64DP与人染色质的结合反应及细胞核内64DP的检测

现有结果表明64 DP(DNA结合蛋白)可能是一种急性期反应蛋白质。正常人每百毫升血清中含有约50mg的64 DP。目前,关于64 DP的生物学功能国内外尚无研究和报道。这方面的研究对阐明肿瘤及其它病理条件下血清64 DP含量增高的机制和意义有可能提供线索。 已知64 DP在体外具有和DNA结合的特性.它在体内的生理作用是否也和DNA有关呢?本实验首先分离纯化了人肝细胞染色质,用同位素标记的64 DP与染色质进行的结合实验及结合抑制实验表明64 DP能特异地与人染色质结合。进一步用~(125)I标记的兔抗64 DP抗体对人染色质作了固相放射免疫测定,结果定性地显示出染色质内可能含有64 DP。用兔抗64 DP抗体作为第一抗体,利用PAP免疫组织化学染色研究了16例正常肝组织切片,发现大多数切片(80％)中部分肝细胞核内有明显64DP显色颗粒。以上诸实验结果均提示细胞核内有64 DP存在,表明64 DP的生物学功能可能与它的DNA结合特性有关。     

ELISA检测肿瘤患者血清64DP

据报道64DP是一种与肿瘤相关的人血清DNA结合蛋白质,其现有的定量测定方法略嫌繁琐粗糙。本文采用亲和层析法纯化的兔抗64DP抗体,建立了简便灵敏的酶免疫测定法(ELISA)。部分样本经ELISA和火箭电泳两种方法平行测定,证明两者有良好的相关性。对70例恶性肿瘤及86例正常对照血清的测定结果,肿瘤组平均64DP水平显著高于对照组,其中尤以肝癌、胃癌及肺癌的增高更为显著。对非肿瘤其它疾病患者的检测发现感染和外伤也能造成血清64DP的迅速增加。本研究表明血清64DP的改变不仅仅局限于恶性肿瘤,它具有急性期反应蛋白质的特征。这使64DP作为肿瘤标志物应用于临床受到一定限制。     

表达GP64的重组HaSNPV的构建研究

杆状病毒的出芽病毒具有两类不同的膜融合蛋白, 组 I类型的杆状病毒利用的是膜融合蛋白GP64, 而组 II类型的杆状病毒利用的是膜融合蛋白F。本文以组II类型的HaSNPV为研究对象, 研究组I类病毒的GP64能否在组 II类病毒中正确表达和包装。利用 Bac to Bac系统, 构建了带有 AcMNPV膜融合蛋白 GP64 和增强型绿色荧光蛋白的重组病毒HaSNPVgp64 egfp , 同时构建了仅带有增强型绿色荧光蛋白的对照重组病毒 HaSNPVegfp , 通过对HaSNPVgp64 egfp 感染的HzAM1细胞及所产生的子代BV的Western blot检测, 证明GP64可在HzAM1中表达, 并被包装入子代BV。     

表达GP64的重组HaSNPV的构建研究

杆状病毒的出芽病毒具有两类不同的膜融合蛋白,组Ⅰ类型的杆状病毒利用的是膜融合蛋白GP64,而组Ⅱ类型的杆状病毒利用的是膜融合蛋白F.本文以组Ⅱ类型的HaSNPV为研究对象,研究组Ⅰ类病毒的GP64能否在组Ⅱ类病毒中正确表达和包装.利用Bac-to-Bac系统,构建了带有AcMNPV膜融合蛋白GP64和增强型绿色荧光蛋白的重组病毒HaSNPVgp64+egfp+,同时构建了仅带有增强型绿色荧光蛋白的对照重组病毒HaSNPVegfp+,通过对HaSNPVgp64+egfp+感染的HzAM1细胞及所产生的子代BV的Western blot检测,证明GP64可在HzAM1中表达,并被包装入子代BV.     

