桃红四物汤对缺糖缺氧大鼠脑微血管内皮细胞VEGF、VEGFR-2、Akt基因及蛋白表达的作用机制研究

摘要 目的：探讨桃红四物汤对缺糖缺氧（OGD）大鼠脑微血管内皮细胞（rBMECs）血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2）、蛋白激酶B（Akt）基因及蛋白表达的影响及其作用机制。方法：取rBMECs进行培养并随机分为正常组培养、模型组培养、桃红四物汤（0.4 mg/mL）组和桃红四物汤（0.8 mg/mL）组,除正常组外,其余三组采用氧糖剥夺实验构建OGD损伤模型。桃红四物汤组在造模前1 h按0.4 mg/mL、0.8 mg/mL浓度加入桃红四物汤,而正常组及模型组则加入等量体积生理盐水。实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹试验检测VEGF、VEGFR-2、Akt基因及蛋白表达情况。结果：与正常组比较,模型组细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,桃红四物汤（0.4 mg/mL）组和桃红四物汤（0.8 mg/mL）组均降低,且以桃红四物汤（0.8 mg/mL）组最为显著（P＜0.05）。与正常组比较,模型组rBMECs中Akt、VEGFR-2、VEGF相对mRNA和蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,桃红四物汤（0.4 mg/mL）组和桃红四物汤（0.8 mg/mL）组显著降低,且以桃红四物汤（0.8 mg/mL）组最为显著（P＜0.05）。结论：桃红四物汤可能通过降低OGD条件下rBMECs中VEGF、VEGFR-2、Akt基因及蛋白表达水平,从而发挥抑制内皮细胞的凋亡,保持内皮细胞的完整性,这可能是桃红四物汤对脑保护的机制之一。     

桃红四物汤对膝关节骨折患者血沉，CRP及TNF-α水平的影响及其临床疗效

目的:探讨桃红四物汤在膝关节骨折中的应用及对血沉、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:112例膝关节骨折患者按抽签法分为对照组与实验组,各56例,对照组予以常规治疗,实验组基于对照组加用桃红四物汤治疗,比较两组血沉,CRP、TNF-α、白细胞介素-1(IL-1),红细胞比积、血浆黏度、全血低切黏度、全血高切黏度,中医症候积分,膝关节功能。结果:实验组血沉,CRP、TNF-α、IL-1、红细胞比积、血浆黏度、全血低切黏度、全血高切黏度低于对照组(P0.05)。实验组中医症候积分低于对照组(P0.05)。实验组膝关节功能优良率高于对照组(P0.05)。结论:桃红四物汤可促进膝关节功能的恢复,降低血沉、CRP、TNF-α水平,值得推广。     

一体化病证结合帕金森病大鼠模型中医证候属性研究

目的探讨6-OHDA帕金森病（PD）大鼠模型的中医证候属性。方法 采用经典的6-羟基多巴胺损毁注射法制作PD模型,随机分为模型组和药物治疗组,并分别采用天麻钩藤饮、桃红四物汤和涤痰汤进行反证治疗,同时设立正常对照组、假手术组。分别观察各组动物的神经行为学、舌象、氧化应激、环核苷酸、血管活性物质等的变化,从症状（行为学和舌象）、药物治疗反证、客观检测指标等方面对6-羟基多巴胺制作的PD模型进行综合分析,评价该模型的中医证候属性。结果（1）舌象：PD模型大鼠显微舌象分析结果为红舌。（2）行为学方面：PD模型大鼠的旋转圈数明显升高,与各药物组比较,差异均有显著性（P〈0.01）;天麻钩藤饮与桃红四物汤组、涤痰汤组比较,差异亦均有显著性（P〈0.05）,而桃红四物汤组与涤痰汤组差异无显著性（P〉0.05）。（3）客观指标：与正常对照组、假手术组比较,PD模型组MDA、cAMP、ET、TXB2含量明显升高,SOD、GSH、GSH-Px、cGMP、6-keto-PGF1α含量下降（P〈0.01）;天麻钩藤饮可明显降低MDA、cAMP、ET、TXB2（P〈0.05或P〈0.01）,升高SOD、GSH、GSH-Px、cGMP、6-keto-PGF1α（P〈0.01）,桃红四物汤组、涤痰汤可升高SOD、GSH、GSH-Px（P〈0.05,或P〈0.01）,降低cAMP（P〈0.05）、ET（P〈0.01）。天麻钩藤饮与涤痰汤组在SOD、GSH、cGMP,与桃红四物汤组在SOD、GSH、GSH-Px、cGMP、6-keto-pgf1α、TXB2,差异有显著性（P〈0.05,或P〈0.01）。涤痰汤组与桃红四物汤组TXB2（P〈0.05）,余各指标间差异无显著性（P〉0.05）。结论 6-羟基多巴胺制作的PD大鼠模型的中医证候属性属于阴虚动风证。     

