番木瓜的愈伤组织和苗端再生植株

用两种离体培养方法以再生番木瓜植株。一种是从愈伤组织再生;另一种是从单个苗端的外植体产生多个植株。番木瓜的愈伤组织是从幼苗茎的切段诱导的,茎段培养在含有1毫克/升 NAA(萘乙酸)和0.1毫克/升 KT(激动素)的培养基中。当愈伤组织转移到含有低浓度生长素(0—0.5毫克/升IAA(吲哚乙酸)和较高浓度的 KT(1-2毫克/升)的培养基时,再生了苗     

芥菜型油菜原生质体再生成植株的研究

芥菜型油菜子叶和下胚轴原生质体在含0.5毫克/升NAA、0.5毫克/升2,4-D和1毫克/升BA的Nitsch培养基中发育成愈伤组织。“黄辣芥”子叶原生质体来源的愈伤组织在无生长素而含有3毫克/升BA或2毫克/升KIN的MS固体培养基上分化了芽;即使是低水平的生长素(0.05毫克/升NAA)也不利于芽的分化。当芽长到2—3厘米高时,将其从愈伤组织上切下,转移到不含细胞分裂素而有0.01—0.05毫克/升IAA的MS培养基上,很快长出根,从而得到完整的再生植株。     

欧当归原生质体培养中体细胞胚胎发生和细胞学变化

从继代培养的欧当归(Levisticum officinale Koch)愈伤组织分离的原生质体在 C81V培养基中培养,得到了较高频率的持续分裂。形成的细胞团转移到固体培养基上后,发展成了白色松软型的愈伤组织。将其转移到附加6-苄氨基嘌呤和吲哚丁酸的 N6培养基上继续培养了2—3个月后,表面出现了浅黄色、颗粒状的胚性愈伤组织。后者在附加吲嗓丁酸和萘乙酸的 MS 培养基上培养,可通过体细胞胚胎发生途径分化出大量小植株。对供体愈伤组织和原生质体再生植株进行了细胞学观察。     

油菜游离细胞培养及易再生的体细胞无性系的建立

以芥菜型油菜(Brcssica juncea)下胚轴来源的愈伤组织为材料,进行悬浮细胞振荡培养,得到游离的单细胞。这些细胞作浅层液体静置培养,可获得高频率的愈伤组织。在附加有水解乳蛋白200毫克/升、BA 2—3毫克/升及GA,0.1—1毫克/升的MS培养基上,这些愈伤组织分化了芽。分化的芽在无激素或附加有0.01—0.1毫克/升IAA或NAA的MS培养基上长出根,从而发育成完整植株。当对游离细胞获得的再生植株的茎切段愈伤组织,再经上述程序进行细胞培养时,发现愈伤组织诱导率及愈伤组织分化频率均远远高于原供体,从而建立了B.juncea易再生的体细胞无性系。     

从龙葵叶肉细胞原生质体再生植株

用自制的纤维素酶从龙葵(Solanum nigrum L.)叶肉细胞制备了大量有活力的原生质体。用悬滴和浅层培养法,龙葵原生质体生长、分裂、形成愈伤组织,并再生成完整的植株。比较了在 NT 培养基中不同肌醇含量对原生质体的影响;每升培养基中加250毫克的肌醇能促进龙葵叶肉原生质体的生长和分裂。     

小麦花粉无性系的建立及其胚状体的发生

本文报道的小麦花粉无性系,已继代培养了两年零一个月共27代,目前仍具有分化能力。继代分化固体培养基以:MS附加NAA0.6毫升/升+KT0.2毫克/升为最好。较好的恢复再生培养基为MS液体培养基附加2.4-D 0.6毫克/升+NAA0.2毫克/升+6-BA 2毫克/升+CH500毫克/升予处理三天后转入附加2.4—D0.6毫克/升+KT 2毫克/升+CH 500毫克/升的MS固体培养基,培养十八天后,丧失分化能力已达八个月之久的愈伤组织又恢复了再生能力,分化出植株。通过愈伤组织的细胞学观察,小麦花粉愈伤组织无性系,分化成小植株的途径有二:一是由特化的胚性细胞经多次分裂后发育成胚状体长成小植株;二是由特化的表层细胞经多次分裂后发育成芽苗。胚性细胞发生于愈伤组织的表皮层和表皮附近的细胞层,有的也可在内层已衰老的细胞中产生。胚状体与芽的区别特征是:胚状体具有两极性,两极间有维管组织相连接;芽具有单极性,芽端的维管组织与愈伤组织内维管组织相连接。     

