抑制非酶糖基化食用菌的筛选及抑糖基化物质提取工艺优化

蛋白质非酶糖基化(non-enzymatic protein glycation,NEPG)是引起糖尿病并发症的主要因素之一,因此开发具有抑制非酶糖基化反应的天然活性物质对治疗糖尿病并发症有重大意义。本文以二甲双胍作为阳性对照,比较了灰树花Grifola frondosa、银耳Tremella fuciformis、黑木耳Auricularia heimuer、毛头鬼伞Coprinus comatus、猴头菇Hericium erinaceus、茯苓Wolfiporia cocos 6种食用菌水提物和醇提物在体外对蛋白质非酶糖基化反应抑制效果。结果表明,灰树花水提物对非酶糖基化反应有良好的抑制效果,食用菌醇提物对非酶糖基化没有抑制效果。利用二次正交旋转组合试验对抑制率最高的灰树花活性物质的提取条件进行了优化,确定了灰树花的最佳提取温度85℃,提取时间2.25h,料液比1:30,抑制率达到(96.28±0.16)%。灰树花水提物在预防糖尿病并发症方面有良好的应用前景。     

家蝇共生真菌的抗菌活性筛选及菌株CY-03的初步鉴定

利用平板分离法从家蝇中分离出14株家蝇共生真菌,活性筛选表明CY-03有较好的抗菌活性,在供试浓度为0.1 mg/m L时,CY-03发酵液乙酸乙酯萃取物对番茄早疫病菌和苹果树腐烂病菌具有较好的抑制作用,抑制率约60%;在供试浓度为30μg/滤纸片时,与阳性对照相比,乙酸乙酯提取物对枯草芽胞杆菌有中等的抑制作用,抑菌圈直径为21.0 mm。进一步研究CY-03发酵液不同极性溶剂萃取物的抗菌活性,结果表明其活性物质主要集中在中等极性部位,在供试浓度为0.1 mg/m L时,CY-03发酵液乙酸乙酯提取物对苹果树腐烂病菌、杨树溃疡病菌、番茄早疫病菌和苦瓜枯萎病菌等具有较好的抑制作用,抑制率均大于45%;在供试浓度为30μg/滤纸片时,乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和大肠埃希菌有中等的抑制作用,抑菌圈直径范围为14.8~23.0 mm。通过形态学特征观察和5.8S r DNA测序分析,初步确定该菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。CY-03作为微生物源杀菌剂值得进一步研究。     

新疆天山花楸黄酮类物质对酪氨酸酶的抑制机制

以新疆天山花楸的茎为材料,采用超声波辅助法提取得到天山花楸黄酮类物质。以L-多巴为底物,运用酶动力学方法研究黄酮类物质对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明:天山花楸黄酮类物质对酪氨酸酶有较强的抑制作用,导致酪氨酸酶二酚酶活力下降50%所需的提取物浓度(IC50)值为0.27 mg/m L。对酪氨酸酶的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,对游离酶的抑制常数(KI)和酶-底物配位化合物的抑制常数(KIS)分别为0.218和0.313mg/m L。1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)实验显示天山花楸黄酮类物质具有一定的抗氧化作用,引起DPPH·活性下降50%的黄酮类物质浓度(IC50)为0.18 mg/m L。本研究为进一步开发利用天山花楸中的果蔬保鲜及美白成分提供了理论依据。     

氨基葡萄糖对酪氨酸酶的抑制作用

通过对酪氨酸酶催化底物L-DOPA反应速率的观察测定,研究了氨基葡萄糖（G-NH2）对酪氨酸酶的抑制作用。在反应液中加入50μL浓度为2.2 mg/mL G-NH2时（体系中G-NH2终浓度为36μg/mL）,酶抑制率为50%。GNH2对酪氨酸酶的抑制作用是个复杂的过程,酶反应呈先促进后抑制。分析酶抑制曲线Lineweaver-Burk双倒数图,得出G-NH2为混合抑制剂,进一步研究发现多巴醌生产量会减少,抑制类型是不可逆抑制。     

黄芩素在化妆品中多功效研究及安全性评价

本文以黄芩素为研究对象,通过生化酶学法、自由基清除测试、最低抑菌浓度(MIC)测定及红细胞溶血实验等实验,对其进行美白、抗氧化、抗过敏、抑菌等功效研究及安全性评价。结果显示,浓度达到2.0 mg/m L的黄芩素,对酪氨酸酶的抑制率为60.20%;当浓度达到0.1 mg/m L和1.0 mg/m L时,其对DPPH·和·OH清除率分别为95.21%和66.69%;当浓度达到10.0 mg/m L时,对透明质酸酶的抑制率是52.51%;当浓度达到1.25 mg/m L时,其对5种菌均有抑制作用;其半数溶血率(HD_(50))为1.80 mg/m L,蛋白质变性指数(DI)为0.34,HD_(50)/DI(H/D)10。实验表明,黄芩素具有较好的美白、抗氧化、抗过敏、抑菌功效且具有安全性。     