联合高分辨率MRI和micro-CT评价桃红四物汤对兔股骨头坏死的修复作用

目的建立激素性股骨头坏死(SIONFH)家兔模型,联合高分辨率MRI和micro-CT评价桃红四物汤(THSWD)对于SIONFH微观骨性结构破坏的修复作用。方法将25只新西兰兔随机分为3组:正常组5只、模型组和中药组(桃红四物汤组)各10只,采用内毒素(LPS)联合甲强龙(MPS)的方法制备激素性股骨头坏死模型,中药组给予0.3 g/kg桃红四物汤混悬液灌胃,正常组和模型组灌服等体积超纯水。实验第8周分别进行股骨头部3.0 T高分辨率磁共振影像仪高分辨率MRI检查,对股骨头部苏木精-伊红染色病理检测及micro CT检测。结果1)高分辨率MRI中模型组股骨头内可见低信号带;中药组股骨头外形趋于正常,股骨头内近骨骺处有小块低密度区,大部分骨组织灰度值正常。模型组和正常组相比,结构参数前者ROE值增加,ROE/NR比例增加,中药组与模型组相比,ROE值减少,ROE/NR比例减少,差异有显著性(P0.05)。2)经苏木精-伊红染色中,模型组可见部分骨小梁断裂,骨细胞核固缩,骨小梁空骨陷窝,骨髓细胞坏死,差异有显著性(P0.05),中药组可见成骨活动仍较为活跃,骨小梁形态较好。3)在micro-CT中,模型组与正常组相比,前者BV/TV、Conn.D.、SMI、Tb.N、Tb.Th、值降低,BS/BV、Tb.Sp增高。中药组中,BS/BV、Tb.Sp显著低于模型组,Conn.D.、SMI、Tb.N增高,差异有显著性(P0.05),ROI三维重建可见模型组骨小梁紊乱,可见普遍断裂,骨质较少;中药组相对而言骨质改善,骨小梁有局部性修复。结论桃红四物汤能促进兔SIONFH模型的微观骨性结构修复和生物力学环境改善。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨桃红四物汤促进老年股骨粗隆间骨折患者PFNA术后骨折愈合的疗效及其机制

摘要 目的：基于磷酯酰肌醇3激酶（PI3K）/丝氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路探讨桃红四物汤促进老年股骨粗隆间骨折患者股骨近端抗旋髓内钉（PFNA）术后骨折愈合的疗效及其机制。方法：选取2021年7月-2022年12月期间遂宁市中医院收治的90例老年股骨粗隆间骨折行PFNA术患者,按照随机数字表法将患者分为对照组和研究组,各为45例。对照组术后接受常规干预,研究组在对照组基础上接受桃红四物汤干预。对比两组中医证候积分、骨折愈合时间、Harris髋关节功能评分、血液流变学、PI3K/Akt信号通路相关指标。结果：治疗后研究组髋部疼痛、痛有定处、神疲乏力、患肢软而无力、头晕眼花、失眠健忘、自汗畏风寒、胸闷气短、肌肤甲错、面色晄白无华评分和总分低于对照组（P<0.05）。研究组的骨折愈合时间短于对照组,Harris髋关节功能评分高于对照组（P<0.05）。研究组的红细胞压积、血浆比黏度、全血比黏度、红细胞电泳时间低于对照组（P<0.05）。研究组治疗后PI3K mRNA、AktmRNA高于对照组（P<0.05）。结论：老年股骨粗隆间骨折患者PFNA术后使用桃红四物汤,可促进患者临床预后转归,降低中医证候积分,促进髋关节功能恢复,缩短骨折愈合时间,改善机体血液流变学,调节PI3K/Akt信号通路表达。     

