用重组Epstein-Barr病毒早期蛋白P83为抗原检测鼻咽癌病人血清中IgA抗体

以重组EB病毒早期蛋白P83为抗原,用Western blot检测了135份鼻咽癌病人和100份正常人血清中IgA/P83抗体,阳性率分别为96％和0,以常规的间接免疫酶法检测这两种血清中IgA/EA抗体,阳性率分别为71％和0。IgA/P83抗体的几何平均滴度较IgA/EA高4倍以上。这表明,用Western blot查IgA/P83敏感、特异,可替代用间接免疫酶法查IgA/EA用于鼻咽癌的早期诊断。     

用改进的测定Epstein-Barr病毒早期抗原IgA的方法为2054人检查鼻咽癌

应用测定Epstein-Barr病毒(EB病毒)IgA/EA抗体的改进方法(见病毒学报,2:372,1986).将待检血清用与抗人IgG血清或葡萄球菌菌体蛋白(SPA)吸附,除去了竞争性IgG类抗体,增加了血清中IgA抗体与抗原相结合的机率,从而提高了免疫酶法的敏感性和鼻咽癌的检出率。用此法我们检查了来本实验室检查EB病毒相关抗体的2045人,大部份是进行体格检查、无自觉症状的健康人,其查出IgA/EA抗体阳性者42人,进一步做病理检查证实27人患鼻咽癌,其中属临床Ⅰ期者10人,Ⅱ期10人,Ⅲ期6人,     

检测EB病毒TK激酶抗体方法的建立及其在鼻咽癌诊断中的应用

目的:建立检测鼻咽癌(NPC)患者血清中EB病毒TK激酶的酶免疫测定(EIA)方法,用于筛选和辅助诊断早期NPC患者。方法:用基因工程高效表达的EB病毒TK激酶作为包被抗原,建立EIA检测方法,检测NPC患者和对照血清中的TK/IgG抗体。结果:在NPC患者血清中检出了特异的对EB病毒TK激酶的IgG抗体,而正常人血清中为抗体阴性。结论:首先建立了简便、快速、特异和敏感的早期诊断NPC的EIA方法,并作为我公司产品扩展应用。     

用重组痘苗病毒感染动物细胞表达的Epstein-Barr病毒膜抗原检查IgA/MA抗体

用EB病毒膜抗原基因重组的痘苗病毒感染动物细胞,其细胞表面可表达EB病毒膜抗原,以此膜抗原作为诊断抗原检测血清中IgA/MA抗体,明显优于常用的B95-8细胞表面膜抗原,从而为研究人群血清抗体反应与鼻咽癌的关系,为鼻咽癌的诊断和普查开辟了新的途径。     

EB病毒DNA聚合酶基因的表达与纯化及其在鼻咽癌病人诊断中的应用

以Epstein-Barr病毒(EBV)DNA聚合酶为抗原,建立了简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌诊断方法.构建原核表达载体pRSET-DNA聚合酶及其亚克隆pRSET-A1和pRSET-A2,在BL21(DE3)中表达的产物,经Western-blot检测其抗原性并用于检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人血清中的抗体.在NPC病人血清中存在抗EB病毒DNA聚合酶的IgG抗体,并证明DNA聚合酶的抗原性主要集中于后2/3片段(A2)上.Western-bolt检测A2/IgG抗体的敏感性和特异性分别为80%和100%.对46份NPC病人血清和46份非NPC头颈癌症病人血清,用ELISA检测A2/IgA,敏感度为89%,特异度为93%.初步建立了ELISA检测NPC病人血清中A2/IgG抗体的方法,获得较高的敏感性和特异性.     

