通络方剂对高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞体外增殖作用和氧化应激的影响

采用体外培养大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs),MTT法检测RMCs增殖,DCFH-DA探针检测活性氧(ROS)生成,RT-PCR和Western blot检测铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和纤维连接蛋白(FN)mRNA和蛋白表达,探讨不同浓度通络方剂对高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)体外增殖作用和氧化应激的影响。结果提示高糖条件下,通络方剂可抑制RMCs增殖(P0.05),抑制活性氧生成(P0.05),该抑制作用呈浓度依赖模式;高糖作用于RMC后,MnSOD和FN mRNA和蛋白水平升高,通络方剂可抑制高糖条件下FN mRNA的升高和提高正常糖浓度条件下MnSOD蛋白水平,浓度依赖性地抑制高糖条件下FN蛋白的表达。因此,通络方剂可抑制高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞增殖,抑制氧自由基生成,提高抗氧化酶活性。     

JAK2/STAT3信号通路在运动预适应抗心肌细胞凋亡中的作用

目的：探讨Janus激酶2-信号转导子和转录激活子3（JAK2/STAT3）信号通路在运动预适应（EP）抗心肌细胞凋亡中的作用及其机制。方法：健康雄性SD大鼠80只,随机分为对照组（C组）、力竭组（EE组）、运动预适应组（EP组）、运动预适应+AG490组（EP+AG组）（n=20）。连续3 d的间歇跑台运动建立EP动物模型,力竭运动致大鼠运动性心肌损伤。采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡改变、Western blot法检测心脏Caspase-3定量表达的变化,免疫组织化学法和Western blot法显示心脏p-JAK2和p-STAT3定位和定量表达的变化。结果：与C组相比,EE组心肌细胞凋亡、心脏Caspase-3、p-JAK2和p-STAT3的表达均显著升高;与EE组相比,EP组心肌细胞凋亡和心脏Caspase-3表达明显降低,而心脏p-JAK2和p-STAT3表达显著升高;与EP组相比,EP+AG组心肌细胞凋亡和心脏Caspase-3表达均显著升高,而心脏p-JAK2和p-STAT3表达明显降低。结论：EP可诱导心脏磷酸化JAK2和STAT3表达增加,减少心脏Caspase-3的表达,抑制心肌细胞凋亡,提示JAK2/STAT3信号通路参与了EP抗心肌细胞凋亡的作用。     

circTLK1通过调控miR-374a-5p表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

为探讨circTLK1对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及分子机制,该研究将人肾小球系膜细胞HMCL分为对照(Con)组、高糖(HG)组、HG+si-NC组、HG+si-circTLK1组、HG+miR-NC组、HG+miR-374a-5p组、HG+si-circTLK1+anti-miR-NC组、HG+si-circTLK1+anti-miR-374a-5p组。采用RT-qPCR检测circTLK1和miR-374a-5p的表达水平;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;MTT检测细胞增殖活性;Western blot法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circTLK1和miR-374a-5p的靶向关系。结果显示,高糖诱导的肾小球系膜细胞中circTLK1、TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平及细胞活性升高,miR-374a-5p、p21表达水平降低(P0.05)。下调circTLK1表达或过表达miR-374a-5p,高糖诱导的肾小球系膜细胞中TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平和细胞活性降低,p21表达水平升高(P0.05)。circTLK1靶向调控miR-374a-5p;抑制miR-374a-5p表达逆转了下调circTLK1表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的作用。该研究得出,下调circTLK1表达可能通过上调miR-374a-5p抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤。     

JAK2/STAT3信号通路在门静脉高压大鼠模型脾脏纤维化过程中的作用

目的:探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在门静脉高压大鼠模型脾脏纤维化过程中的表达和作用.方法:采用缩窄门静脉的方法制备门静脉高压大鼠模型,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路.30只SD(Sprague Dawley)大鼠随机分为单纯手术组、AG490组、假手术组(n=10).AG490组每天给予5 mg/kg体重的AG490,另外两组每天给予相同体积的生理盐水,连续2周后处死大鼠,计算各组脾指数,Masson三色染色检测脾脏组织纤维化程度,免疫组织化学和Western blotting检测脾脏组织中磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白的表达水平.结果:单纯手术组p-STAT3蛋白水平较假手术组明显升高(P＜0.05),AG490组较单纯手术组明显降低(P＜0.05);单纯手术组脾指数、脾脏纤维化程度较假手术组明显升高(P＜0.05),AG490组较单纯手术组明显降低(P＜0.05);p-STAT3蛋白水平与脾脏纤维化程度呈明显的正相关趋势(r=0.897,P＜0.05).结论:JAK2/STAT3信号通路与门静脉高压大鼠脾脏纤维化过程关系密切,阻断该通路可以减轻门静脉高压脾脏纤维化的程度.     