四物汤对再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞增殖的影响研究

目的研究四物汤对再生障碍性贫血（AA）小鼠骨髓细胞体外增殖的影响,探讨其治疗AA的机制。方法采用流式细胞仪、骨髓造血祖细胞培养等技术,检测四物汤对AA小鼠骨髓细胞的增殖变化。结果 四物汤能促进骨髓有核细胞进入G2／S期、增加CFU—GM、CFU-E、BFU-E集落数,且与自然恢复组有明显增强的差异。结论 四物汤在体内有促进AA小鼠骨髓细胞增殖的作用,为补血药治疗AA提供了实验与理论依据。     

抑制消减杂交和辐射小鼠血虚模型筛选"四物汤"诱导表达的基因

应用抑制性消减杂交技术构建受辐射小鼠血虚模型在中药四物汤诱导前后消减cDNA库,并从中克隆鉴定出与四物汤药效相关基因。从受辐射小鼠四物汤诱导前后骨髓细胞中提取mRNA并合成cDNA,分别作为tester和driver进行消减杂交及抑制性PCR,将PCR产物与载体连接构建cDNA库,高效电转化大肠杆菌进行库扩增,随机挑取其中的克隆进行酶切、测序分析。成功构建了具有高消减效率的受辐射小鼠四物汤诱导前后的消减cDNA库。库挑选得到512个阳性克隆。随机挑取30个插入片段测序,生物信息学分析结果显示大部分与红细胞分化、骨髓组织修复、结构重建有密切关系,其中8个为新基因片段。应用抑制性消减杂交技术所构建的受辐射小鼠四物汤诱导前后cDNA消减库为大批量筛选、克隆四物汤药效特异性相关基因奠定了基础。并从分子水平上发现四物汤对抑制凋亡、促进骨髓组织修复和结构重建、诱导红细胞分化的基因具有调节作用,可能和四物汤补血作用有关。     

多杀菌素和荧光桃红B对橘小实蝇取食的影响

40mg/kg多杀菌素(spinosad)或1000、3000mg/kg荧光桃红B(Phloxine-B)均不影响3日龄橘小实蝇雌Bactrocera dorsalis(Hendel)、雄虫对蔗糖的取食量(P>0.05);与蒸馏水对照和马拉硫磷对照相比,40mg/kg多杀菌素或1000mg/kg荧光桃红B对雌、雄虫吐食率也无显著影响(P>0.05),但3000mg/kg荧光桃红B对雌、雄虫吐食率有极显著影响(P<0.01)。40mg/kg多杀菌素或1000mg/kg荧光桃红B对6日龄橘小实蝇雌、雄虫对蔗糖的取食量与蒸馏水对照无差异(P>0.05);3000mg/kg荧光桃红B对雌虫的取食量与蒸馏水对照有显著差异(P<0.05),与马拉硫磷对照无差异(P>0.05),对雄虫的取食量与蒸馏水对照无显著差异(P>0.05),与马拉硫磷对照有显著差异(P<0.05)。与蒸馏水、马拉硫磷相对照,40mg/kg多杀菌素或1000mg/kg荧光桃红B对雌、雄虫的吐食率均无显著影响(P>0.05),而3000mg/kg的荧光桃红B对雌、雄虫的吐食率均有极显著影响(P<0.01)。     