C群脑膜炎球菌多糖-rP64K结合物的制备及免疫原性

用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(CDAP)活化C群脑膜炎球菌多糖(GCMP),以己二酰肼(ADH)作为连接子,与重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白64 KD(rP64K)在碳二亚胺的(EDAC)作用下结合,制备GCMP-P64K结合物。纯化后免疫NIH小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗GCMPIgG抗体水平,并GCMP-TT结合物比较载体诱导的免疫抑制。所制备多糖-蛋白结合物(GCMP-P64K)保持了GCMP抗原特异活性,结合物免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GCMP血清IgG抗体,并能形成免疫记忆,为研究理想载体蛋白提供了新的思路。     

新型载体蛋白P64K在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化

用常规PCR方法从脑膜炎球菌中克隆出P64K基因,构建重组质粒pET28a-P64K转化BL21(DE3)宿主菌,经眦诱导表达筛选P64K蛋白的高表达菌株。结果证实P64K蛋白为胞内可溶性表达,表达量约占胞内总蛋白的30％。重组P64K蛋白经Butyl疏水柱、G200分子筛柱和Q阴离子柱三步层析后纯度达到95％以上,为今后进一步的功能和应用研究打下了良好的基础。     

家蚕核型多角体病毒囊膜蛋白GP64的原核表达

通过Primer Premier 5.0设计1对特异性引物,用于扩增家蚕核型多角体病毒囊膜蛋白GP64的部分DNA片段,对PCR扩增得到的DNA片段进行纯化,并对纯化后的双酶切DNA片段与经同样双酶切后的原核表达载体pET28a进行连接;对捕获有重组质粒pET28a-GP64的大肠埃希菌BL21（DE3）细胞进行IPTG诱导,通过SDS-PAGE对诱导产物进行电泳分析,结果表明扩增的目的片段获得了表达;通过His单抗对诱导产物进行Western Blot印迹分析,其结果表明诱导蛋白带为融合有组氨酸的目的蛋白。对原核表达的GP64截短蛋白和免疫佐剂进行充分研磨,将充分研磨后的匀浆液对昆明小鼠进行皮下多点注射,以制备的GP64多抗对家蚕核型多角体病毒粒子感染的BmN细胞总蛋白进行Western Blot印迹分析,结果在杂交膜上出现一条特异杂交带、其分子量大小约为64 ku,表明制备的GP64多抗可用于其功能的进一步研究。     

CD64指数与PCT、CRP联合检测在呼吸道感染疾病中的诊断价值

目的探讨中性粒细胞CD64指数、降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)对呼吸道细菌感染性疾病的诊断价值。方法采集已确诊的40例呼吸道细菌性感染患者血样和40例呼吸道病毒性感染患者血样做为实验组,40例经体检合格的健康者做对照组。应用流式细胞术检测CD64指数、免疫荧光法检测PCT、免疫散射比浊法检测CRP,并对其结果进行比对分析,应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析三种指标在呼吸道细菌感染中的诊断价值。结果细菌感染组CD64指数、PCT、CRP指数均值均明显高于对照组(P0.05),病毒感染组只有CRP与对照组差异有统计学意义(P0.05)。细菌感染组中CD64指数、PCT、CRP阳性率均高于对照组,分别为75.0%、72.5%、55.0%,病毒感染组只有CRP阳性率高于对照组。ROC曲线显示:CD64指数、PCT和CRP曲线下面积分别是0.859、0.793、0.675;灵敏度分别是90.0%、88.0%、83.0%;特异度分别82.0%、78.0%、74.0%。结论 CD64指数、PCT、CRP均可作为检测呼吸道细菌感染性疾病的指标。CD64敏感性和特异性最高,CRP敏感性与特异性最低。CD64指数、PCT和CRP联合检测可显著提高呼吸道感染性疾病的诊断灵敏度和特异度,对诊断和鉴别诊断具有重要意义。     

Does human attractin have DP4 activity?

Mutations in the mouse ATRN gene, which encodes attractin, offer links between this protein and pigmentation, metabolism, immune status and neurodegeneration. However, the mechanisms of attractin action are not understood. The protein was first identified in humans in a circulating form in serum. A protease activity was postulated similar to the membrane-bound ectoenzyme DP4/CD26. In the last decade, both DP4/CD26 and attractin were controversially described to be the major source of human serum DP4 activity. We purified attractin from human plasma, and found that the DP4-like activity of the preparation shows nearly identical kinetic properties to that of recombinant human DP4. In contrast, the native electrophoretic behavior of this activity is clearly different from human and porcine DP4, but co-migrates with the protein band identified as attractin by Western blotting and N-terminal sequencing. Nevertheless, a DP4 impurity could be demonstrated in purified plasma attractin and the activity could be removed by ADA affinity chromatography, resulting in a homogenous attractin preparation without DP4 activity. These results are substantiated by expression of different attractin isoforms, in which no DP4 activity was found either. This indicates that the multidomain protein attractin acts as a receptor or adhesion protein rather than a protease.     