AG490对甲状腺髓样癌TT细胞放射敏感性的影响

为了研究AG490对甲状腺髓样癌TT细胞放射敏感性,本研究选择甲状腺髓样癌TT细胞作为研究对象,并采用不同浓度AG490 (0, 25μmol/L, 50μmol/L, 100μmol/L)处理细胞,利用MTT法、流式细胞术和克隆形成实验分别对细胞增殖、凋亡及放射敏感性进行检测,并采用Western blotting法检测各组JAK2、p-STAT3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果表明,与A组相比,B、C、D组的抑制增殖作用增强,呈浓度和时间依赖性;随着AG490药物浓度的增加凋亡率逐渐增加;与A组相比,C组细胞存活分数显著降低;JAK2、p-STAT3和Bcl-2的蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐降低,Bax蛋白表达量随着药物浓度的升高而逐渐增加。AG490对甲状腺髓样癌TT细胞增殖有抑制作用,可促进细胞凋亡,提高放射敏感性。     

LncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-124-3p/HMGB1轴对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖、凋亡及纤维化的影响

摘要 目的：探讨长链非编码核糖核酸（LncRNA）KCNQ1OT1靶向调控miR-124-3p/高迁移率族蛋白B1（HMGB1）轴对高糖诱导肾小球系膜细胞（HMC）增殖、凋亡及纤维化的影响。方法：将人HMC分为对照组（NC组）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、阴性序列（si-NC）组、KCNQ1OT1小干扰核糖核酸（RNA）（si-KCNQ1OT1）组、si-KCNQ1OT1+模拟对照序列（miR-NC）组、si-KCNQ1OT1+miR-124-3p抑制剂（miR-124-3p inhibitor）组,各组在转染后进行高糖处理。实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测LncRNA KCNQ1OT1信使核糖核酸（mRNA）、miR-124-3p mRNA、HMGB1 mRNA表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白印迹法（Western blot）检测HMGB1蛋白、增殖相关蛋白[细胞周期蛋白1（CyclinD1）]、细胞凋亡蛋白[半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶蛋白9（caspase-9）]、细胞纤维化蛋白[纤维连接蛋白（FN）、细胞黏附分子-1（ICAM-1）]表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA KCNQ1OT1与miR-124-3p与HMGB1之间的靶向关系。结果：与NC组比较,高糖组KCNQ1OT1 mRNA、HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显上升,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显下降（P<0.05）;与高糖组、si-NC组比较,si-KCNQ1OT1组KCNQ1OT1 mRNA、HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显下降,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显上升（P<0.05）;与si-KCNQ1OT1组、si-KCNQ1OT1+miR-NC组比较,si-KCNQ1OT1+miR-124-3p inhibitor组HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白、CyclinD1蛋白、FN蛋白、ICAM-1蛋白表达、HMC活性（24 h、48 h和72 h）明显上升,miR-124-3p mRNA、caspase-3蛋白及caspase-9蛋白表达、HMC凋亡率明显下降（P<0.05）。较miR-NC组与KCNQ1OT1-WT共转染组而言,miR-124-3p mimic组与KCNQ1OT1-WT共转染组细胞荧光素酶活性明显降低（P<0.05）;较miR-NC组与HMGB1-WT共转染组而言,miR-124-3p mimic组与HMGB1-WT共转染组细胞荧光素酶活性明显降低（P<0.05）。结论：LncRNA KCNQ1OT1可以靶向下调miR-124-3p mRNA表达,上调HMGB1 mRNA及HMGB1蛋白表达,促进高糖诱导HMC增殖,抑制凋亡,促进细胞纤维化发展。     

