洋葱伯克霍尔德菌致恶性肿瘤患者医院获得性感染的耐药性分析

目的分析我院恶性肿瘤患者医院获得性感染洋葱伯克霍尔德菌的临床特点及对常用抗菌药物的耐药性,为临床合理治疗提供依据。方法回顾性分析2011年1月至2013年12月,从我院恶性肿瘤感染患者送检的细菌培养标本;细菌鉴定用美国BD公司phoenix-100全自动细菌鉴定药敏系统,药敏试验采用纸片法,同时使用WHONET 5.6软件对相关资料进行统计。结果从检测部位分析主要分布在下呼吸道（74.1%）,其次为血液（9.4%）;药敏试验表明139株洋葱伯克霍尔德菌对米诺环素、氯霉素、美罗培南、头孢他啶和头孢哌酮/舒巴坦仍较敏感,可作为临床治疗洋葱伯克霍尔德菌感染的首选药物,其余15种抗菌药物的耐药率高达30.0%~100%。结论洋葱伯克霍尔德菌在恶性肿瘤患者中的耐药现象非常严重,临床应引起高度关注,及早进行微生物学检测,并根据药敏试验结果合理选用抗菌药物。     

2008-2012年484株肺炎克雷伯菌耐药性分析及耐药机制的初步研究

目的回顾性分析近五年来医院住院及门诊病原菌感染患者中肺炎克雷伯菌的分离趋势,探讨其对常规抗菌药物的耐药性变迁和相关耐药机制。方法采用法国梅里埃公司的Vitek-2 Compact全自动微生物分析仪进行细菌鉴定及药敏试验,部分菌株采用微量生化管鉴定,部分药敏试验采用琼脂扩散法（KB）,药敏结果判读按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）制定的标准判读,纸片法表型确证试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,EDTA双纸片法检测金属酶表型。结果五年间484株肺炎克雷伯菌部分药物耐药率正逐年上升,其常见药物平均耐药率如下：阿米卡星（3.0%）,复方新诺明（31.1%）,头孢三嗪（14.5%）,环丙沙星（18.7%）,氯霉素（21.6%）,特治星（6.3%）,头孢他啶（22.0%）,头孢噻肟（23.6%）,舒普深（4.2%）,呋喃妥英（26.9%）,美罗培南（2.1%）,ESBLs阳性99株（20.4%）,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型阳性5株,EDTA双纸片法检测金属酶表型阳性2株。结论部分药物耐药率逐年上升的有复方新诺明、环丙沙星、头孢他啶、头孢噻肟;耐药率较低的有美罗培南、阿米卡星、舒普深、特治星、头孢三嗪。应加强细菌耐药性监测,以及耐碳青霉烯酶筛查试验,为临床提供用药参考。     

183株志贺菌的菌群分布及药敏分析

目的了解本地区细菌性痢疾菌群分布及药敏情况。方法对183株志贺菌进行菌群分型及药敏分析。结果183株志贺菌有福氏志贺菌168株（91．8％）;宋内志贺菌9株（4．9％）;痢疾志贺菌4株（2．2％）;鲍氏志贺菌2株（1．1％）。药敏试验显示志贺菌对四环素、氨苄西林、复方新诺明耐药严重;对头孢他啶、阿米卡星、诺氟沙星比较敏感。结论本地区志贺菌主要是福氏志贺菌Ⅱa,应根据药敏试验结果选择合适抗菌药物。     

阑尾炎患者术后创口细菌感染特征及耐药性分析

目的探究急性阑尾炎患者术后切口细菌感染的细菌谱及药物敏感情况。方法选择2015年1月至2019年1月于我院行阑尾切除术后切口感染的66例患者作为研究对象,分析其伤口分泌物细菌培养结果和病原菌药敏情况。结果送检的66例标本中共有59例检出细菌,共分离病原菌15种,66株;其中有7例标本为两种细菌混合感染。检出的细菌中,革兰阳性菌39株,革兰阴性菌27株,其中革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、溶血葡萄球菌为主;革兰阴性菌以大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌为主。药敏试验显示,主要革兰阳性菌对头孢唑林、头孢拉定的敏感性较低,而对氨苄西林、阿莫西林、头孢他啶、头孢噻肟、美罗培南、亚胺培南以及利奈唑胺均具有较高的敏感性。主要革兰阴性菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢唑林、头孢拉定以及头孢噻肟均不敏感,对头孢他啶、美罗培南、亚胺培南的敏感率大于50.00%,具有较高的敏感性。结论对于阑尾炎术后切口感染的患者,应加强无菌操作和病房环境清洁,在药敏试验结果明确前,建议使用头孢他啶或相对应的第三代头孢菌素进行抗感染治疗。     