鼻咽癌患者血清中抗Epstein-Barr病毒早期和晚期膜抗原抗体的检测

对Epstein-Barr(EB)病毒抗原的研究,发现有淋巴细胞确定的膜抗原(Lydma)、早期抗原(EA)、壳抗原(VCA)、核抗原(EBNA)、早期膜抗原(EMA)和晚期膜抗原(LMA)。除了Lydma抗原外,鼻咽癌患者对上述抗原均产生相应的IgG和IgA抗体。因而研究这些抗体,对阐明EB病毒与鼻咽癌的关系及鼻咽癌的早期诊断都十分有价值。     

广西梧州市EB病毒IgA/VCA抗体阳性者的追踪观察

在广西梧州市对20,726人进行EB病毒IgA/VCA抗体血清学普查和4年追踪观察,共发现35例鼻咽癌病人,其中早期病人占91.5％。同期门诊查出的1,036例鼻咽癌中,早期病人仅占31.8％。在鼻咽癌确诊前16～41个月即可检出IgA/VCA抗体。说明EB病毒与鼻咽癌的发生关系密切,血清学普查和追踪观察对本病的早期诊断十分重要。     

应用纯化的重组Epstein-Barr病毒早期抗原建立检测鼻咽癌病人血清IgA/EA抗体的ELISA方法

利用凝胶和离子交换柱(Mono Q)两次层析,将大肠杆菌表达的EB病毒早期抗原P138片段多肽纯化。以此P138为抗原,增加鼠抗人IgA单克隆抗体以扩大IgA的反应,建立了三步ELISA法。用本法检查了100例鼻咽癌病人和63例正常人血清中抗EB病毒IgA/EA抗体,病人血清的阳性检出率为86％,正常人有3例阳性(4.7％)。此结果表明,三步ELISA法较常用的间接ELISA法(阳性检出率为71％)敏感。     

鼻咽癌患者血清中Epstein-Barr病毒早期抗原特异性抗体的IgA类抗独特型抗体的检测

用3.5％PEG(MW6000)预先处理被检血清以除掉免疫复合物及干扰抗原之后,用新建立的ELISA方法测定血清中Epstein-Barr病毒早期抗原特异性抗体的抗独特型(Anti-Id)抗体。67例鼻咽癌患者中,80％IgA类的Anti-Id抗体阳性(P/N值≥2.1),而56例正常人群除1例阳性外,其余均阴性。测定46例鼻咽癌患者血清EA/IgA滴度与Anti-Id的关系表明,Anti-Id抗体P/N值与IgA/EA滴度呈负相关(r=-0.6,P<0.001)。12例鼻咽癌病人血清中EA抗体的IgG类Anti-Id抗体则与正常人无显著差别。     

4号染色体短臂微卫星多态性与鼻咽癌相关性的研究

鼻咽癌（NPC）是一种多因素复杂疾病。其发病过程涉及EB病毒慢性感染、环境致癌因素及宿主基因之间的相互作用。在这一过程中,那些宿主基因在EB病毒感染及鼻咽癌的发生发展中起了关键作用仍不清楚。 本研究的目的是发现与鼻咽癌发生发展中两个关键步骤相关的遗传变异,即EB病毒持续性感染鼻咽部上皮细胞和鼻咽癌的形成。我们在广西梧州市及苍梧县鼻咽癌高发区收集汉族鼻咽癌患者350例、EB病毒壳抗原IgA抗体阳性者(IgA/VCA+)288例和EB病毒壳抗原IgA抗体阴性者(IgA/VCA-)346例。对先前鼻咽癌家系研究显示的鼻咽癌易感区4号染色体短臂（4p15.1-q12）进行了微卫星精细扫描,在 18 Mb的范围内选择34个微卫星标记,包括319个等位基因,对其进行基因分型。比较分析NPC 组和IgA/VCA+组等位基因频率结果显示,9个等位基因与鼻咽癌呈相关,其中5个为易感等位基因（OR=1.51-5.36, p=0.01-0.03）,4个为限制性等位基因（OR值为0.3-0.71, p值为0.02-0.045）。比较分析IgA/VCA+组和IgA/VCA-组及比较所有IgA/VCA+者（包括NPC患者）和IgA/VCA-者等位基因频率的结果显示,12个等位基因与EB病毒壳抗原IgA抗体持续存在相关,其中3个在两组比较中均呈显著相关。等位基因 D4S3241-136 (p=0.004, OR=1.9, 95%CI=1.2-3.0) 和D4S3347-213 (p=0.001, OR=1.6, 95%CI=1.2-2.1) 可增加EB病毒 IgA/VCA抗体形成的危险,为易感基因;而等位基因D4S174-202 (p=0.001, OR=0.5, 95%CI=0.3-0.7) 可限制IgA/VCA抗体的形成。 但上述结果经多因素比较校正后,均失去相关性。我们的研究结果不能 确定该区域与鼻咽癌的形成相关,而另一个家系研究的结果也未得出相关的结果,但本研究却提供了进一步发现鼻咽癌相关基因的研究模式。有关4号染色体短臂 与EB病毒慢性持续感染及鼻咽癌的形成仍值得进一步深入研究。     

