NGF 对大鼠胚胎中脑神经细胞体外增殖和分化的影响

目的:探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对大鼠胚胎中脑神经细胞体外增殖和分化的影响。方法:在体外分离培养大鼠胚胎中脑神经细胞的培养液中加入不同浓度(10、50、100、200ng/ml)的NGF,培养不同时间,以不加神经营养因子的细胞为对照组,通过MTT法检测细胞活性,神经元特异性烯醇化酶免疫细胞荧光技术鉴定神经细胞,光镜下形态学观察各组大鼠中脑神经细胞体外增殖和分化情况。结果:胚胎中脑神经细胞胞体增大、突起延长且有丰富的神经纤维连结成网络状,细胞集落数增加,显示出剂量-效应关系。结论:一定剂量的NGF能促进大鼠中脑神经细胞分化和增殖,增强其活性。     

参乌胶囊及其有效成分二苯乙烯苷对老年大鼠海马区神经生长因子及其受体表达的影响

目的观察本室自行研制的中药新复方参乌胶囊（SW）及其有效成分何首乌四羟基二苯乙烯苷（TSG）对老年大鼠海马区神经生长因子（NGF）及其受体表达的影响。方法老年sD大鼠从21月龄始,分别灌胃给予SW低、高剂量（0．8s／kg、1．6g／kg）和TSG低、高剂量（0．03s／kg、0．06g／kg）至24月龄。以6月龄大鼠为青年对照,未给药的24月龄大鼠为老年对照。应用实时定量PCR方法检测大鼠海马区NGF及其受体TrkA的mRNA表达水平,免疫组织化学染色和Westernblot方法检测海马区NGF及TrkA表达水平。结果从基因和蛋白质水平观察到,老年大鼠海马区NGF及其受体TrkA的mRNA表达和蛋白表达明显降低。老年大鼠灌胃给予SW能够上调其海马区NGFmRNA和TrkAmRNA水平;SW和TSG对NGF蛋白表达有明显的增高作用,高剂量SW和TSG对TrkA表达的上调作用显著。结论SW和TSG能够增高老年大鼠海马区NGF及其受体水平,提示它们可作用在神经元信号转导通路的起始端,有利于提高神经元的存活和功能。     

叶酸联合成体神经干细胞治疗创伤性脑损伤大鼠的实验

目的观察叶酸联合成体神经干细胞对创伤性脑损伤大鼠的治疗作用,探讨其可能作用机制。方法 120只Wistar大鼠随机分为6组,正常组,模型组,假手术组,叶酸注射组,成体神经干细胞移植组,成体神经干细胞移植＋叶酸注射组。倒置显微镜下观察神经干细胞形态学变化;流式细胞仪检测神经干细胞表面标记物CD105、CD45、CD44、CD29的表达;免疫荧光法检测神经元特异性烯醇酶（NSE成熟神经元的特异性标志）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP胶质细胞的标记物）的表达;平衡木实验检测大鼠运动协调与整和能力;Morris水迷宫实验测试各组大鼠的学习记忆能力;HE染色及Brdu免疫组化实验观察脑组织形态学变化;酶联免疫吸附试验检测大鼠脑组中脑源性神经生长因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）的表达;蛋白质印迹法检测脑组织中凋亡相关蛋白BCL-2、Bax、Caspase-3的表达。结果分离所得细胞能在体外传代培养,流式细胞仪检测发现细胞阳性表达CD44、CD29,阴性表达CD105、CD45,细胞经胎牛血清诱导分化后能形成NSE或GFAP阳性细胞。实验表明,叶酸与成体神经干细胞干预创伤性脑损伤大鼠模型后能显著改善其行为学变化,减轻脑组织的炎症反应,恢复受损神经细胞,增加脑组织内BDNF、NGF的含量,上调BCL-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达。结论叶酸联合成体神经干细胞干预创伤性脑损伤大鼠能显著改善中枢神经功能,对维持神经元微环境稳态具有重要的作用。     

神经营养素3和脑源性神经生长因子在大鼠脊髓中的定位表达

神经营养素3（NT－3）和脑源性神经生长因子（BDNF）是神经生长因子（NGF）的同源物,体外实验表明NT－3和BDNF能促进感觉神经元和交感神经元的存活,但是NT－3和BDNF在脊髓中的生物学作用和定位分布还不十分清楚。本用免疫组化ABC法观察了NT－3和BDNF的免疫阳性反应物在大鼠脊髓中的分布。结果表明：呈NT－3样免疫阳性反应的胶质细胞分布于脊髓的后索、侧索和前索中;免疫反应阳性的神经元主要见于脊髓前角,少数见于脊髓后角。BDNF位于大鼠的脊髓前角动物神经元;在脊髓Ⅱ板层中还可见较多的BDNF免疫反应阳性的神经终末。提示NT－3和BDNF在维持脊髓神经元和胶质细胞的生理功能中可能起重要作用。     

