高原鼢鼠组织中透明质酸提取工艺及分子表征

旨在建立高原鼢鼠组织中透明质酸(Hyaluronic acid,HA)提取工艺。采用单因素试验确定粗提、酶解和除杂等工艺的最佳条件,通过响应面法进一步优化粗提和酶解工艺条件。通过红外分光光度法确定HA的分子结构,Bitter-Muir法确定其葡萄糖醛酸的含量,黏度法和体积排阻色谱法确定透明质酸的分子量。高原鼢鼠最佳粗取工艺∶液料比4 m L/g(水/动物组织,V/W),提取温度26℃,提取时间1.6 h;最佳酶解工艺:酶解温度37℃,p H8.7,加酶量0.7%(1∶250胰蛋白酶/动物组织,W/W);最佳除杂工艺为:氯苯体积20%(氯苯/HA水溶液,V/V),以3倍体积95%乙醇沉淀,以7%活性碳(活性碳/HA水溶液,W/V)除杂,透析时间3 h。在此工艺条件下,每500 g高原鼢鼠组织可得到(144±3.61)mg HA粉末。平均回收率为72.73%。红外图谱显示提取物具有与Sigma公司的HA标准品一致的吸收峰,葡萄糖醛酸的质量分数为45.60%,蛋白质含量为0.11%,其分子量达到3×106 Da。本工艺提取的高原鼢鼠组织来源的HA回收率好,纯度高;高原鼢鼠组织中HA分子量大,含量高。     

米曲霉氨基酰化酶的双水相萃取研究

本文利用聚乙二醇和磷酸盐组成的水溶液双相系统,从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取氨基酰化酶。通过实验对影响氨基酰化酶分配的各参数进行了研究,确定了最适体系:PEC-1540 10％(W/V),K_2HPO_418％(W/V),pH8.5;PEG-154010％(W/V),K_2HPO_412％(W/V),NaCl 0.5mol/L,pH8.5。二步萃取收率90％,纯化倍数9。为实验室和工业上采用双水相系统萃取氨基酰化酶提供了一个新方法。     

不同小麦背景小簇麦双二倍体的品质、抗病性及分子细胞遗传学研究

对不同小麦（Triticum aestivum 2n=42 AABBDD）背景的4个小簇麦双二倍体进行了分子细胞遗传学分析。结果表明,经过自交7代选育,小簇麦双二倍体的遗传逐渐趋于稳定。其中V852cd和V853cd的遗传稳定性相对较好,RTC M,2m=56的植株分别占100％和83.33%,PMC MI,2n=28Ⅱ的频率分别为73.34%和70.72%,相对紊乱系数分别为0.021和0.022;用簇毛麦（Haynaldia villosa 2n=14 VV)DNA作探针进行原位杂交时,V851cd、V852cd和V853cd的体细胞中都有14条簇毛麦染色体,其染色体组成为2n=56=42W 14V,V854cd中有12条簇毛麦染色体,其染色体组成为2n=56=42W 12V 2T(W/V)。4个双二倍体籽粒蛋白质含量为19.28％－20.52%;V851cd,V852cd和V853cd对条锈病免疫或近免疫,高抗白娄病和叶锈病,中抗雪霉病和赤霉病。     

‘凤丹白’牡丹不定芽的诱导和生根研究

将‘凤丹白’牡丹胚萌发形成的无菌苗接种于含不同植物生长调节剂组合的MS培养基,研究了不同植物生长调节剂组合对‘凤丹白’牡丹不定芽的诱导及生根率的影响.试验证明,在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖3％(W/V)+琼脂0.65％(W/V),pH5.8培养基上,‘凤丹白’牡丹胚萌发率可达100％.‘凤丹白’牡丹胚萌发2周后转接于不定芽诱导的培养基MS+6-BA 0.2 mg/L+GA3 0.02 mg/L+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖3％(W/V)+琼脂0.6％(W/V),pH5.8上,不定芽诱导的频率最高为50％.培养30 d后,将其转接于生根培养基1/2MS+2Ca2++6-BA 0.1 mg/L+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+硫酸锌0.005％(W/V)+硫酸锰0.005％(W/V)+蔗糖2.5％(W/V)+琼脂0.56％(W/V),pH5.8上,生根率达60％.     

