猪胰脏中胰岛素拮抗肽的分离纯化及其性质的初步研究

从猪胰脏的酸醇提取液中纯化了一个新的活性多肽——胰岛素拮抗肽,它在整体和细胞水平上对胰岛素都有明显的拮抗作用。猪胰脏的酸醇提取液经CM-52、BioGel P-6、DEAE-52及RP-HPLC纯化后,可得到纯的胰岛素拮抗肽。它能剂量相关地抑制胰岛素在离体大鼠脂肪细胞中的促脂合成活性,抑制50％胰岛素活性时所需的胰岛素拮抗肽为2.0×10~(-10)mol/L与被拮抗的胰岛素剂量在同一水平上。该肽含有较多的碱性氨基酸,分子量的3 000,其N-末端是封闭的。胰岛素拮抗肽的上述理化特征及其对胰岛素的拮抗活性均不同于目前已知的胰脏活性多肽。它对脂肪细胞中胰岛素的拮抗作用可能具有重要的生理意义。     

胰多肽:药理作用和生理功能浅释

从胰脏提取胰岛素和胰高糖素的过程中,偶然地发现了胰多肽(pancreatie polypeptide,PP)。先是Kansas大学Kimmel医师在1968年的联合生命科学年会简报上报道了鸡胰多肽(avian PP)的不完全的部分化学组成。与此同时,本研究室Chance博士等从牛、猪胰脏中发现类似的多肽,而且得到它们全部的化学组成和氨基酸序列。随着牛、猪胰多肽的发现,本研究室又从人、狗、羊的胰脏提纯同类的多肽。胰多肽含有36个直线排列的氨基酸,牛、羊、猪、人的胰多肽在36个氨基酸中,只有一、二个氨基酸的差别。猪和狗的胰多肽完全相同。牛和鸡的胰多肽,在36个氨基酸序列中,只有15个完全同位(表1,2)。从演化的观点看来,低级动物和人的胰多肽有密切的关系。     

侧脑室注射牛胰多肽对家兔糖耐量和血清胰岛素浓度的影响

在家兔侧脑室内微量注射牛胰多肽能增加其糖耐量及血清胰岛素浓度。这种作用与牛胰多肽注射剂量有明显依从关系,并被预先皮下注射阿托品所部分阻断。结果提示,中枢给予牛胰多肽可能部分通过迷走神经途径增加血清胰岛素的释放而增加糖耐量。     

MALDI-TOF质谱技术研究多肽一级结构特性

海兔酸性多肽(Aplysiaacidicpeptide,AAP)和海兔胰岛素Cβ(AplysiaInsulinCβ,AICβ)的一级结构分别由27和15个氨基酸残基组成,其中前者含有6个亮氨酸残基(L),并组成3对LL键,后者仅有2个亮氨酸残基,组成1对LL键。选用基质辅助激光解吸离子化飞行时间(matrixassistedlaserdesorptionionizationtimeoffight,MALDITOF)质谱技术研究AAP,AICβ和它们分解产物的一级结构稳定性过程中,发现在弱酸性介质条件下,AAP和AICβ的LL酰氨键键能比LR键能(R表示除了L以外的氨基酸残基)更强,不易被分解。AICβ和猪血管紧张肽I(angiotensinI,AnI)样品中均含有单电荷的多聚肽。随着多肽聚合数递增,多肽质谱峰的相对强度剧减。AICβ在形成多聚肽过程中,发生释放H+的现象 。     

体外抑制鸡传染性支气管炎病毒的多肽鉴定

使用纯化的鸡传染性支气管炎病毒(IBV), 从12肽噬菌体随机展示肽库中筛选特异性结合多肽. 经过四轮淘筛, 得到10个阳性噬菌体, 进一步进行测序、血凝抑制活性及病毒抑制特性鉴定. 所有阳性噬菌体均能特异性阻断IBV对HeLa细胞的感染, 并能抑制IBV对鸡红细胞的血凝活性. 人工合成其中一条病毒抑制效价最高的线性多肽“GSH HRH VHS PFV”, 其细胞抑制试验证实该多肽同样具有病毒抑制特性. 以上结果为研制抗病毒分子及鉴定病毒与细胞相互作用功能域等奠定了基础.     