一株放线菌代谢产物除草活性的初步研究

从土壤中分离筛选出1株编号为Z40的链霉菌菌株,其代谢产物具有明显的除草活性。室内生物测定结果表明,Z40菌株发酵液干物质的除草活性主要表现为抑制生长作用。对反枝苋的主根和主茎生长抑制中浓度(EC50)分别为276.76 mg/L和1 609.37 mg/L,对狗尾草的主根和主茎生长抑制中浓度分别为501.81mg/L和629.01 mg/L。浓度为10 000 mg/L对油菜的萌发抑制率和主茎生长抑制率均为100.00%,而对小麦的生长发育没有明显影响。田间试验结果表明,Z40菌株代谢产物对稗、狗尾草、铁苋菜的防治效果均在80%以上,抑制率分别为80.30%,81.59%和88.71%。     

Bacillus natto TK-1 产脂肽的结构鉴定及其诱导MCF-7细胞凋亡的研究

利用酸沉、醇提和薄层层析等方法从Bacillus natto TK-1发酵液中分离脂肽,经过HPLC、ESI MS和IR分析可知分离物是分子量为1036Da的脂肪酸链上有15个碳的环状脂肽surfactin。细胞增殖抑制实验显示surfactin在体外能抑制肿瘤细胞MCF-7的增殖,并且呈现出浓度和时间依赖关系,其中细胞被处理48 h时的IC50是38.77mg/L。通过HE染色观察和TUNEL实验发现surfactin可诱导MCF-7细胞凋亡,而且这种抑制作用呈现明显的时间依赖性。     

干酪乳杆菌JH23代谢产物对单胺氧化酶的抑制作用

本文旨在分离干酪乳杆菌JH-23中具有抑制单胺氧化酶(MAO)活性的代谢产物.用乙酸乙酯对干酪乳杆菌JH23发酵液进行抽提,得到的脂溶性成分和水溶性成分在一定浓度范围内对MAO的抑制活性呈较好的量效关系.其中,脂溶性成分对MAO-A、MAO-B抑制作用的IC50分别为1.97和5.67 mg/mL;水溶性成分对MAO-A、MAO-B抑制作用的IC50分别为1.59和4.83 mg/mL.抑制特征曲线显示,两者对MAO-A与MAO-B的抑制作用均呈竞争性抑制.从水溶性成分中分离得到的活性组分W1对MAO-A、MAO-B抑制作用的IC50分别为0.33和1.13 mg/mL.通过进一步分离,以及红外和质谱分析,确定了组分W1中具有较强MAO抑制作用的物质为琥珀酸.     

一株具有抑制单胺氧化酶作用的干酪乳杆菌筛选

【目的】通过体外模型从健康人体粪便内分离筛选出具有抑制单胺氧化酶(MAO)活性的乳酸菌,为今后乳酸菌体内抗衰老的研究提供参考。【方法】采用单胺氧化酶体外抑制模型对乳酸菌的发酵上清及无细胞提取物进行了筛选,并对筛选出的样品进行了两种指标的测定,即样品的剂量效应,以及样品与酶的预保温时间对酶活抑制率的影响;同时利用膜分离技术对不同分子量范围的样品进行了MAO的抑制测定。以筛选出的菌株JH-23为目的菌,通过16S rDNA序列分析及API细菌鉴定系统对菌株进行鉴定。【结果】筛选出的菌株JH-23无细胞提取物对MAO的抑制率达到33.7%。样品经冻干后,在反应浓度为16 mg/mL时抑制率达到53.2%,且MAO抑制率随预保温时间的增加而上升,在30 min之后抑制效果趋于平稳;粗样品经48 h透析后,透析液中的MAO抑制率较透析前明显升高。菌株JH-23的鉴定结果显示其属于干酪乳杆菌。【结论】开发了一种以单胺氧化酶作为靶位酶的新式体外筛选模型,该模型方便快捷且灵敏性高,对之后的抗衰老体内研究有所帮助。筛选出的干酪乳杆菌JH-23细胞裂解物对MAO有抑制作用,其中起到MAO抑制作用的主要是细胞内的小分子类物质。     

灵菊七脂溶性成分抑制α-葡萄糖苷酶活性及其成分分析

体外测定了灵菊七石油醚萃取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并采用GC-MS联用仪分析灵菊七石油醚萃取物的化学成分。结果表明,灵菊七石油醚萃取物对α-葡萄糖苷酶有较好的抑制活性,浓度在5 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为59.6%。经GC-MS分析从灵菊七石油醚萃取物中鉴定出17个化合物,占流出峰总面积的78.1%。石油醚萃取物中的萜类化合物可能是其抑制α-葡萄糖苷酶活性的主要物质。