紫云英叶片及叶肉原生质体的培养

本工作研究了豆科植物紫云英的叶片及叶肉原生质体的培养。叶片培养实验表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS加1.0-2.0毫克/升2,4-D和0.25毫克/升KT;诱导根分化需加1.0—5.0毫克/升NAA和0.5毫克/升BA;而苗分化则以0—0.5毫克/升IAA和0.5毫克/升BA为好。高浓度的NAA有利于根分化而抑制茎芽形成;高浓度的IAA对根和芽分化都有抑制作用。叶肉原生质体分离和培养试验表明,紫云英叶肉原生质体的释放及其培养活力受叶龄、植株生理状态和酶浓度的影响。叶肉原生质体在改良的KM8P培养基中能分裂。用改良KM8细胞培养基定期稀释,可使分裂持续进行而得到细胞团。BA和2,4-D为诱导紫云英叶肉原生质体分裂所必需。其最佳组合激素为BA 0.21毫克/升和2,4-D 1.13毫克/升。葡萄糖作为渗透压稳定剂时,其浓度明显影响原生质体的存活率。弱光条件下培养比黑暗培养有利于叶肉原生质体分裂。由叶肉原生质体形成的愈伤组织能形成瘤状结构和根。     

芥菜原生质体培养和植株再生

从芥菜无菌苗的下胚轴和子叶游离获得原生质体,在含1.5毫克/升NAA、0.6毫克/升BA和0.5毫克/升2.4-D的DPD液体培养基中静置培养。试验表明,经13℃低温预处理不仅能够提高原生质体的分裂频率,而且能够加速原生质体的发育进程;除木糖外,葡萄糖、甘露醇和山梨醇均可作为原生质体培养初期的渗透稳定剂。来源于下胚轴原生质体的愈伤组织在含3毫克/升BA、0.1毫克/升GA_3或3毫克/升BA的MS培养基上诱导出了芽,含0.05毫克/升IBA的MS培养基上诱导出根,从而获得了完整植株。     

提高籼稻愈伤组织再生频率的研究

为了提高籼稻愈伤组织的植株再生频率,研究了影响再生的各种因素,如：在诱导培养基或继代培养基中加细胞分裂素和萘乙酸（ＫＴ、ＢＡＰ、玉米素或Ｚｉｐ１毫克／升）,或加Ｔｈｉｄｉａｚｕｒｏｎ（０．５毫克／升）,以及愈及组织的部分干燥处理等。这些措施明显地提高籼稻愈伤组织的再生频率。结合使用这些处理可使ＴＮ１、ＩＲ７２和ＩＲ６４的愈伤组织再生植株频率较对照提高５－１４倍。     

小麦(Triticum vulgare)花粉植株的诱导及其形态发生过程的研究

采用离体培养小麦(Triticum vulgare)花药的方法成功地诱导小麦花粉形成了单倍体植株。在附加2—20毫克/升的2,4-D 和各种有机附加物的 MS 培养基上,属于27个杂种或品种的21094个花药中有103个花药产生了愈伤组织,这些愈伤组织均着生在裂开的药室内,显微观察证明它们是由花粉经过多次细胞分裂形成的。花粉愈伤组织转移到含有0.2—2毫克/升的萘乙酸和0.2—2毫克/升的激动素或含有0.5毫克/升的吲(口朶)乙酸和15%椰乳的 MS培养基上培养5天以后,即陆续分化出幼苗。此外还发现接种在含有20%椰乳或吲(口朶)乙酸及激动素各2毫克/升的 MS 培养基上的花药直接从药室内产生出幼苗。已检查的6株幼苗的根尖细胞的染色体数均为21,表明它们是单倍体。单倍体植株能够抽穗而不结实。     

沙葱叶基愈伤组织原生质体再生体系的建立

沙葱是一种具有抗旱抗寒、抗病性和适应性强等生理特性的荒漠植物.为开发利用其固有的遗传资源,本研究利用细胞工程技术建立了沙葱(Allium mongolicum Regel)叶基愈伤组织原生质体的分离、培养和植株再生实验体系.研究结果表明,酶法分离原生质体的产率和分裂频率明显取决于用于制各原生质体的愈伤组织的状态.转代培养7～10d的松软愈伤组织可分离出大量有活性的.在附加2.0mg/L2,4-D、0.2mg/L激动素、500 mg/L水解乳蛋白、0.4 mol/L甘露醇和2%蔗糖的MS培养基中进行液体浅层培养,4～5 d后出现第一次原生质体分裂;7～10d出现第二次分裂.结果显示原生质体的分裂频率大约为5%;4周后,可见到小愈伤组织.当将原生质体分裂形成的愈伤组织转移到附加2.0mg/L6-苄氨基嘌呤(或激动素)和0.4mg/L萘乙酸(NAA)的MS固体培养基上,并在低光照条件下培养后,从愈伤组织上分化出了不定芽,进而发展成小植株,并移栽成活.本研究对沙葱抗逆遗传品质用于经济植物遗传改良的研究奠定了可行的实验基础.     