促胰液素、八肽胆囊收缩素和迷走神经刺激对狗胰液和血清中胰多肽含量的影响

对10只麻醉下主胰管内插置导管的家狗进行急性实验。用放射免疫测定法测定静脉注射促胰液素(8μg/kg)和八肽胆囊收缩素(CCK_8,40ng/kg)以及电刺激胸迷走神经前后的胰液和血清中胰多肽的含量。结果表明,基础胰液中含有大量胰多肽免疫活性物质,平均排出量为3130±2200pg/15min,其平均浓度高于血清水平40倍左右,但是个体之间的变异范围较大。当静脉注射促胰液素和 CCK_8以及电刺激胸迷走神经后,胰液胰多肽排出量和血清胰多肽水平均增多,其中以电刺激迷走神经后尤为明显。高峰都在刺激后15min 内出现。经促胰液素,CCK_8和迷走神经刺激后,胰液中胰多肽排出量比刺激前分别增加105%,52%和200%。外源性促胰液素或 CCK_8刺激后,胰液中胰多肽与 HCO_3~-出量之间或胰液中胰多肽与淀粉酶排出量之间,分别均呈一致的关系。本文结果提示,胰多肽不仅是一种内分泌,它亦具有外分泌的特性。迷走神经、促胰液素和胆囊收缩素对胰多肽的释放具有调节作用。     

胰蛋白酶的天然抑制剂

一、引言在自然界存在着一类能抑制胰蛋白酶的蛋白质。它们中固有些专一地抑制胰蛋白酶;有些除胰蛋白酶外,还能抑制其他生物活性物质,如胰凝乳蛋白酶、溶血纤维蛋白酶(plasmin)等;近年还发现一些所谓多头抑制剂(multiheaded inhibitor),它们能同时,并按一定比例地抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。胰蛋白酶抑制剂广泛地分布在动、植物中。这类蛋白质的生理作用,还不很清楚。在胰脏和胰液中的胰蛋白酶抑制剂据推想,此抑制剂可能使那些由胰蛋白酶原转变而来的胰蛋白酶在胰脏或其导管系统中失去活性,从而对于胰脏本身具有保护作用。显然,对它们的研究,将有助于对动、植物机体内某些     

促胰岛素释放肽和GLP-1类似物研究进展

近年来,从细菌、真菌等低等生物和爬行类、哺乳类等高等动物的体内,都发现存在着结构和功能相关、相似的促胰岛素释放肽或GLP-1类似物.目前国内外研究都在密切关注胰高血糖素样肽-1(glucagonl-ikepeptide-1,G LP-1)和G LP-1类似物等胰高血糖素家族肽,对其进行基因工程高效表达或通过组合化学方法修饰、改造,从而设计治疗Ⅱ型糖尿病的多肽类药物.但是,从天然生物体内,尤其是最近从两栖类动物皮肤分泌液中和响尾蛇毒素中发现了大量能稳定促进胰岛素释放的生物活性肽,却还没有受到足够的重视,它们将很可能为筛选和开发出安全、高效、半衰期长的治疗Ⅱ型糖尿病新药物提供全新的思路和广阔的前景.     

一种新发现的降压活性多肽—肾上腺髓质素（adrenomedullin）

肾上腺髓质素是最近发现的一种新的活性多肽,它广泛分布于机体多种组织中,具有扩张血管、降低血压、抑制内皮素和血管紧张素Ⅱ释放等作用。该活性多肽在正常机体血压调控及高血压发病中的作用正在研究中。     

噬菌体展示技术筛选抗轮状病毒多肽的试验研究

从噬菌体随机展示十五肽文库筛选出4个与轮状病毒粒子特异性结合多肽。经空斑减少抑制实验和MTT法分析表明其中3个多肽对病毒感染培养细胞具有抑制作用,其中序列为QSNPIHIITNTRNHP的C肽具有显著抑制作用,抑制效果达93%,另外2个多肽A和B抑制效果分别为40%与50%。经过多肽序列分析发现这3个十五肽具有2个保守序列,分别是第2至8个氨基酸残基SNPIHII和第12～15个氨基酸残基NIP。胰蛋白酶水解位点分析表明C肽无裂解位点,而A肽和B肽则分别具有3个和4个潜在水解位点。抑制病毒感染液中胰蛋白酶活性,发现A,B两肽也能显著地抑制病毒离体感染。说明所筛选的多肽2个保守序列的完整对抗病毒感染起着重要作用。C肽有望成为一种治疗轮状病毒感染的口服药物。     