凤眼莲根分泌物对Enterobacter sp.nov.苯酚代谢的影响

本文利用从含酚废水中筛选出新的高效降酚菌株(Enterobacter sp.nov.)和凤眼莲根分泌物来探讨风眼莲与细菌之间松散的、非特异性的降酚机理。研究了风眼莲分泌物及其不同的组分对Enterobacter sp.nov.生长、降酚酶活性和降酚效率的影响。结果表明,低浓度的根分泌物(≤1％V/V)促进细菌生长,提高降酚效率,而高浓度的根分泌物(≥10％V/V)虽能促进细菌生长,但会抑制细菌降酚酶的诱导,降低降酚效率。凤眼莲根分泌物各组分中还原糖是影响Enterobacter sp.nov.降酚的关键因子。提出了人工组建凤眼莲和Enterobacter sp.nov.系统,提高降酚效率的可能性。     

黑曲霉固态发酵苹果渣生产木聚糖酶与β-甘露聚糖酶

[目的]采用黑曲霉固态发酵苹果渣生产木聚糖酶与β-甘露聚糖酶,以降低生产成本,同时提高苹果渣的综合利用水平。[方法]采用单因素试验和响应面法对固态发酵工艺进行优化。[结果]培养基最佳组成为苹果渣60%(W/W)、棉粕40%(W/W)、(NH4)2SO41.36%(W/W)、KH2PO40.076%(W/W)、初始含水量55.6%(W/W),最佳培养温度为27.5℃;在所优化的条件下发酵48h,木聚糖酶活力可达5736 U/g,β-甘露聚糖酶活力可达896.24 U/g;培养物中自由棉酚残留量为24.6μg/g,低于饲料中自由棉酚的安全标准。[结论]采用黑曲霉固态发酵苹果渣生产木聚糖酶与β-甘露聚糖酶是可行的,发酵产物可用作饲料添加剂。     

棉酚对DNA酶某些性质的影响

DNase用棉酚处理后,经聚丙烯酸胺凝胶平板电泳与对照相比,电泳度无明显差异,均呈单一区带,表明棉酚对DNase所带电荷及分子量无影响。棉酚可改变DNase在225nm和280nm波长处的吸收,对DNase的荧光有粹灭作用,表明棉酚破坏了DNase的空间构象。棉酚与DNase的浓度(W/V)为1:1以上时,酶活性受到显著影响,呈现出反竞争性抑制作用。     

南极假丝酵母脂肪酶B基因在大肠杆菌中的表达和发酵优化

旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本。构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化。结果显示,带有PelB信号肽的重组菌pET25b-CALB-1/Rosetta(DE3)在20℃下使用0.5%(W/V)乳糖在TY培养基中诱导表达效果最好,优化后的合成培养基成分为1.75%(W/V)山梨醇、2.25%(W/V)鱼蛋白胨、1%(W/V)安琪酵母提取物、0.75%(W/V)Na2HPO4。在摇瓶中诱导60 h后,CALB酶活力最高达到35.67 U/mL,相比于初始发酵酶活力提高了17.77倍,是目前大肠杆菌生产CALB的最高水平。成功地构建了大肠杆菌表达系统,经过系统优化后,CALB的高水平可溶性表达得以实现。     

棉酚对几种动物精子ATP酶抑制作用的比较研究

本文比较了棉酚对几种动物精子ATP酶的抑制作用。实验所测为精子细胞的总ATP酶活力;采用的棉酚浓度为10μM至80μM。20μM时精子酶的相对活力为海胆7604％,大鼠74％,家兔51.6％;40μM时酶的相对活力百分数下降至海胆52.5,大鼠35和家兔29.7;达80μM时酶的相对活力进一步下降至海胆26.7,而大鼠及家兔仅余13.2。结果表明(1)棉酚对精于ATP酶的抑制作用是依赖浓度的变化;(2)各种动物精子ATP酶活力的下降情况显示,大鼠及家兔(哺乳动物)精子ATP酶对棉酚的敏感性比海胆(无脊椎动物)要高些。这种差异性可能对棉酚在临床上的应用具有一定的参考价值。     

苗龄与红光对向日葵原生质体分离和培养的影响

用1.0—1.5%(W/V)纤维素酶(Onozuka R-10)和0.3—0.5%(W/V)果胶酶[Pectinasc (Serva)]配合分离到大量有活力的向日葵下胚轴原生质体,经液体浅层培养或琼脂糖小块培养7—10天后,均能持续分裂到细胞团或体细胞胚,至14—21天形成大量肉眼可见的小愈伤组织(直径0.5—2.0mm)。比较试验表明:(1)影响向日葵下胚轴原生质体分裂生长的首要因素是起始材料无菌苗的生理状态。用红光照射无菌苗,能明显地促使下胚轴原生质体在较低密度(1×10~4/ml)培养时,也能持续分裂,再生小愈伤组织;(2)在MS培养基上添加5mmol/L谷氨酰胺或以7.5mmol/L谷氨酰胺代替原培养基中的无机氮,能促使原生质体高频率(44.4%左右)分裂,再生愈伤组织。     