结核病房医院感染与抗生素使用相关性分析

目的：探讨临床抗菌药物应用与结核病房医院感染严重程度的相关性。方法：分析3年来我院结核病房医院感染209例共计221株病原菌,细菌鉴定采用法国梅里埃ATB细菌鉴定药敏分析仪,药敏试验联合应用微量测定法与K—B纸片法。结果：在221株病原菌中革兰阴性杆菌最多为112株,占50．7％,念珠菌75株,占33．9％。主要致病菌依次为白色念珠菌61株(27．6％),铜绿假单胞菌37株(16．8％),肺炎克雷伯菌25株(10．9％)。药敏试验表明细菌耐药明显增加,大多数革兰阴性杆菌对亚胺培南、阿米卡垦、头孢他啶较敏感,金黄色葡萄球菌对万古霉素100％敏感。每例结核病患者除抗结核药物外平均使用2．67种抗菌药物。结论：结核病房医院感染主要来源于内源性感染,其严重性与抗菌药物大量、重复使用密切相关。     

基于K-B法筛选异质性耐药菌株及其对 抗菌药物敏感试验结果的影响

目的探讨K-B法抑菌圈内出现细菌单菌落的可能原因及其对药敏结果的影响。方法采用头孢他啶和美罗培南药敏纸片对革兰阴性菌株进行筛选,对抑菌圈内出现的细菌单菌落进行鉴定及药敏试验,并与原鉴定结果和药敏结果进行比较。结果从痰液,尿液,血液等临床标本分离的2 500株革兰阴性杆菌。55株在头孢他啶或美罗培南纸片抑菌圈内会出现肉眼可见的细菌单菌落,其中26株经过了菌落纯培养,出现异质性耐药23株,污染3株,29株未经过菌落纯培养,出现异质性耐药14株,污染15株。头孢他啶纸片筛选试验中,共有28株抑菌圈中菌株与原鉴定结果一致,但耐药表型及具体药敏结果均发生改变,其中7株阴沟肠杆菌氨曲南和头孢曲松药敏结果均从敏感变成耐药。美罗培南纸片筛选试验中,共有9株抑菌圈中菌株与与原鉴定结果一致,其中7株铜绿假单胞菌氨曲南从敏感变为中介,亚胺培南从中介变为耐药。结论本研究中,1.48%革兰阴性杆菌分离菌株会出现异质性耐药,菌落传代纯培养可以有效降低药敏操作过程中的污染。异质性耐药菌株的存在以及实验操作过程中的可能污染对病原菌体外药敏结果的影响,需要引起临床,特别是临床微生物工作者的关注和重视。     

超广谱β-内酰胺酶细菌检测方法及与耐药质粒关系研究

目的：建立一种准确、快速、低廉的检测超广谱β-内酰胺酶（ESBL）细菌方法。方法：以克拉维酸为ESBL的抑制剂、3种第三代头孢菌素（TGC）和氨曲南为底物、某些药敏结果为补充,建立了多底物协同方法,并与E-test方法进行了对照,符合率80%,不符合菌株用质粒提取、细菌转化、接合传递试验进行验证。结果：对116株疑产ESBL细菌用多底物协同方法和E-test方向同时检测,前者比后者阳性率高。结论：该方法准确、快速、价格低廉,特别适于常规应用。     

90株肠杆菌属细菌诱导型β-内酰胺酶的检测与药敏结果

目的：了解肠杆菌属细菌诱导型β－内酰胺酶及药敏情况。方法：应用双纸片扩散法－分别采用亚胺培南和头孢西丁两种诱导剂以及头孢他啶和头孢噻肟两种目标物－测定90株肠杆菌属细菌的诱导型β－内酰胺酶,并用VITEK32－AMS测定该90株细菌对14种抗生素的耐药性。结果：亚胺培南组和头孢西丁组分别有51株和25株细菌产生诱导型β－内酰胺酶,头孢他啶组和头孢噻肟组分别有50株和30株细菌的诱导型β－内酰胺酶阳性,以头孢西丁,头孢噻吩,氨苄西林的耐药率最高,亚胺培南的耐药率最低。结论：亚胺培南优于头孢西丁,头孢他啶优于头孢噻肟,51株产酶组与39株非产酶组细菌的耐药差异无显著性。临床用药时应注意亚胺培南的高诱导性和体外药敏试验的局限性,提倡微生物实验室注重诱导型β－内酰胺酶的测定。     