桃红颈天牛成虫的交配行为及对不同寄主植物的栖落和产卵选择性

【目的】桃红颈天牛Aromia bungii是一种钻蛀性害虫,主要以蔷薇科果树和观赏树木为寄主。本研究旨在搞清楚桃红颈天牛成虫的交配产卵行为及其对不同寄主植物的栖落和产卵选择性。【方法】选择苹果Malus pumila、山樱花Prunus serrulata var. spontanea、桃Prunus persica、西府海棠Malus micromalus、毛樱桃Prunus tomentosa、秋子梨Pyrus ussuriensis、杏Prunus armeniaca和红叶李Prunus cerasifera var. atropurea 8种寄主植物木段,构建为成虫的活动场所,观察桃红颈天牛成虫的交配和产卵行为,并测定桃红颈天牛成虫在不同寄主木段上的栖落数量和产卵量。【结果】桃红颈天牛成虫的交配行为分为避让、打斗和交配3种行为。交配过程可分为相遇抱对、插入输精、交配后陪护3个阶段。桃红颈天牛雌虫产卵时无刻槽行为,喜欢将卵产于较为狭窄的缝隙中。雌虫偏好在桃树木段上栖落,雄虫则偏好在毛樱桃木段上栖落。李亚科李属的桃是桃红颈天牛最喜欢的产卵寄主木段,而雌虫在苹果亚科的苹果、海棠和秋子梨木段上产卵极少。相关性分析结果表明雌虫在寄主木段上的栖落数量与产卵量占比间存在正相关性,雄虫在寄主木段上的栖落数量与雌虫在寄主木段上的栖落数量之间也存在正相关性。【结论】桃红颈天牛雌成虫最喜欢桃树木段,雄虫对寄主植物的选择性与雌虫并不完全相同。     

不同寄主来源种群花绒寄甲成虫对桃红颈天牛幼虫虫粪的行为趋性和种群控制效果

【目的】桃红颈天牛Aromia bungii是危害桃、杏、李、樱桃的主要蛀干害虫,花绒寄甲Dastarcus helophoroides是一种能有效防治多种天牛类林木钻蛀害虫的重要天敌昆虫。本研究通过比较不同寄主来源种群花绒寄甲对桃红颈天牛幼虫虫粪的行为反应和对幼虫控制能力的差异,旨在筛选能够有效防治桃红颈天牛的花绒寄甲种群。【方法】采用Y型嗅觉仪测定了6个不同寄主来源种群花绒寄甲成虫对桃红颈天牛幼虫虫粪的行为趋性;采用纱网罩受害原木模拟自然条件,释放不同种群花绒寄甲成虫测定了其对桃红颈天牛的致死效果。【结果】行为趋性结果表明,源自松褐天牛和云斑天牛的花绒寄甲种群对桃红颈天牛幼虫虫粪表现出明显的正趋向反应,而源自光肩星天牛、星天牛、锈色粒肩天牛和栗山天牛这4个种群的花绒寄甲对桃红颈天牛幼虫虫粪均未表现出明显的趋向反应。持续2年的寄生控制实验表明,源自光肩星天牛的花绒寄甲种群致死效果较好,天牛死亡率为52.86%±5.97%,源自松褐天牛、云斑天牛、栗山天牛和锈色粒肩天牛的花绒寄甲种群控制效果依次降低,天牛死亡率分别为35.14%±5.55%,32.88%±5.50%,26.09%±5.29%和10.94%±3.90%,源自星天牛的花绒寄甲种群未显示出对桃红颈天牛的控制作用。【结论】利用花绒寄甲防治桃红颈天牛时,应选择源自松褐天牛、云斑天牛或光肩星天牛的花绒寄甲种群。     