电针对局灶性脑缺血大鼠脑内神经生长因子受体trkA的影响

神经生长因子对神经元凋亡有拮抗作用,其作用方式是通过特异性受体——ｔｒｋＡ实现。为了探讨针刺对内源性抗凋亡因素的调节作用。本研究用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察缺血再灌注时ｔｒｋＡ的变化及针刺对ｔｒｋＡ的影响。结果发现：缺血组对照侧大脑皮层偶见散在ｔｒｋＡ免疫阳性神经元,缺血侧大脑皮层ｔｒｋＡ阳性神经元与对照侧相比,显微镜下见无显著性差异。电针组缺血侧大脑皮层见大量ｔｒｋＡ免疫反应阳性神经元,主要分布于半影区,与对照侧及未电针的缺血侧相比,显微镜下见阳性神经元数目有差异。结果提示：电针可以诱导脑缺血时神经营养因子受体表达,调动机体内抗凋亡因素的作用。     

TRPV2激活对缺氧再灌注时体外培养星形胶质细胞神经生长因子释放的影响

神经生长因子对脑缺血后神经元的存活有重要意义。该研究观察了TRPV2激活剂2APB对体外缺血再灌注模型中原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞神经生长因子释放的影响。将原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞分为2APB组（0．5mmol／L）和对照组（不含2APB）,在糖氧剥夺情况下培养2h,然后恢复正常全培养基复氧培养48h。用Westem blot检测星形胶质细胞神经生长因子的表达水平;用ELISA检测星形胶质细胞条件培养液中神经生长因子的含量。结果表明,0．5mmol／L2APB可以诱导正常情况下及糖氧剥夺再灌注情况下体外培养星形胶质细胞NGF的合成和释放LP〈0．01）。此外,JNK阻滞剂可抑制糖氧剥夺再灌注情况下2APB诱导的星形胶质细胞神经生长因子的释放。综上．TRPV2激活可以影响糖氧剥夺再灌注情况下体外培养星形胶质细胞神经生长因子的合成和释放。TRPV2有可能成为脑缺血再灌注后的潜在治疗靶点。     

鼠胚中脑多巴胺神经元的体外发育及靶细胞对其影响

１４天大鼠胚中脑腹侧神经元在体外进行分散培养,用抗酪氨酸羟化酶血清（ＴＨ）检测多巴胺（ＤＡ）神经元。培养２４小时即可见ＴＨ阳性神经元,３天后数量开始增加,高峰出现在１４天左右,此后逐渐减少。ＴＨ阳性神经元胞体随培养时间的延长渐增大,核浆比例减少,表明神经元趋向成熟。收集培养液用高效液相色谱一电化学仪（ＨＰＬＣ－ＥＣ）测定其中ＤＡ递质的含量,在培养最初的７２小时内其浓度极低,至１５天时为初７２小时的５０余倍,此后开始下降,与ＤＡ神经元的形态发育同步。将中脑腹侧多巴胺神经元与其靶细胞纹状体神经元共培养时．ＴＨ阳性神经元数明显增加．培养液中的ＤＡ浓度均为同期中脑腹侧神经元单纯培养时的一倍,ＴＨ活性也较单纯培养时为高,表明靶细胞能明显提高ＤＡ神经元的存活能力。     

花生油对2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子及胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的通过观察2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子（NGF）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）表达的改变,研究花生油对2型糖尿病大鼠海马神经元NGF及ChAT表达的影响,探讨花生油在防治糖尿病脑病中的作用。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组（C组）、2型糖尿病组（T2DM组）、2型糖尿病给予2 mL花生油组（T2DM＋2 mL组）及2型糖尿病给予5 mL花生油组（T2DM＋5 mL组）。其中C组给予正常饮食,糖尿病组大鼠给予高脂饮食喂养,2个月后,按25 mg/kg体质量腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制成2型糖尿病模型,T2DM组、T2DM＋2 mL组及T2DM＋5 mL组大鼠继续给予高脂饮食。糖尿病造模1个月后处死全部大鼠,行脑冰冻切片,用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马CA1区NGF和ChAT的表达。结果 （1）T2DM组大鼠海马CA1区NGF表达比C组明显降低（P〈0.05）,T2DM＋2 mL组及T2DM＋5 mL组大鼠海马CA1区NGF表达均明显高于未给予花生油的T2DM组（P〈0.05）。（2）T2DM组大鼠海马CA1区ChAT表达显著低于C组（P〈0.05）,T2DM＋2 mL组和T2DM＋5 mL组大鼠海马CA1区ChAT表达均明显高于未给予花生油的T2DM组（P〈0.05）。结论 2型糖尿病大鼠海马CA1区神经生长因子表达降低,胆碱能神经元数量减少,这可能是2型糖尿病脑病发生的原因之一。花生油能增加2型糖尿病大鼠海马区内神经生长因子表达,促进胆碱能神经元存活,表明花生油具有一定的保护大鼠糖尿病脑病的作用。     