类ACE抑制肽的合成及其活性分析

血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)通过作用于维持血压正常的肾素-血管紧张系统(rennin-angiotensin system, RAS)和激肽释放酶 激肽系统(kallikrein-kinin system, KKS),使其失衡导致血压升高．而ACE活性抑制肽可以竞争性地与ACE的活性中心结合,从而抑制ACE的活性,使血压降低．天然来源的ACE抑制肽与传统的降压药物相比效果较好,无毒副作用,对正常血压没有影响,对于高血压的治疗和人类健康具有重要意义. 本文以酪蛋白中提取的ACE活性抑制肽KVLPVP为先导肽,根据ACE抑制肽的结构特点,设计合成一系列的类ACE肽(similar ACE-like peptides). 利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)直接测定其体外ACE抑制活性. 结果表明,当芳香性的氨基酸残基Phe、Tyr、His和疏水性Val残基位于C-端时会提高多肽的ACE抑制活性,尤其是His位于C 端时,ACE抑制活性更强. 通过对比先导肽与所合成的类ACE肽的ACE活性抑制率,可以发现,类ACE肽的ACE活性抑制率均高于先导肽．基于不同氨基酸残基位于C-端时对多肽的ACE抑制活性的研究,可以为降血压药物分子设计和筛选提供基础.     

大规模生产人胰高血糖素

日本科学工作者目前建立一种方法用于大规模生产人胰高血糖素(注:原文glucogon应为glucagon),这是人胰脏产生的一类肽激素,与胰岛素作用相反,并扩大血糖含量。早些时候,尽管报道工程酵母细胞合成重组人胰高血糖素,但用于商业性生产,其生产水平仍然很低。     

发现一个胰多肽家族的新成员——神经肽Y

自从Kimmel等(1968)在鸡胰腺中分离出鸡胰多肽(PP)以来,人们相继由哺乳动物的胰腺中分离出牛、猪、羊、狗和人的胰多肽,并确定PP是由36个氨基酸残基组成的多肽。其后(1980),在Mutt实验室又由猪十二指肠提取物中分离出一种与PP结构类似的36肽,命名为酪酪肽(PYY),所谓PP家族便开始形成。由于用鸡PP或牛PP抗血清进行免疫组织化学研究发现,PP样免疫活性物质广泛分布在中枢神经系统中,因而人们一向认为,哺乳类动物的脑中存在着一种与PP在化学结构上有一定联系的肽类物质。但用放射免疫测定法却未能测出鸡PP、牛PP免疫活性。因此,脑中PP样免疫活性的实质一直没有搞清楚。最近,Totemoto等又从猪脑中分离出一种新的神经肽,命名为神经肽Y(neuropeptide Y,NPY),     

蛋白质来源活性多肽与心血管保护的新进展

心血管活性多肽是一种重要的生物活性多肽,研究发现了一系列活性多肽对心血管系统的自稳态调节起到非常重要的作用,包括中介素(IMD)、Apelin、胃饥饿素(Ghrelin)、胰高血糖素样肽(GLP1)、成纤维细胞生长因子(FGF21)等。这些活性多肽组织分布广泛,分子量小,免疫原性低,合成和代谢过程迅速,分泌后以配体与受体作用形式,通过细胞内多种信号通路调节心血管生理和病理生理过程,例如,血管的舒缩和新生、心脏缺血损伤后糖脂代谢及心肌重塑过程等。本文将对我们所研究的中介素以及其它几种重要的具有心血管保护作用的活性多肽及其在心血管发病中意义的研究进展做一综述。     

神经肽的研究进展

<正> 神经肽研究已有长足的进展。五十年代研究了脑垂体所分泌的各种多肽激素,六十年代研究的重点转移到由下丘脑所形成的许多激素释放因子和释放激素抑制因子,七十年代发现脑啡肽及阿片样肽,近几年来在众多的胃肠激素中又发现大部分活性肽亦存在于脑组织,迄今已发现40余种。据晚近文献报道,这些多肽可能作为递质或激素参与人类脑功能,内分泌功能和消化功能等方     