转录因子家族DP蛋白与肿瘤关系的研究进展

E2F是一个重要的转录因子家族,通过调节靶基因的转录活性在细胞周期、DNA复制、生长、分化、凋亡等多种细胞进程中发挥关键的作用.转录因子家族DP与E2F结合形成E2F/DP异二聚体,对E2F的DNA结合亲和力和转录激活功能起到增强的作用,是生理状态下E2F必不可少的组成部分.DP蛋白家族有三个成员,即DP-1、DP-2和DP-3,其中DP-1具有三个异构体,DP-2具有四个异构体.DP蛋白家族成员以及异构体间存在结构和功能的差异,能通过组织特异性表达和显性负性方式在家族内部构成调节系统,对生理功能进行精细调节.E2F-1兼具抑癌和促癌双重作用,已得到人们的广泛关注.DP蛋白作为E2F的结合伴侣对其功能起到重要的调节作用,加之以DP-3在肿瘤细胞中的特异性表达,提示DP蛋白与肿瘤间存在密切的关系.本文就此将近年来的研究成果进行总结,并提出进一步研究的设想.     

SMC蛋白的结构和功能

近年来新发现的一类蛋白－染色体结构维持蛋白（SMC蛋白,structural maintenance of chromosome proteins)与染色体结构细胞周期性的动态变化紧密相关,它们参与有丝分裂染色体的集缩和分离,性染色体的剂量补偿效应,姐妹染色单体的内聚作用（cohesion),遗传重组和DNA修复等过程,本从生化特性和生物学功能两方面叙述了对SMC蛋白的研究。     

植物的热激蛋白

综述和讨论植物热激蛋白的产生和分布、基因表达调控及其功能的研究进展、存在的问题和研究的方向。     

Mr33000锰稳定蛋白的分离及其抗血清的制备

IS0lntiollofMr33000Mallgllll－StsbilizillgPilot6illslidPffp888tiollofAll－tiserumLIShiChong,DULin－Fang（Denytl7wftl寸Bkhm,Sicbol／nunz巾i1Wrsz‘B,ck呷曲610064）Mr33000锰稳定蛋白是植物光系统1（to且）中3种水溶性的外周多肽之一。据报道r‘,它参加与水裂解相关的锰复合物的稳定,由于它的去除致使锰复合物变得不稳定,并且失锰后影响Mr33000蛋白的结合［’j。而编码Mr33000蛋白的poO基因缺失突变的蓝藻则表现出异常缓慢的光异养生长速率,这是Mr33000去除后,PS！稳定性和功能受破坏所致＊a。体外从PS五颗粒…     

细菌性脓毒症患者中性粒细胞表面CD64及巨噬细胞炎性蛋白1α表达水平及诊断价值分析

目的探讨细菌性脓毒症患者中性粒细胞表面CD64(nCD64)及巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)的表达水平和诊断价值。方法选取2015年6月至2019年3月我院诊治的305例细菌性脓毒症患者为研究对象,根据急诊科脓毒症相关病死率评分(MEDS)结果将入选患者分为高危组和中低危组,另选取50例健康体检者作为健康对照组,检测外周血nCD64、MIP-1α表达水平,分析nCD64、MIP-1α对细菌性脓毒症的诊断价值。结果细菌性脓毒症患者血清nCD64、MIP-1α水平均明显高于健康对照组,高危组患者血清nCD64、MIP-1α水平明显高于中低危组,差异有统计学意义(均P0.05)。相关性分析显示nCD64、MIP-1α均与MEDS评分呈正相关(r=0.636、0.650,P0.05),同时nCD64、MIP-1α之间也存在正相关关系(r=0.781,P0.05)。nCD64对细菌性脓毒症的诊断效能高于MIP-1α(Z=2.654,P=0.014)。结论外周血nCD64、MIP-1α表达水平可反应细菌性脓毒症的严重程度,对细菌性脓毒症具有较高诊断价值。