毛蕊异黄酮通过JAK2/STAT3信号通路抑制大鼠动脉粥样硬化

摘要 目的：探究毛蕊异黄酮（CA）治疗动脉粥样硬化（AS）的作用及其机制。方法：将10只未建模和给药的Wistar大鼠作为对照组（Control组）,50只AS建模Wistar大鼠随机分为AS模型组（AS组）、低剂量CA组（L-CA组,10 mg/kg）、中剂量CA组（M-CA组,50 mg/kg）、高剂量CA组（H-CA组,100 mg/kg）和阳性药物辛伐他汀组（Sim组,2 mg/kg）,每组10只。每天给药1次,连续4周。通过苏木精伊红（HE）染色观察大鼠胸主动脉组织的病理变化。按照试剂盒说明书测定各组大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。将大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）分为6组,Control组、血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）组（10-6 mmol/L Ang Ⅱ）、Ang Ⅱ+0.1 CA组（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+0.1 mg/L CA）、Ang Ⅱ+1 CA组（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+1 mg/L CA）、Ang Ⅱ+10 CA组（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+10 mg/L CA）、Ang Ⅱ+1 CA+AG490（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+50 μmol/L AG490）组。通过CCK-8法和EdU染色测定VSMC的增殖,Transwell测定VSMC的迁移。通过免疫荧光染色检测VSMC中的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。通过Western blot检测大鼠胸主动脉组织和VSMC中的α-SMA、骨桥蛋白（OPN）、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的蛋白表达。结果：L-CA组、M-CA组、H-CA组和Sim组大鼠胸主动脉的病变均较AS组减轻,其中H-CA组和Sim组形态改善最明显。与AS组相比,M-CA组、H-CA组和Sim组大鼠的血清中TC、TG、LDL-C和MDA水平降低（P<0.05）,血清HDL-C和SOD水平升高,胸主动脉组织中的α-SMA蛋白表达水平升高（P<0.05）,OPN的蛋白表达水平及JAK2和STAT3的蛋白磷酸化水平降低（P<0.05）。与Ang Ⅱ组相比,Ang Ⅱ+1 CA组、Ang Ⅱ+10 CA组和Ang Ⅱ+1 CA+AG490组的相对细胞活力和EdU阳性率降低（P<0.05）,迁移细胞数降低（P<0.05）,α-SMA相对荧光强度和蛋白表达水平升高（P<0.05）,OPN的蛋白表达水平及JAK2和STAT3的蛋白磷酸化水平降低（P<0.05）。结论：CA可减轻AS大鼠的胸主动脉病变、纠正血脂代谢和氧化应激失衡,其机制可能与CA对VSMC表型转化和JAK2/STAT3信号通路的抑制有关。     

AG490 上调 BATF2 表达抑制淋巴瘤细胞增殖 *

摘要 目的： AG490 作为 JAK2/STAT3 通路的抑制剂, 在对肿瘤细胞的抑制作用上所展现出的高效低毒性, 使其有望成为临床上 治疗肿瘤的一种可能的药物。 然而, AG490 的抗瘤机制尚未明确。因此, 本文拟对 AG490 抑制淋巴瘤细胞增殖的效应及其作用机 制进行进一步探讨,为 AG490 应用于临床提供实验依据。方法： 用不同剂量的 AG490 处理淋巴瘤细胞 （Namalwa 和 JeKo-1 ） 、 JurkatT 淋巴细胞性白血病细胞和 THP-1 单核细胞性白血病细胞 24 小时, CCK-8 法检测 AG490 (0 μM、 2 μM、 20μM、 50μM、 200μM)对上述细胞的增殖抑制作用, 实时定量 PCR 法检测 BATF2 mRNA 的变化, Western blot 法检测其蛋白水平的变化, 细胞转染 siRNA 法抑制 BATF2 表达后 CCK8 法检测 AG490 对 Namalwa 细胞的增殖抑制效应。结果： AG490 呈剂量依赖性地抑制 Namalwa、 JeKo-1、 Jurkat 细胞的增殖(P<0.05), 同时上调其 BATF2 mRNA 水平和蛋白水平的表达(P<0.05)。对于无显著抑制作用的 THP-1 细胞, BATF2 的表达亦未见升高(P>0.05)。siRNA 法抑制 BATF2 基因表达后, AG490 对 Namalwa 细胞的增殖抑制效果明 显降低(P<0.05)。 结论： AG490 杀肿瘤细胞的效率与其诱导的 BATF2 的表达呈正相关, 抑制 BATF2 的表达后 AG490 抑制肿瘤细 胞增殖的效率明显降低。因此, AG490 可能是通过上调 BATF2 表达的方式抑制淋巴瘤细胞增殖。这意味着 BATF2 是 AG490 杀 伤淋巴瘤细胞的作用靶点, 可能为新药的开发做出一定的贡献。     

