人脐血CD133细胞的分离及其体外扩增的研究

目的:探讨免疫磁性纳米粒子分离人脐血CD133细胞的方法,了解分离出的CD133细胞在体外短期培养中的变化及其在体外扩增的可能性。方法:通过化学沉淀法制备具有超顺磁性的r-Fe_2O_3纳米粒子,在其表面包裹具有生物亲合性的二氧化硅,并在其表面通过化学修饰使其成为生物功能化的磁性纳米粒子。再通过一定的化学连接方法将单克隆抗体CD133连接到生物功能化的磁性纳米粒子表面使其成为免疫磁性纳米粒子,然后利用自制的免疫磁性纳米粒子从单个核细胞中分离出CD133细胞,并分别对单个核细胞和CD133细胞在体外短期培养中的动态变化进行了初步观察和比较。结果:经免疫磁性纳米粒子分离的脐血中CD133细胞平均数为(5±1．4)×10~7/ml,占单个核细胞数的(3±0．3)%;单个核细胞(对照组)和CD133细胞(实验组)分别进行红、粒系集落扩增培养14天、21天,实验组中两种造血祖细胞集落扩增倍数都明显高于对照组(P＜0．01)。结论:使用自制的免疫磁性纳米粒子能较好的分离脐血中的CD133细胞,分离与纯化出来的CD133细胞不仅细胞活力不受影响,而且与单个核细胞相比具有更强的增殖能力。     

茶多糖对小鼠骨髓造血细胞及免疫细胞的影响

目的:研究茶叶多糖对小鼠骨髓造血细胞表面抗原表达以及脾淋巴细胞增殖的影响.方法:应用纳米生物技术、免疫学技术和现代细胞生物学研究技术观察了靶细胞表面分化抗原和小鼠脾淋巴细胞的增殖活性.结果:FACS检测显示茶多糖对CD4+CDI9+CD119+的表达均有促进作用,CD34+细胞随培养时间的延长逐渐减少,各组数值与对照组比,均有明显差异(p＜0.01).MTT结果显示,荼多糖诱导的各组小鼠脾淋巴细胞OD值也明显上升(P＜0.01).结论:茶多糖可促进骨髓造血干细胞向祖细胞分化并促进淋巴细胞的增殖,显示了对造血和免疫的正调节作用.此结果将为进一步开发茶叶的保健功能和治疗作用提供理论依据.     

免疫荧光磁粒分离诱导CD34＋细胞转化为DC的实验研究

目的：建立一种磁荧光分离细胞的方法将CD34＋细胞转化为DC。方法：人脐带血单个核细胞,经免疫免疫荧光标记、外磁场分离CD34＋细胞,分别加入GM—CSF、IL-4和不同浓度黄芪多糖,诱导12—14天检测DC细胞数量和功能。结果：随黄芪多糖浓度的升高,DC细胞的百分率越大。结论：黄芪多糖可作为一种优良的诱导促进剂,联合使用GM-CSF和IL-4可将CD34＋细胞转化成为DC。     

CD45新型免疫荧光标记与检测方法研究

使用经生物修饰后的荧光纳米颗粒,探索了白细胞共同抗原CD45的新型荧光标记与检测方法。将联吡啶钌配合物[三(2,2-联吡啶)氯化钌,六水]为核,二氧化硅为外壳的荧光纳米颗粒用鼠抗人CD45Pur进行生物修饰后,对人体白细胞进行荧光标记,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测标记样品的细胞数目和荧光强度,结果表明,该新型荧光标记方法的灵敏度高,光学稳定性好,可准确有效地识别人体白细胞。     

粗根荨麻多糖对人脐血单核细胞源树突细胞表面分子表达的影响

研究粗根荨麻多糖在体外对人脐血单核细胞向树突细胞分化及成熟的作用。用淋巴细胞分离液分离脐血获得脐血单个核细胞,将获得的单核细胞分为3组,实验组:在含有粗根荨麻多糖(200 mg/L)的RPMI1640完全培养液中培养;阴性对照组:在无药物的RPMI1640完全培养液中培养;阳性对照组:在含有细胞因子(IL-4、GM-CSF、TNF-α)的RPMI1640完全培养液中培养;收集第10 d细胞用流式细胞术检测DCs成熟表型(CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR)。结果表明,与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组CD80、CD83、CD86、HLADR、CD1a的表达明显增加。粗根荨麻多糖可诱导脐血单核细胞分化成熟的DCs。     