发酵蓝靛果汁抑菌作用实验研究

目的：观察发酵蓝靛果汁对各种不同细菌的抑菌作用。方法：以药敏试验管碟法检测三种不同浓度发酵蓝靛果汁（蓝靛果原汁,75%蓝靛果汁,50%蓝靛果汁）对10种细菌的抑菌效果。结果：三种不同浓度的发酵蓝靛果汁对10种细菌均有明显的抑制作用。结论：发酵蓝靛果汁具有广谱抗菌作用。     

608份胆汁标本中分离细菌菌谱及其药敏结果分析

了解胆系感染常见的病原菌及其药敏情况,为抗菌治疗提供依据。采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2及API系统进行细菌鉴定,药敏试验采用K—B纸片法,应用WHONET5．4对药敏结果进行分析。608份胆汁标本中共分离细菌和真菌431株,其中革兰阴性杆菌320株（占74．2％）、革兰阳性球菌91株（占21．1％）、真菌20株（占4．6％）;排在前3位的菌株分别是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌。胆系感染以革兰阴性杆菌为主,尤以肠杆菌科细菌为主,上述细菌对碳青霉烯类、酶抑制剂类以及三代头孢菌素的敏感率均较高。     

ATB FUNGUS2法在念珠菌属和新生隐球菌抗真菌药敏试验中应用的评价

目的评价ATBFUNGUS2半固体培养基法在测定念珠菌属和新生隐球菌对4种常用抗真菌药物敏感性中的应用价值。方法利用CLSIM27．A2微量液基稀释法和ATBFUNGUS2法同时测定131株念珠菌和20株新生隐球菌对两性霉素B（AmB）、氟康唑（FLC）、氟胞嘧啶（5-Fc）和伊曲康唑（ITC）的敏感性。结果①两种方法对于AmB、5-FC、FLC和ITC的一致性分别为98％、89．4％、78．8％和78．1％;②所有受试菌株中两种方法的一致性为80％,但ATBFUNGUS2法将2／5株M27-A2法检查为FLC耐药的白念珠菌判断为敏感或剂量依赖,将8／10株M27-A2法检查为FLC剂量依赖的白念珠菌判断为敏感或耐药。③ATBFUNGUS2法中AmB的MIC值判读范围偏高,以致于实际工作中不能读出准确的值。结论ATBFUNGUS2半固体培养基法在测定念珠菌属和新生隐球菌对4种常用抗真菌药物的敏感性时不失为简单、快速而且重复性好的方法。     

壳聚糖对嘧啶核苷类新型抗真菌抗生素发酵液絮凝除菌作用的研究

利用天然高分子聚合物壳聚糖为絮凝剂去除抗生素发酵液中的菌体,结果表明:发酵液pH值、絮凝剂用量是影响絮凝效果的主要因素。最佳絮凝条件为pH7.0,絮凝剂用量0.4g/L,温度30℃,此时菌体絮凝率(FR%)可达70%以上。经絮凝预处理后,滤速为处理前的2.5倍,发酵液的效价由700 U/mL提高到860 U/mL。     

A rapid method for determination of in vitro susceptibility to antibiotics with a bulk acoustic wave bacterial growth biosensor

A novel bulk acoustic wave (BAW) bacterial growth biosensor was developed to study in vitro susceptibility by continuous monitoring of disturbances of bacterial growth at low antibiotic concentrations, followed by the accurate and rapid estimation of growth kinetic parameters and minimum inhibitory concentrations (MICs). The susceptibilities of bacteria, e.g. Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Pr. morganii and Pr. mirabilis , to various antibiotics, e.g. penicillin, streptomycin, gentamicin and cefotaxime, were investigated, respectively, and the MICs were rapidly determined with a higher reproducibility than the conventional broth micro-dilution technique (BMDT). The effects of cell constant of conductivity electrode, pH and temperature on bacterial growth and biosensor signals were discussed in detail. The proposed method offers an effective alternative to the conventional methods.     