白藜芦醇甙减轻高糖所致心肌微血管内皮细胞损伤的作用及机制研究

目的:探讨白藜芦醇甙在高糖处理的大鼠心肌微血管内皮细胞损伤中的作用及其可能调控机制。方法:酶消法分离大鼠CMECs,高糖处理CMECs建立细胞损伤模型,实验随机分为6个组:对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、白藜芦醇甙组、高糖组(葡萄糖浓度为33 mmol/L)、高糖+白藜芦醇甙组、高糖+白藜芦醇甙+3-MA(自噬抑制剂)组和高糖+雷帕霉素(自噬诱导剂)组。白藜芦醇甙组和高糖+白藜芦醇甙组分别加入10μmol/L的白藜芦醇甙孵育24 h,高糖+白藜芦醇甙+3-MA组加入10μmol/L的白藜芦醇甙和10μmmol/L 3-MA孵育24 h,高糖+雷帕霉素组加入100 nmol/L的雷帕霉素孵育24小时。CCK-8实验检测大鼠CMECs增殖;Tunel法检测大鼠CMECs凋亡;FITC-葡聚糖清除实验检测单层CMECs通透性;Western blot检测LC3Ⅱ和p62的表达。结果:与对照组和白藜芦醇甙组相比,高糖组CMECs增殖能力降低(P<0.05),凋亡率显著增加(P<0.05),细胞通透性增加(P<0.05),LC3Ⅱ表达降低(P<0.05),p62的表达增加(P<0.05);与高糖组相比,高糖+白藜芦醇甙组和高糖+雷帕霉素组CMECs增殖能力增加(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05),细胞通透性降低(P<0.05),LC3Ⅱ表达增加(P<0.05),p62的表达降低(P<0.05);与高糖+白藜芦醇甙组相比,高糖+白藜芦醇甙+3-MA组CMECs增殖能力降低(P<0.05),凋亡率显著增加(P<0.05),细胞通透性增加(P<0.05),LC3Ⅱ表达降低(P<0.05),p62的表达增加(P<0.05)。结论:白藜芦醇甙通过增加自噬减轻高糖处理的大鼠心肌微血管内皮细胞损伤。     

炎症上调NPC1加重高脂负荷下HMCs胆固醇积聚致细胞损伤机制

该研究观察炎症因子IL1-β对高脂负荷下人肾脏系膜细胞(human glomerular mesangial cells, HMCs)C型尼曼匹克蛋白1(Niemann-pick protein c1, NPC1)表达水平的影响,并初步探讨NPC1介导的胆固醇积聚致细胞损伤的作用机制。体外培养HMCs分为正常对照组、高脂组、高脂+炎症组。Western blot测NPC1蛋白含量;酶法测细胞及内质网胆固醇水平; CCK8法测细胞增殖;流式细胞术测细胞周期;荧光定量PCR测NPC1、GRP78、PERK、ATF6、FN、Col IV mRNA;免疫荧光技术测GRP78、FN的表达水平。予U-18666A干预NPC1的功能,观察内质网胆固醇水平、细胞增殖能力、GRP78、FN、Col IV mRNA水平的变化。结果显示,高脂促进NPC1蛋白及mRNA的表达水平,同时细胞总胆固醇及内质网胆固醇浓度增加,增殖加快、S期比例增加、内质网应激相关分子—GRP78、PERK、ATF6 mRNA及系膜基质成分—FN、Col IV mRNA水平均增加, GRP78、FN的荧光强度也增加;炎症进一步上调高脂负荷下上述各指标水平。U-18666A干预后可减轻高脂和炎症导致的内质网胆固醇积聚及细胞损伤。综上,炎症可通过上调NPC1的表达水平,加重高脂负荷下肾系膜细胞及内质网胆固醇积聚,诱发细胞损伤。     