未来重磅炸弹药物——Exendin-4

Exendin 4 (AC 2 993)是Amylin公司和礼莱公司合作开发,由39种氨基酸组成的多肽。最初发现于Gi la畸形蜥蜴及墨西哥珠状蜥蜴唾液分泌物中,现已可通过化学法或基因工程法合成获得。Exendin 4为胰高血糖素多肽- 1(GLP 1)激动剂,具有促进胰岛素作用分泌、抑制胰高血糖素释放、降低甘油三酯水平和延迟胃酸分泌活性等药理作用。现已完成用于治疗Ⅱ型糖尿病的III期临床研究和治疗肥胖症的I期临床研究。Exendin 4的主要特点:可同时降低空腹和餐后血糖;可降低葡萄糖水平,不会造成低血糖,即在血糖水平升高时能刺激胰岛素分泌,在低血糖时则不发…     

乳源性生物活性肽及其生物学与保健意义

乳中含有大量的生物活性肽,或自然存在于乳中,或来自乳的酶解产物。前一类生物活性肽包括表皮生长因子(EGF) 、转化生长因子(TGF) 、神经生长因子(NGF) 、胰岛素及胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ(IGF—Ⅰ、IGF—Ⅱ) 。初乳中这类生物活性肽的浓度一般高于血液中的浓度。由于初生动物胃肠道的蛋白酶活性低以及乳中存在蛋白酶抑制因子,这些活性肽能在哺乳期动物的消化道内存活。饲喂EGF、胰岛素和IGF—Ⅰ可加快新生动物胃肠道的发育,因此其对调节哺乳期幼仔胃肠道发育有重大作用。后一类生物活性肽包括酪啡肽、免疫调节肽、血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE) 抑制肽,这些活性肽构成了乳蛋白的主要结构,并可经酶水解而释放出来,在乳消化过程中这些肽可能是潜在的生理调节因子。     

牛胰多肽（BPP）二级结构的红外光谱和圆二色谱分析

牛胰多肽（ｂｏｖｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ＢＰＰ）是胰脏分泌的一种含有３６个氨基酸的多肽「１」，ＢＰＰ能预防和治疗由胆酸盐诱发的大鼠急性胰腺炎，具有细胞保护作用。本文用傅里叶变换红外光谱（ＦＴ－ＩＲ）和圆二色谱（ＣＤ），对ＢＰＰ在水溶液中的二级结构进行了研究，两种方法的分析结果互相补充，进一步确定了ＢＰＰ在溶液状态的二级结构，本研究为进一步探讨ＢＰＰ抑制膜融合的机理打下     

下丘脑生长抑素神经元的研究

1967年,Krulich等发现,下丘脑提取物有抑制生长激素(GH)释放的作用,首先提出,下丘脑存在生长激素释放抑制因子(SRIF)。10年后,Brazeau等成功地分离、提纯、鉴定了SRIF,它为14个氨基酸组成的多肽,对GH释放抑制作用具有剂量反应关系。之后,人们又陆续发现了12肽、28肽、25肽的SRIF,它们和14肽的SRIF有相同的氨基酸顺序片段,并对GH有较强的抑制作用。随着基因工程的发展,学者们得以推断出SRIF的前体和前肽原。研究表明,各种哺乳动物具有生物活性的部分差别不大,其羧基端14个氨基酸序列为保守区。目前,将SRIF基因克隆并合成SRIF已成为现实,将SRIF广泛药用于临床已为期不远。     

神经多肽中的新成员：甘丙肽

甘丙肽(galanin,GAL)是由29个氨基酸残基组成的神经多肽,具有由123个氨基酸组成的前体蛋白,即前GAL原(prepro GAL)。甘丙肽样免疫反应物质(GAL-like immunoreactivity,GAL-LI)存在于脑和脊髓、周围神经系统和某些器官。在体内某些含有GAL-LI的细胞也存在儿茶酚胺、5-HT、GABA、乙酰胆碱等递质与神经多肽。新生鼠用辣椒素处理后,可减少脑内某些区域和脊髓内的GAL-LI的含量。GAL可减少血浆胰岛素的含量,增加血糖以及抑制肠道的运动。在大鼠第三脑室、人的静脉注射GAL,均可视察到血浆生长素含量增加。在大鼠下丘脑的室旁核内注射GAL可增强摄食活动。