应用基因重组Epstein-Barr病毒早期抗原P83蛋白检测鼻咽癌患者血清中的IgA/EA抗体

将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94％;ELISA法阳性检出率为88％;而IE法阳性率为64％。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4％、3％及2％。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87％,ELISA法阳性检出率为77％。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。     

抗人IgA多克隆抗体ELISA法的建立和应用

用马抗人IgA抗体ELISA法,结合血清预处理,检测鼻咽癌(NPC)患者,其他肿瘤病人和正常人血清中的IgA/EA抗体结果表明,95.1％NPC病人阳性(抗体几何平均滴度为294.1),而健康对照组仅2.4～4.5％,ELISA与免疫酶染色(IE)法测得的血清抗体滴度之间有一定的相关性。但前者比后者测得的几何平均滴度(GMT)高9倍,本法敏感、特异、快速、简便,适用于现场大规模普查。     

血清中Epstein-Barr病毒膜抗原IgA抗体检测法的改进及应用

用萄葡球菌菌体A蛋白(SPA)预先处理被检血清,以去除抗体IgG部份的竞争性结合,提高了间接免疫荧光法检查鼻咽癌病人血清中EB病毒膜抗原IgA(IgA/MA)抗体的敏感性及特异性,检查48例鼻咽癌病人血清IgA/MA抗体,阳性率为100％,血清几何平均滴度为141;40例其它恶性肿瘤病人和46例正常人都检不出IgA/MA抗体,免疫荧光法测得IgA/MA抗体阴性的6例鼻咽癌病人血清,SPA吸收后呈阳性反应,此改进方法可用以追踪观察鼻咽癌病的病程及预后。     

用PO4细胞为靶细胞检测人血清中Epstein-Barr病毒IgA/MA抗体以诊断鼻咽癌

近年来,常用未经丙酮固定的、由丁酸和巴豆油激活的B95-8细胞或P3HR-1细胞为靶细胞,检测人血清中EB病毒IgA/MA抗体以早期诊断鼻咽癌,效果良好。但由于B95-8细胞含有多种EB病毒抗原,不能用丙酮固定,需多次离心沉淀,在浮悬状态下检测,技术比较复杂。     

测定Epstein-Barr病毒IgA/EA抗体的改进方法

用免疫酶法(IE)检查鼻咽癌(NPC)病人血清中IgA/EA抗体,阳性率为73％,几何平均滴度为25,将血清用马抗人IgG血清或葡萄球菌菌体A蛋白(SPA)处理后,以除去竞争性IgG类抗体后,阳性率可增高至92％,几何平均滴度提高到89,有15例NPC病人血清,经马抗人IgG血清处理前IgA/EA抗体为阴性,处理后均呈阳性反应。     

酶标记抗人IgA单克隆抗体及其在Epstein-Barr病毒免疫酶技术中的应用

继成功地建立了4株分泌高效价抗人IgA McAb杂交瘤细胞株后,我们将制备出的McAb用于改进鼻咽癌早期诊断中的IgA/VCA和IgA/EA免疫酶技术,并探索了高效价抗人IgA McAb的纯化、辣根过氧化物酶(HRP)标记及有效保存的方法,结果令人满意。 采用饱和硫酸铵沉淀法及Sephadex A-50吸附法对来自细胞培养上清液和腹水的