内源性过氧亚硝基阴离子介导脂多糖导致肺动脉内皮细胞损伤

在培养的牛肺动脉内皮细胞(bovine pulmonary artery endothelial cells,BPAECs)水平上,观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对BPAECs诱生过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO~-)能力及内皮源性ONOO~-在LPS致BPAECs损伤中的作用。结果显示:(1)LPS剂量依赖性地引起BPAECs诱生ONOO~-生成标志物硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)的荧光强度(即ONOO~-)明显增多,NT阳性细胞数和百分率也明显增多或增高(P<0.05);iNOS选择性抑制剂氨基胍(AG)明显抑制LPS诱生ONOO~-增多(P<0.05),而NT阳性细胞数和百分率分别减少或降低,但无明显差异。(2)在LPS作用下BPAECs培养上清中的MDA含量和LDH活性明显增多和增高,呈现剂量依赖性效应。加AG后MDA含量明显降低(P<0.001),LDH活性呈降低趋势。(3)LPS可诱导BPAECs凋亡明显增多,用EB荧光染色后可见细胞染色质浓集、核变小等凋亡征象。AG可导致LPS引起的BPAECs凋亡明显减少,但仍明显高于溶剂组。LPS可导致BPAECs线粒体呼吸抑制及膜电位下降。上述结果表明,LPS可引起BPAECs生成ONOO~-增多,ONOO~-参与介导LPS所致BPAECs过氧化损伤与细胞凋亡。     

肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞胶原表达的影响

目的:探讨肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞中胶原生成的影响及作用机制。方法:原代培养心肌成纤维细胞,将细胞分为正常糖组(NG,5.5mmol/L glucose)、高糖组(HG,25mmol/L glucose)、高糖+10mmol/L肌肽组、高糖+20mmol/L肌肽组、高糖+40mmol/L肌肽组、高糖+SB组(HG+10μmol/L SB203580)、高糖+PD组(HG+10μmol/L PD98059)。ELISA检测胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,Western blot检测TGF-β1、p-p38 MAPK和p-ERK(1/2)等蛋白的表达。结果:与正常糖组相比,高糖组中胶原Ⅰ和胶原Ⅲ含量增加(P<0.01);TGF-β1、p-p38和p-ERK等表达增加(P<0.01);与高糖组相比,高糖+肌肽组中胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、p-p38、和p-ERK等均降低(P<0.05);高糖+SB组和高糖+PD组中胶原Ⅰ、Ⅲ表达减少(P<0.05)。结论:肌肽对心肌成纤维细胞中胶原生成具有抑制作用,且通过MAPK通路实现。     

EGFR Del 19 与JAK/STAT信号通路在NSCLC 中表达的相关性研究

目的:检测EGFR外显子19缺失突变(以下简称EGFR Del 19)和信号分子JAK/STAT在NSCLC组织中的表达,探讨EGFR Del 19表达与下游信号通路JAK/STAT表达之间的相关性,为进一步研究EGFR Del 19之NSCLC发生发展机制提供依据。方法:经ARMS法筛选出125例EGFR Del 19的NSCLC组织,应用免疫组织化学法检测该组织样本中EGFR Del 19、p-JAK1和p-STAT1的表达,统计分析三者在临床病理特点中的表达差异及EGFR Del 19与p-JAK1、p-STAT1表达之间的相关性。结果:EGFR Del 19阳性主要在细胞膜上表达,p-JAK1、p-STAT1阳性表达主要定位于细胞质和细胞核中。EGFR Del 19与NSCLC的病理分级、TNM分期、淋巴结转移与否显著相关(P值均0.05)。EGFR Del 19与p-JAK1、p-STAT1表达在不同病理分级、TNM分期及淋巴结转移与否组间具有显著相关性(P值均0.05,rs值均0.3)。结论:EGFR Del 19可能通过活化JAK1-STAT1途径促进NSCLC的发生发展。     

ACE-dependent and chymase-dependent angiotensin II generation in normal and glucose-stimulated human mesangial cells