生长因子诱导下人脐血单个核细胞向肝细胞的分化

目的：探讨在体外培养条件下人脐血单个核细胞向肝细胞的分化。方法：用FGF4、HGF诱导新鲜分离的脐血单个核细胞,并于培养16d通过RT—PCR、免疫细胞化学染色方法等方法检测肝细胞标志物的表达情况。结果：培养16d后。生长因子组贴壁的脐血MNCs中出现细胞体积增大、胞质丰富的双核细胞,RT—PCR和免疫细胞化学染色显示有肝细胞标志物的阳性表达（P〈0．05）。结论：在生长因子诱导下。脐血单个核细胞能够分化为类肝细胞。     

链霉亲和素磁珠的合成及其用于AMP适配子传感器的研究

γ-Fe2O3是一种磁性极高的磁氧铁,被广泛用于磁性分离,然而将γ-Fe2O3磁性纳米粒子用于适配子生物传感器来研究微生物细胞中的低相对分子质量产物却鲜有报道.经非水相法合成的γ-Fe2O3磁性粒子成晶效果好,粒径为19 nm,具有良好的磁力.通过正硅酸乙酯:TEOS(ethyl silicate;tetraethyl orthosilicate)进一步处理形成在水相中分散好、粒径均匀、磁性优良的核壳型磁性纳米微球.修饰上链霉亲和素纳米微球与生物素修饰的DNA连接起来,可用于探讨和研究微生物体内的底物AMP(Adenosine Monophosphate).基于适配子与底物结合发生构象转变的原理对该适配子传感器灵敏度、特异性及活体细胞的研究进行了探讨,实验结果表明:这种新型的AMP适配子生物传感器的检测下限达到了纳摩级,且具有非常好的底物特异性,在活体中的检测亦呈现一定趋势.     

LO-2细胞上清诱导人脐血干细胞向类肝细胞分化

目的：探讨体外培养人脐血单个核细胞向类肝细胞的分化。方法：收集Lo-2细胞培养上清液加入培养基培养分离出的脐血单个核细胞,连续lOd检测甲胎蛋白（AFP）的表达情况,细胞传代后无诱导剂（LO-2细胞培养上清液）情况下检测白蛋白（ALB）表达情况。结果：培养6d后心P出现阳性结果,细胞传代后在无诱导剂的情况下AI卫检测阳性。结论：在L0-2细胞上清的诱导下,脐血单个核细胞能够分化为类肝细胞。     

脐血CD-34单个核细胞来源间充质干细胞研究

目的 :探讨分离培养脐血CD-3 4 细胞来源间充质干细胞 (MSC)及研究其生物学特征。方法 :取足月妊娠健康产妇胎儿脐血 ,分离其中单个核细胞 (MNC) ,去除CD 3 4 细胞 ,体外用低糖型DMEM培养基培养。观察细胞形态、测定生长曲线、利用流式细胞仪对培养细胞进行表型测定、细胞周期分析、体外诱导分化实验以及检测造血因子的表达情况。结果 :脐血CD-3 4 细胞中可培养出间充质干细胞 ,可诱导向成骨和脂肪细胞分化并表达IL 6、SCF和SDF 1等造血生长因子。结论 :从足月妊娠健康产妇脐血CD-3 4 细胞可分离培养出间充质干细胞 ,具有与其它来源MSC类似的表型及分化潜能 ,在体外传代可保持其低分化状态并表达造血因子 ,可作为组织工程的种子细胞和具有促进造血作用     

用悬浮搅拌培养体系体外大量扩增人脐血造血干/祖细胞

目的 :建立一种简便、有效的脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增培养体系。方法 :淋巴细胞分离液分离的脐血单个核细胞在SCF ,IL - 3,IL - 6三种细胞因子的作用下 ,于悬浮搅拌培养体系中培养 ,分析其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数。结果 :脐血单个核细胞在悬浮搅拌培养体系中培养 12天后 ,其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数分别为 6 .31± 1.5 2 ,2 0 .6 3± 1.5 4和 7.11± 1.12。结论 :悬浮搅拌培养体系是脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增的有效培养体系。