HSV-1感染对神经胶质瘤细胞神经生长因子及其受体表达的影响

神经生长因子(NGF)主要由神经胶质细胞产生,通过特异的靶细胞表面的神经生长因子受体介导产生生物学效应,与神经细胞的生长发育、分化和凋亡等密切相关。单纯疱疹病毒1型(HSV-1)作为一种嗜神经病毒,易造成神经细胞、神经胶质细胞凋亡或死亡。本实验以U251人神经胶质瘤细胞为研究对象,观察HSV-1感染致U251细胞凋亡的过程中NGF及其受体的变化情况。结果发现U251细胞是HSV-1的容许细胞;HSV-1感染致U251细胞凋亡过程中,NGF及其低亲和力受体p75NTR出现表达强度随时间先增强后减弱的趋势,而高亲和受体Tr-kA持续低表达。推测HSV-1感染致神经细胞凋亡中可能调控了神经营养因子的表达。     

帕金森病大鼠模型中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元改变及c-Jun蛋白表达

目的探讨帕金森病(Parkinson disease,PD)大鼠模型中脑腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)多巴胺能神经元的改变及其c-Jun蛋白表达情况,探讨其可能机制。方法应用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)单侧一点注射大鼠黑质致密区(substantia nigra compacta,SNc),特异性毁损DA能神经元;术后1d、7d、14d、21d腹腔注射阿朴吗啡(apomorphine,APO)诱发行为学观察、电镜、尼氏染色观察中脑VTA神经元的改变,免疫组织化学ABC观察其DA能神经元酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)及c-Jun的改变并进行图像分析,Western blot观察c-Jun蛋白表达。结果APO诱发PD大鼠模型异常旋转行为,尼氏染色及电镜见PD大鼠中脑VTA有神经细胞肿胀、坏死等变化,VTA TH阳性(TH )神经元数量减少,形态学改变。APO诱导的旋转实验≥7转/min,VTA毁损侧c-Jun表达。结论中脑VTA DA能神经参与PD模型大鼠的改变;APO能诱导6-OHDA PD模型大鼠的旋转行为,其强弱可能与TH 神经元数量直接相关;c-Jun表达与DA能神经元毁损程度有一定的关系。     

Genetic and metabolic status of NGF-deprived sympathetic neurons saved by an inhibitor of ICE family proteases

Sympathetic neurons undergo programmed cell death (PCD) when deprived of NGF. We used an inhibitor to examine the function of interleukin-1 beta-converting enzyme (ICE) family proteases during sympathetic neuronal death and to assess the metabolic and genetic status of neurons saved by such inhibition. Bocaspartyl(OMe)-fluoromethylketone (BAF), a cell-permeable inhibitor of the ICE family of cysteine proteases, inhibited ICE and CPP32 (IC50 approximately 4 microM) in vitro and blocked Fas-mediated apoptosis in thymocytes (EC50 approximately 10 microM). At similar concentrations, BAF also blocked the NGF deprivation-induced death of rat sympathetic neurons in culture. Compared to NGF-maintained neurons, BAF-saved neurons had markedly smaller somas and maintained only basal levels of protein synthesis; readdition of NGF restored growth and metabolism. Although BAF blocked apoptosis in sympathetic neurons, it did not prevent the fall in protein synthesis or the increase in the expression of c-jun, c- fos, and other mRNAs that occur during neuronal PCD, implying that the ICE-family proteases function downstream of these events during PCD.NGF and BAF rescued sympathetic neurons with an identical time course, suggesting that NGF, in addition to inhibiting metabolic and genetic events associated with neuronal PCD, can act posttranslationally to abort apoptosis at a time point indistinguishable from the activation of cysteine proteases. Both poly-(ADP ribose) polymerase and pro-ICE and Ced-3 homolog-1 (ICH-1) appear to be cleaved in a BAF-inhibitable manner, although the majority of pro-CPP32 appears unchanged, suggesting that ICH-1 is activated during neuronal PCD. Potential implications of these findings for anti-apoptotic therapies are discussed.