弓形虫MIC6突变体的构建及其特性分析

目的:体外构建弓形虫微线体蛋白6(MIC6)突变体并分析其特性。方法:利用基因定点突变的方法,将MIC6蛋白羧基端(MIC6C)的348位色氨酸的碱基突变为缬氨酸的碱基,PCR扩增MIC6C W/V突变体基因片段;构建MIC6C W/V/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC6C W/V突变体蛋白。以该蛋白为探针蛋白与弓形虫裂解液进行GST沉降实验,SDS-PAGE及Western blot分析。结果:获得了MIC6C W/V突变体基因片段,制备了GST-MIC6C W/V突变体蛋白;MIC6C W/V突变体蛋白的沉降产物中未见蛋白条带,而MIC6C蛋白(未突变蛋白)的产物中有一蛋白条带,且能被抗醛缩酶抗体识别。结论:在体外获得了MIC6突变体;MIC6突变体失去了与醛缩酶作用的特性。     

马铃薯晚疫病菌侵染的Solophenyl Flavine荧光染色方法研究

在植物病害研究中,观察寄主植物被病原菌入侵的过程非常重要。Solophenyl Flavine 7GFE染料可附着于菌丝,在波长为330~380 nm的激发光下被激发出蓝色荧光。为了更好的观察寄主植物中病原真菌的侵染情况,本实验以Solophenyl Flavine 7GFE为染剂,对寄主植物中病原真菌的侵染情况进行了观察研究。结果显示,用0.002%(M/V)Solophenyl Flavine 7GFE溶于0.1 mol/L Tris-HCl(p H 8.5)配制的染色液染色5 min的效果最佳;使用95%乙醇溶液替代0.15%三氯乙酸(W/V)酒精溶液∶氯仿(V/V)(4∶1)对寄主植物叶片脱色的方法操作简便、毒害较低;染色时省略了番红预染步骤。将改良的染色方法用于晚疫病菌入侵的马铃薯叶片观察取得了良好的效果。该技术是一种改良的、快速有效、安全无毒的观察真菌菌丝入侵植物的荧光染色方法,也适用于观察其他真菌入侵寄主植物组织的过程。     

用哈栖木霉(Trichoderma harzianum)的细胞壁分解酶从指状青霉(Penicillium digitatum)的菌丝中制备原生质体

用哈栖木霉ATCC48131的细胞溶壁酶从指状青霉的菌丝体中制备原生质体。将指状青霉ATCC10030于27℃培养在马铃薯右旋糖液体培养基中,静止培养24小时,菌丝用Whatman 1号滤纸过滤收集,然后用0.6％的氯化钠冲洗3次。原生质体是从0.8克分子甘露糖醇溶液(pH5.5～6.0)的菌丝悬液(50～100毫克/毫升)中,用5～7％(W/V)对哈栖木霉中得到的细胞壁溶解酶,在每分钟100转的往复式摇床上,30℃下,摇4小时浸提。采用二相梯度离心,从剩余菌丝体碎片中分离出原生质体。1毫升1M硫酸镁同1毫升粗制原生质悬     

黑麦叶肉原生质体的分离、培养与幼小愈伤组织的形成

黑麦叶肉原生质体系用纤维素酶溶去壁后分离出来的。酶液混合液为:纤维素酶(2％)、果胶酶(0.5％)溶于0.65M的甘露醇中,保温在24～26℃。将生长5—6天的黑麦叶片在酶掖中处理2—3小时后,就可使90％以上的原生质体分离下来。将每毫升含有5×10~4—10~5密度的原生质体培养在液体培养基中(表1),其中附加2,4-D(1毫克/升)、6BA(0.5毫克/升)、CH(1克/升)和0.56M蔗糖。培养条件为光照800—2000米烛光,温度23—26℃。培养48小时后长出新壁。第3天出现第一次分裂,4—7天进行第二、三次分裂,9天后形成细胞团,25天后长成大细咆团。此后,定期加等体积的新鲜培养液,继续培养一个时期后便形成了幼小愈伤组织。     