志贺菌流行株药物敏感性及质粒图谱分析

目的：分析志贺菌流行株的质粒图谱及其与细菌药物敏感性的相关性。方法：从菌痢患者粪便标本中分离6株 福氏志力和4株宋内志贺菌,分别对其质粒图谱与药物敏感性进行检测和对其相关性进行分析。结果：不同菌株的质粒图谱具有明显的差异,各菌株的质粒图谱与其对头孢三嗪、头孢唑林、环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素的耐药特性无明显相关性。结论：获自患者的福氏志贺菌和宋内志贺菌具有不同的质粒图谱以及抗菌药物敏感性,提示在我市引起菌痢的志贺菌具有不同的来源。     

志贺菌的质粒图谱分析

目的：分析志贺菌的质粒图谱及其与细菌药物敏感性的相关性。方法：从菌痢患者粪便标本中分离6株福氏志贺菌和4株宋内志贺菌,分别对其质粒图谱及药物敏感性进行分析。结果：不同菌株的质粒图谱具有明显的差异,但福氏志贺菌的5株以及宋内志贺菌的3株具有分子量23Kb的质粒带。各菌株的质粒图谱与其对头孢三嗪,头孢唑啉,环丙沙星,诺氟沙星,氯霉素的耐药特性无明显相关性。结论：获自患者的福氏志贺菌和宋内志贺菌具有不同的质粒图谱以及抗菌药物敏感性,提示在我市引起菌痢的志贺菌具有不同的来源。     

Characterization of ceftazidime resistance mechanisms in clinical isolates of Burkholderia pseudomallei from Australia

Burkholderia pseudomallei is a gram-negative bacterium that causes the serious human disease, melioidosis. There is no vaccine against melioidosis and it can be fatal if not treated with a specific antibiotic regimen, which typically includes the third-generation cephalosporin, ceftazidime (CAZ). There have been several resistance mechanisms described for B. pseudomallei, of which the best described are amino acid changes that alter substrate specificity in the highly conserved class A β-lactamase, PenA. In the current study, we sequenced penA from isolates sequentially derived from two melioidosis patients with wild-type (1.5 μg/mL) and, subsequently, resistant (16 or ≥256 μg/mL) CAZ phenotypes. We identified two single-nucleotide polymorphisms (SNPs) that directly increased CAZ hydrolysis. One SNP caused an amino acid substitution (C69Y) near the active site of PenA, whereas a second novel SNP was found within the penA promoter region. In both instances, the CAZ resistance phenotype corresponded directly with the SNP genotype. Interestingly, these SNPs appeared after infection and under selection from CAZ chemotherapy. Through heterologous cloning and expression, and subsequent allelic exchange in the native bacterium, we confirmed the role of penA in generating both low-level and high-level CAZ resistance in these clinical isolates. Similar to previous studies, the amino acid substitution altered substrate specificity to other β-lactams, suggesting a potential fitness cost associated with this mutation, a finding that could be exploited to improve therapeutic outcomes in patients harboring CAZ resistant B. pseudomallei. Our study is the first to functionally characterize CAZ resistance in clinical isolates of B. pseudomallei and to provide proven and clinically relevant signatures for monitoring the development of antibiotic resistance in this important pathogen.     

Rapid antimicrobial susceptibility testing and β-lactam-induced cell morphology changes of Gram-negative biological threat pathogens by optical screening

Background

For Yersinia pestis, Burkholderia pseudomallei, and Burkholderia mallei, conventional broth microdilution (BMD) is considered the gold standard for antimicrobial susceptibility testing (AST) and, depending on the species, requires an incubation period of 16–20?h, or 24–48?h according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) guidelines. After a diagnosis of plague, melioidosis or glanders during an outbreak or after an exposure event, the timely distribution of appropriate antibiotics for treatment or post-exposure prophylaxis of affected populations could reduce mortality rates.