桃红颈天牛成虫的交配行为及对不同寄主植物的栖落和产卵选择性

【目的】桃红颈天牛Aromia bungii是一种钻蛀性害虫,主要以蔷薇科果树和观赏树木为寄主。本研究旨在搞清楚桃红颈天牛成虫的交配产卵行为及其对不同寄主植物的栖落和产卵选择性。【方法】选择苹果Malus pumila、山樱花Prunus serrulata var.spontanea、桃Prunus persica、西府海棠Malus micromalus、毛樱桃Prunus tomentosa、秋子梨Pyrus ussuriensis、杏Prunus armeniaca和红叶李Prunus cerasifera var.atropurea 8种寄主植物木段,构建为成虫的活动场所,观察桃红颈天牛成虫的交配和产卵行为,并测定桃红颈天牛成虫在不同寄主木段上的栖落数量和产卵量。【结果】桃红颈天牛成虫的交配行为分为避让、打斗和交配3种行为。交配过程可分为相遇抱对、插入输精、交配后陪护3个阶段。桃红颈天牛雌虫产卵时无刻槽行为,喜欢将卵产于较为狭窄的缝隙中。雌虫偏好在桃树木段上栖落,雄虫则偏好在毛樱桃木段上栖落。李亚科李属的桃是桃红颈天牛最喜欢的产卵寄主木段,而雌虫在苹果亚科的苹果、海棠和秋子梨木段上产卵极少。相关性分析结果表明雌虫在寄主木段上的栖落数量与产卵量占比间存在正相关性,雄虫在寄主木段上的栖落数量与雌虫在寄主木段上的栖落数量之间也存在正相关性。【结论】桃红颈天牛雌成虫最喜欢桃树木段,雄虫对寄主植物的选择性与雌虫并不完全相同。     

血虚证动物模型的标准化研究初探

目的：建立标准化的血虚证动物模型。方法：采用慢性失血法、溶血法和骨髓抑制法制造三种血虚证模型,观察一般情况和与血发生有关的实验室指标,并用四物汤反证造摸效果。结果：三种动物模型均符合血虚证表现,同时出现外周血、骨髓有核细胞数目和细胞周期的改变,四物汤对3种动物模型均有一定疗效。结论：建立了3种符合标准化的血虚证模型。     

牛肝菌属卷边组Boletus sect. Appendiculati物种的分子识别

依据牛肝菌属卷边组Boletus sect. Appendiculati内7个物种的核糖体基因rDNA内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列比对,设计5对ITS特异引物,分别用于卷边牛肝菌Boletus appendiculatus与亚卷边牛肝菌B. subappendiculatus、卷边牛肝菌与拟桃红牛肝菌B. pseudoregius、华靛牛肝菌B. roseoflavus与卷边牛肝菌B.?appendiculatus、华靛牛肝菌与华美牛肝菌B. speciosus、拟桃红牛肝菌与华美牛肝菌的相互识别。ITS区段的PCR扩增结果表明,5对ITS特异引物皆成功扩增出可用于辨别这些近缘物种的目的条带。但未能设计出ITS特异引物,以识别华靛牛肝菌与桃红牛肝菌B. regius两个近缘物种。     

近平滑念珠菌的形态转换观察

目的观察近平滑念珠菌在不同培养基的形态转换现象,以及温度对其形态转换的影响。方法收集近平滑念珠菌正常人皮肤携带株及临床致病株和标准株,接种于改良Lee培养基和含桃红B的YPD培养基,观察其不同形态转换,以及温度变化对光滑(W)与皱褶(O)形态转换的影响。结果近平滑念珠菌在Lee培养基和含桃红B的YPD培养基上,均可以出现多种形态以及一定频率W-O转换现象。在观察W向O形态转换过程中发现,与25℃培养温度相比,37℃条件下光滑菌落形态占更多的比例。结论近平滑念珠菌体外培养时存在形态转换及W-O转换现象,且于37℃时更易保持光滑形态。含桃红B的YPD培养基也可以用于基本的W-O形态转换观察。     

基于专家问卷反馈的头痛活血化瘀药物功效强度及用药情况初探

目的:以专家临床经验为积淀,对治疗头痛活血化瘀药物功效强度的量化及用药规律进行初步的探讨。方法:基于专家咨询及中医传承辅助平台软件,将筛选出的活血化瘀中药的专家意见集中程度、协调程度、药物功效强度及常用度,采用Kmeans聚类分析法进行统计分析。结果:对于治疗头痛中活血化瘀功效较强的药物,专家意见在川芎、红花、莪术等,川芎、赤芍、桃仁等协调程度较高,川芎、当归、赤芍等活血化瘀功效较强且临床治疗血瘀头痛中较常使用。结论:对于活血化瘀药物在治疗头痛中的应用,应以辨证论治为先,活血化瘀药物可选择川芎、当归、赤芍等,结合疼痛不同部位选用引经药。此外,虫类药物在治疗血瘀头痛中起不可替代的作用。     