碱催化合成4-甲基-2'-羟基-4'-甲氧基查尔酮及其晶体结构

探讨超声波辅助下用碱催化合成查尔酮的方法。常温超声波辅助下用碱催化使丹皮酚和4-甲基苯甲醛发生克莱森-斯密特反应,生成一种含有1,3-二苯基丙烯酮结构的丹皮酚衍生物:4-甲基-2'-羟基-4'-甲氧基查尔酮,产率高达71.57%,经过现代光谱学技术紫外、红外、质谱并结合核磁的氢谱、碳谱以及135°DEPT谱表征其结构。用X射线衍射技术分析该丹皮酚衍生物的单晶结构并确定其分子的构型和构象,4-甲基-2'-羟基-4'-甲氧基查尔酮属于单斜晶系中的P2(1)/n空点群,晶胞参数:a=1.1288(10)nm、b=0.6916(6)nm、c=2.0509(4)nm、α=90.0(8)°、β=109.8(8)°、γ=90(8)°,晶胞体积V为1.4056(5)nm3,密度Dc为1.272 mg/cm3。在超声波辅助下用碱催化可使丹皮酚和4-甲基苯甲醛通过克莱森-斯密特反应来合成含有1,3-二苯基丙烯酮结构的丹皮酚衍生物。     

响应面分析法优化乙酸乙酯萃取番茄红素条件的研究

采用响应面方法对番茄酱提取番茄红素过程中的乙醇预处理方法、萃取剂萃取时间等工艺条件进行了优化。采用Central Composite Design(CCD)设计法,对超声波提取法和微波提取法中的乙醇预处理、萃取剂萃取时间、超声波或微波萃取功率、溶剂量4个因素对番茄红素提取率的影响进行评价。结果显示,最佳提取方法为超声波提取法,无水乙醇∶番茄酱的2.05∶1(V/W);乙酸乙酯∶番茄酱10.1∶1(V/W);提取时间为490 s;超声波提取功率为405 W;提取率为94.42%。微波提取最佳方法为,无水乙醇∶番茄酱的2.11∶1(V/W);乙酸乙酯∶番茄酱10.1∶1(V/W);提取时间为372.6 s;微波提取功率为569.5 W;提取率为81.51%。     

快速提取高粱DNA的改良方法

DNA是生物遗传信息的载体,快速提取高纯净的、大量的DNA是外源DNA导入工作中重要的步骤。我们参考了许多前人的研究,在外源DNA导入高梁研究工作中,采用氯仿-异戊醇-核糖核酸酶改良法提取DNA,获得较纯净的、大量的大分子双链DNA。材料与方法材料:取高梁幼苗或孕穗期的幼穗、嫩茎、嫩叶等。方法:1、称取高梁材料冲洗干净后用吸水纸吸干,剪碎后置于冰箱内冷冻1-3小时。加入等量(W/V)研磨缓冲液(含0.45M氯化钠、0.04M柠檬酸三钠盐、0.1M乙二胺四乙酸二钠、1%十二烷基磺     

凤丹愈伤组织培养体系建立及丹皮酚含量测定

本文旨在建立凤丹(Paeonia ostii var.lishizhenii)愈伤组织培养及制取丹皮酚的技术体系,为细胞工程制药提供技术基础。凤丹去皮种子以70%乙醇(V/V)浸泡2.0 min和有效氯1.0%的二氯异氰尿酸钠溶液浸泡20 min,去污染率高达97.78%;剥取种胚接种在含6-苄氨基嘌呤1.5 mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸2.0 mg/L的MS培养基上,愈伤组织诱导率达90.00%;愈伤组织在含6-苄氨基嘌呤1.8 mg/L、萘乙酸0.6 mg/L、蔗糖30 g/L、水解酪蛋白0.4 g/L、琼脂5 g/L、pH 7.3的改良WPM培养基上暗培养25天,增殖倍数达3.53,褐化率为11.78%;基于天然产物丹皮酚含量和愈伤组织生长曲线,培养25天时丹皮酚含量达到最高,为最佳收获期。     

安徽省苔草属(指状苔草组)新分类群

本文发表了安徽省苔草属(Carex)指状苔草组(Sect.Digitatae)三新种:青阳苔草C.qingyangensis S.W.Su et S.M.Xu, 突喙苔草C.yuexiensis S.W.Suet S.M.Xu和矮秆苔草C.minuticulmis S.W.Su et S.M.Xu.     

马蹄荷化学成分研究

从马蹄荷(Exbucklandia populnea R.W.Br.)茎皮中首次分离得到6个化合物,通过波谱分析鉴定为β-谷甾醇(I)、胡萝卜甙(Ⅱ)、樱桃甙(Ⅲ)、芒花甙(Ⅳ)、圣草酚(V)和白藜芦醇(Ⅵ)。