鹰嘴紫云英甲硫氨酸抗性系原生质体培养及植株再生

本研究建立了鹰嘴紫云英(AstragaluscicerL.)甲硫氨酸抗性系原生质体再生植株的实验体系。以茎切段诱导的松软愈伤组织为材料,通过酶法游离出大量有活力的原生质体。原生质体经培养持续细胞分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗。比较了不同培养基、培养密度对原生质体形成细胞分裂和再生的影响。结果表明,原生质体以2×105个/ml的植板密度,在附加2.0mg/L2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.2mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)、200mg/L水解酪蛋白、2%蔗糖和0.3mol/L甘露醇DPD培养基中培养后,其分裂频率达38.3%。原生质体培养形成的愈伤组织仍具有对甲硫氨酸的抗性。转移到附加10mg/LKT、0.5mg/LNAA的MS分化培养基上,获得大量的再生苗。     

草木樨状黄芪叶肉原生质体的植株再生

分别从草木樨状黄芪胚轴再生苗的上部和下部叶片分离原生质体。来自上部叶片的原生质体培养在P_2培养基(含2,4-D 1.0mg/L)中获得了较高的分裂频率(48.9%)和愈伤组织再生频率(321块/m1),过高和过低的2,4-D对于愈伤组织的再生都是不利的。来自下部叶片的原生质体分裂频率很低,不能形成愈伤组织。小愈伤组织转入固体或液体增殖培养基中均能快速生长。愈伤组织转入分化培养基或继续在液体培养基中振荡培养均能分化出芽,频率达100%。目前已获得了大量的再生植株,部分已移栽成活。     

水稻花粉植株的诱导及其后代观察

研究了水稻(Oryza sativa)花药的离体培养及其花粉植株后代的表现,得到如下结果: 1.用加有2,4-D 1—5毫克/升的Blaydes培养基培养水稻花药,诱导出水稻花粉愈伤组织。采用花粉处于单核期的花药进行培养比较合适。 2.诱导愈伤组织成苗,以二次诱导法效果较好。即将愈伤组织种植在低浓度激素的培养基上(IAA 0.05—0.5毫克/升,激动素1—2毫克/升),在此培养基上分化快,芽点多,但芽不易伸长;芽点出现后再移到激素浓度较高的培养基上(IAA 2毫克/升,激动素4毫克/升),很快出现幼苗。 3.水稻花粉植株二代,田间表现和室内分析结果表明基本整齐一致,没有分离。杂种F_1花粉植株后代在许多性状上超过双亲,有选种价值。说明水稻花药培养用于育种是可能的。     

伊贝母(Fritillariae pallidiflorae)愈伤组织的诱导和植株再生的研究

本文对伊贝母鳞瓣切块和鳞芽顶端愈伤组织的形成和鳞茎的再生进行了研究。结果在加有2.4—D1毫克/升和KT0.1毫克/升的MS培养基上诱导出了愈伤组织。在加有IAA1毫克/升和NAA0.2毫克/升及KT0.1毫克/升的MS培养基上分化出了小鳞茎。培养结果表明:小鳞茎有三个来源:(1)由鳞瓣切块的愈伤组织形成。(2)由鳞瓣切块直接发育成。(3)由鳞芽顶端形成。所形成的小鳞茎和大田栽培的没有什么不同。培养4个月的小鳞茎相当于种子繁殖2—3年的鳞茎一样大小。     

籼稻花药培养研究——Ⅰ.基本培养基及附加成分在诱导籼稻花药产生愈伤组织及根芽分化中的作用

对6个籼稻(oryza sativa Subsp.Shien)品种和39个籼×籼杂种的花药在离体条件下进行培养,有5个品种及35个杂种得到了愈伤组织,平均诱导率为2.18％。在3个品种及11个籼×籼杂种中得到了绿苗或绿芽。本文着重报道基本培养基及其附加成分在诱导籼稻花药产生愈伤组织及根芽分化中的作用。 1.试验了几种诱导愈伤组织的培养基,以Miller培养基 2,4—D2毫克/升 酵母浸出液1,000毫克/升 激动素1毫克/升 吲哚乙酸2毫克/升 椰乳15％为最好。诱导率高者可达11—15％,平均诱导率在3％以上。 2.Ms、Nitsch及Miller培养基均可诱导籼稻花药愈伤组织分化出绿色的花粉植株。 3.籼稻花药愈伤组织的分化,随着激动素/生长素比值的增高,绿苗分化率及总分化率均有提高的趋势。而粳稻的这种关系不甚明显。 4.Miller培养基附加2毫克/升的吲哚乙酸对促进具茎、叶而无根的籼稻花粉小植株产生根有很好的作用。在这种培养基上,不仅可以诱导根的发生,而且根系发达,生长较弱的苗转移到这种培养基后,因根系健壮,生势好,转入盆栽,基本可以全部成活。     