桃红颈天牛形态记述的订正

桃红颈天牛 Aromia bungii Fald.是桃、梅、杏、李等果树的一种重要害虫,在我国南北许多省区都有分布,特别在华中、华东和华南为害桃树甚烈。 桃红颈天牛由于为害桃和前胸红色而得名。有了这个名称,容易使人们误认为,只有前胸红色的而又为害桃的天牛,才是桃红颈天牛。二十多年来国内有关天牛科的著述不都是这样记述的吗?！这个问题在五十年代就曾引起了我们的疑问。当时我们的校园里种有许多桃树,常年受红颈天牛为害。可我们所见到的只有少数是“红颈”的,多数是“黑颈”(即全体黑色)。根据国内许多书本上的形态记述,前者应为桃红颈天牛,后者则无从查对。有的同志在疑惑之余,只好把后者在标签上写了“桃黑天牛”这个新名。     

活血化瘀类中药抗肝纤维化作用的计算药理探讨

如何防治肝纤维化是目前备受关注的问题,活血化瘀类中药治疗肝纤维化有良好的效果。研究发现,虽然活血化瘀类中药有效组分结构相似性不高,但是理化性质比较相似。与实验阶段药物和中药数据库中全部活性成分相比,活血化瘀类中药有效组分的化学空间分布更接近已知药物,约90%的有效组分符合Lipinski五规则。基于靶点蛋白作用通路的研究发现,活血化瘀中药通过直接作用或间接影响纤维化相关蛋白,并且多靶点多通路协同作用于多条生物路径,直接抑制TNF或间接调控NF-kappaB是其中典型的两条途径。这些研究结果可为阐明活血化瘀类中药的作用机制提供更多信息,有助于进一步筛选抗肝纤维化作用药物。     

两种天牛幼虫的生物学特性

<正> 桃红颈天牛Aromia bungii Faldermann主要为害桃、杏、李等果树。 梨眼天牛Bacchisa fortunei Thomson主要为害苹果、梨等果树。受害株树势衰弱、枝条生长缓慢,严重时干枯死亡。 自1972年开始对幼虫为害进行了观察。 桃红颈天牛在山西太谷地区三年一代。幼虫于8月上、中旬全部孵化即蛀入皮层内为害,随虫体增长,逐渐蛀入木质部。 第一年幼虫越冬时体长5—10毫米,多数为7—8毫米;第二年体长25—30毫米;第三年     

桃红颈天牛的发生与防治

桃红颈天牛是为害桃、杏、李等核果类的主要害虫。果树受害后未老先衰或枯死,有碍于果品产量的增长。 桃红颈天牛在北京地区两年发生一代,从6月下旬至9月上旬为成虫发生期,7月中旬至8月中旬为发生盛期。成虫产卵于距地面一尺左右的树干或主枝的粗皮缝隙内。初孵化幼虫头朝下蛀入韧皮部为害,经过休眠越冬,于翌年春天继续向下为害木质边材。当幼     

原生质体技术选育桃红侧耳优良菌株

研究了桃红侧耳原生质体的制备及再生,并进行了原生质体再生株的筛选工作。实验表明,培养5天的桃红侧耳菌丝体30℃酶解3h原生质体数目可达8.4×107/mL。原生质体再生率在1号再生培养基上最高,为6.9%。再生菌株经筛选后,得到长速显著快于出发菌株的优良菌株H120和H247。经F3代栽培实验证明:H120和H247的生物学效率明显优于出发菌株,且差异极显著。酯酶同工酶分析表明:H120和H247酶谱均发生了变化。