High glucose (HG) increases angiotensin II (AngII) generation in mesangial cells (MC). Chymase, an alternative AngII-generating enzyme, is upregulated in the glomeruli of diabetic kidneys. In this study, we examined AngII synthesis by human MC via angiotensin-converting enzyme (ACE)-dependent and chymase-dependent pathways under normal glucose (NG, 5 mM) and HG (30 mM) conditions. NG cells expressed ACE and chymase mRNA. Under NG conditions the chymase inhibitor chymostatin reduced AngII levels in cell lysates and in the culture medium, and the ACE inhibitor captopril had no effect. HG induced a 3-fold increase in chymase mRNA and protein but not in ACE mRNA; however, HG induced a 10-fold increase in intracellular ACE activity. The increase in AngII generation induced by HG was found in the cell lysate but not in the culture medium. The rise in intracellular AngII was not prevented by captopril or by chymostatin. Moreover, captopril inhibited extracellular ACE activity but failed to block intracellular ACE activity; these results suggested that captopril was unable to reach intra-cellular ACE. Losartan did not change the intracellular AngII content in either NG or HG conditions, and this lack of change suggested that the increase in AngII was due to intracellular generation. Together these results suggest that chymase may be active in human MC and that both ACE and chymase are involved in increased AngII generation during the HG stimulus by different mechanisms, including an upregulation of chymase mRNA and a rise in intracellular ACE activity, favoring the generation and accumulation of intracellular AngII.     

Suppression of JAK2/STAT3 Signaling Reduces End-to-End Arterial Anastomosis Induced Cell Proliferation in Common Carotid Arteries of Rats

Background

JAK2/STAT3 pathway was reported to play an essential role in the neointima formation after vascular intima injury. However, little is known regarding this pathway to the whole layer injury after end-to-end arterial anastomosis (AA). Here, we investigated the role of JAK2/STAT3 pathway in common carotid arterial (CCA) anastomosis-induced cell proliferation, phenotypic change of vascular smooth muscle cells (VSMCs) and re-endothelialization.

Methods

CCAs of adult male Wistar rats were resected at 3, 7, 14, and 30 days after end-to-end CCA anastomosis. Activation of JAK2/STAT3 pathway was detected by Western blotting and Immunofluorescence, and expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was detected by Q-PCR and Western blotting. Under the treatment with AG490 (a JAK2 inhibitor), protein levels of JAK2, STAT3 and PCNA, morphological changes of artery, phenotypic change of VSMCs, and re-endothelialization were measured by Western blotting, H&E, Q-PCR, and Evans blue staining respectively.

Results

The protein levels of p-JAK2, p-STAT3, and PCNA were up-regulated, peaked on the 7^th day in the vessel wall after AA. AG490 down-regulated the levels of p-JAK2, p-STAT3, and PCNA on the 7^th-day-group, resulting in reduced vessel wall proliferation on the 7^th and 14^th day after AA. Besides, AG490 switched the phenotypic change of VSMCs after AA representing inhibited mRNA levels of synthetic phase markers (osteopoitin and SMemb) and up-regulated contractile phase markers (ASMA, SM2 and SM22α). Furthermore, AG490 did not affect the re-endothelialization process on all indicated time points after AA (the 3^rd, 7^th, 14^th, and 30^th day).

Conclusion

Our study indicated that JAK2/STAT3 signaling pathway played an important role on cell proliferation of the injured vessel wall, and probably a promising target for the exploration of drugs increasing the patency or reducing the vascular narrowness after AA.     

维生素E和伊那普利对高糖改变肾小球系膜细胞肌动蛋白组装的影响

研究了维生素E(VE)和伊那普利(EN)对高浓度葡萄糖(HG)所致肾小球系膜细胞(MC)肌动蛋白组装的影响。结果证明,MC在HG培养时,F-actin失去粗大束状外观呈不规则网状,显示F-actin部分去组装。与正常浓度葡萄糖(NG)培养的MC相比,HG引起F-actin荧光强度降低,G-actin荧光强度升高和F/G-actin荧光强度比值下降。VE和EN加入培养后,HG引起的F-actin部分去组装及F-和G-actin荧光强度的变化均恢复正常,提示,VE和EN可防止HG引起的MC actin去组装。     

高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞CTGF和MT1-MMP的表达

目的观察高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的动态变化,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法体外培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞分为正常糖对照组,高糖组和甘露醇高渗对照组,采用RT-PCR及Western印迹法分别检测CTGF和MT1-MMP的mRNA及蛋白的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IV型胶原的含量。结果与对照组相比,高糖组各时间点系膜细胞CT-GF表达明显上调,IV型胶原的分泌增加,且二者随时间持续增高;而MT1-MMP的表达则随时间呈明显下降趋势。结论高糖可诱导肾小球系膜细胞CTGF表达增加,同时抑制MT1-MMP的表达,二者可能参与DN中细胞外基质(ECM)代谢失衡过程。