甘蔗原生质体的植物再生

从甘蔗嫩叶外植体诱导愈伤组织,经继代培养后,挑选胚性愈伤组织,转入ＭＳ３液体培养基,进行悬浮培养,当培养物分离出小粒状的细胞团,细胞变得小而圆时,用于分离原生质体,原生质体以琼脂糖固化的培养方式培养于ＭＲＰ１培养基中,由原生质体再生的愈伤组织有两种类型,挑选粒状,坚实的再和愈伤组织转移到Ｎ６分化培养基上,“新台糖１号“再生的愈伤组织,在含有ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基中,分化出绿芽并长成完整的植株。     

花烟草叶肉原生质体再生植株

用自制的纤维素酶(EA3-867)从花烟草(Nicotiana alata)叶肉细胞制备大量有活力的原生质体。在NT培养基(内含2,4-D2,KT0.25毫克/升)上观察到原生质体长大,分裂,形成愈伤组织。愈伤组织悬浮在含有2,4-D2mg/升的MS培养基上诱导出球形胚,移入MS(BA2,IAA 0.2 mg/l)培养基上出苗。小苗移植土壤中正常生长、开花、结实。     

柑桔茎尖培养的初步研究

截取1～2毫米高的甜橙(Citrus sinensis)茎尖,培养子经消毒的基本培养基中。比较试验了几种植物生长调节物质、蔗糖的不同浓度和培养基的物理性状对愈伤组织发生的效应。分别观察了不同天数的离体茎尖愈伤组织发生情况。发现对愈伤组织形成较好的处理有:2,4-D0.1毫克/升+Kinetin 0.25毫克/升+NAA 2.5毫克/升,单独使用2,4-D为1.5毫克/升;蔗糖浓度为5％;以及液体培养基。将具有愈伤组织的离体茎尖,转移至激素类物质为BA 0.25毫克/升+NAA 0.1毫克/升的基本培养基中,则能促使茎芽及愈伤组织的进一步生长。但不容易形成根。然后再移入只含NAA 2毫克/升的的基本培养基中,才能分化出根,形成完整的小植株。我们已经获得暗柳、雪柑和柚子等三个柑桔品种的离体茎尖培养的植株,并揭示出在同一块离体茎尖愈伤组织生长出许多小植株的可能前景。茎尖嫁接植株是用全黑暗条件培养13～14天的枳壳(Ponciruo trifoliata)等实生苗作砧木,甜橙(Citrus sinensis)茎尖长为0.2～0.4毫米、并带叶原基2～3个作接穗,在无菌条件的实体显微解剖镜下,嫁接于砧木倒T字型的缺口上,能获得嫁接绿苗18.5％的成活率。嫁接植株培养在MS液体培养基,蔗糖浓度提高到7.5％,放置于800米烛光的荧光灯、每天光照16小时的条件下。嫁接植株生长到2～4片     

骆驼刺发根农杆菌转化系的原生质体培养和植株再生

从发根农杆菌A4转化的荒漠植物—璐驼刺毛状根愈伤组织中分离的原生质体培养的结果表明,酶解新转代7～10d的淡黄色松软愈伤组织,可获得大量有活力的原生质体。原生质体在附加有1．5mg．L-1 2,4．D、0．2mg．L-1 6．BA、0．3m01．L-1甘露醇、2％（W/V）蔗糖和500mg·L-1水解酪蛋白的DPD培养基中进行液体浅层培养可持续分裂。培养基的最适渗透压为（450±3）mOsm·kg-1,原生质体的最适植板密度为4×10^5个．mL-1。制备原生质体的愈伤组织以低温（4℃）预处理后,原生质体的产率和分裂频率均提高,分裂频率最高可达50％。原生质体分裂形成的愈伤组织转移在附加1-2mg．L-1 6-BA（或KT）和0．2mg·L-1NAA的MS培养基上培养后,可以分化并获得再生植株。纸电泳检测表明,原生质体再生的愈伤组织和分化植株仍然含有毛状根转化系的特异产物——冠瘿碱。