Results

Herein, we developed and evaluated a rapid, automated susceptibility test for these Gram-negative bacterial pathogens based on time-lapse imaging of cells incubating in BMD microtitre drug panels using an optical screening instrument (oCelloScope). In real-time, the instrument screened each inoculated well containing broth with various concentrations of antibiotics published by CLSI for primary testing: ciprofloxacin (CIP), doxycycline (DOX) and gentamicin (GEN) for Y. pestis; imipenem (IPM), ceftazidime (CAZ) and DOX for B. mallei; and IPM, DOX, CAZ, amoxicillin-clavulanic acid (AMC) and trimethoprim-sulfamethoxazole (SXT) for B. pseudomallei. Based on automated growth kinetic data, the time required to accurately determine susceptibility decreased by ≥70% for Y. pestis and?≥?50% for B. mallei and B. pseudomallei compared to the times required for conventional BMD testing. Susceptibility to GEN, IPM and DOX could be determined in as early as three to six hours. In the presence of CAZ, susceptibility based on instrument-derived growth values could not be determined for the majority of B. pseudomallei and B. mallei strains tested. Time-lapse video imaging of these cultures revealed that the formation of filaments in the presence of this cephalosporin at inhibitory concentrations was detected as growth. Other β-lactam-induced cell morphology changes, such as the formation of spheroplasts and rapid cell lysis, were also observed and appear to be strain- and antibiotic concentration-dependent.

Conclusions

A rapid, functional AST was developed and real-time video footage captured β-lactam-induced morphologies of wild-type B. mallei and B. pseudomallei strains in broth. Optical screening reduced the time to results required for AST of three Gram-negative biothreat pathogens using clinically relevant, first-line antibiotics compared to conventional BMD.

     

根际放线菌I06—03431产生的核苷类抗生素3431的研究

在抗稻瘟菌农用抗生素的筛选过程中,从60多种中药植物根际土壤获得的放线菌中发现,放线菌106—03431的发酵液具有强抗稻瘟菌的活性。经色谱分离纯化,获得活性成分3431,经光谱学数据分析,证明3431为已知核苷类抗生素,丰加霉素（Toyocamycin）：进一步生物活性研究表明,0．005μg／mL的3431能够抑制稻瘟菌孢子萌发和菌丝生长。另外,3431还具有与植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤（6-BA）一样的抑制拟南芥根生长的活性。     

猪苓发酵液抑菌活性物质的性质研究

研究猪苓发酵液中抑菌活性成分的性质,以期将为猪苓的药用机理的研究提供部分理论依据。以大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、热带假丝酵母、酿酒酵母、小麦赤霉为靶标菌,研究发酵液的抑菌作用;用不同极性有机溶剂萃取活性物质,检测萃取液抑菌效果;并探索了不同温度和pH下对发酵液活性的影响;利用捷克八溶剂系统和紫外扫描对物质类型进行了初步确定。结果表明：猪苓发酵液对细菌有抑菌活性;活性物质对酸碱敏感且热不稳定,可被乙酸乙酯、三氯甲烷、正丁醇等有机溶剂萃取,随萃取极性增大萃取能力增强;紫外扫描其萃取浓缩液,表明在λ210nm处有一典型吸收峰,与酯肽类抗菌素的紫外图谱相似;捷克八溶剂系统纸层析结果显示抑菌物质为非水溶性Ⅱ型抗生素。猪芩发酵液中存在抗生素类物质,但稳定性差。在猪苓的以多糖为主要药用成分的应用过程中不发挥重要作用。     

一种肠道硫酸盐还原菌的增菌培养基

目的针对已经分离、纯化的肠道硫酸盐还原菌,建立一种能快速、高效地培养菌体的培养基。方法比较营养丰富的GAM肉汤与常用于培养硫酸盐还原菌的选择性培养基Postgate的培养效果,摸索在GAM肉汤中添加不同浓度的硫酸盐对两种肠道硫酸盐还原菌-Desulfovibrio desulfuricans和Desulfovibrio intestina—zis的培养效果。确定效果最佳的改良GAM培养基配方,并测定在该培养基中D．desulful＇icans的生长曲线。结果与Postgate培养基相比,GAM肉汤能在2d内快速培养D．desulfugicans,但培养至6d时细菌数量大幅降低。在GAM肉汤中添加Na2SO4与FeSO4,在实验浓度范围内,均显著地促进硫酸盐还原菌的生长。在此基础上改良GAM肉汤培养基,培养得到的细菌数量较GAM肉汤显著提高。D．desulfuricans的生长曲线显示,2d时细菌生长达到最高峰,数量可达3．5×10^7 CFU／mL;培养6d,细菌数量为7．3×10^6 CFU／mL。结论基于GAM肉汤改良而得到的增菌培养基,能快速、高效地培养肠道硫酸盐还原菌,为后续进一步研究肠道硫酸盐还原菌的生理功能提供了支持。