构,后者是常规的Epon 812包埋法难以清楚显示的。硅烷化氨基树脂可以作为研究脂类超微形态的一种电镜标本的水溶性包埋介质。     

用于电子显微镜微生物标本锇酸蒸汽固定和超薄切片的结晶碘蒸汽染色的一种装置

本文介绍一种简便的微生物标本锇酸蒸汽固定和超薄切片的结晶碘蒸汽染色装置(图1)。该装置用一有塞的青霉素小瓶,取1—3个聚乙烯包埋模囊盖,盖的直径正好小于瓶口内径,使囊盖有边沿的一面朝上,沿盖中心串插在一根大头针(或细玻棒)上,平均分成2—3层,大头针外套玻璃毛细管或涂石蜡防锈,然后将大头针倒插在小瓶塞上。固定标本时将有标本的铜     

正丁醇處理与磷酸酯酶之提取

在研究酵母“酸活性”磷酸酯酶(“acid”phosphatase) 的工作中,作者曾嘗試用各種提取方法,以期獲得較純淨之酶液,該酶甚易失效,各種方法皆未能奏效。至1950年Morton氏發表利用正丁醇處理以提取及淨化不易溶解之酶的工作,該報告中指出正丁醇可使酶與細胞中的脂蛋白(lipoprotein)或類脂質(lipid)分離(特別是磷脂類phospholipids),而獲得酶之水溶液或緩衝劑溶液。